目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重...目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重组体与pSV-β-Galactosidase Control Vector共转染Hela细胞,通过luc活性分析检测基因的转录活性;采用凝胶滞留和DNA足纹技术,确定DNA调节序列和Hela细胞核蛋白的相互作用。结果:T5的相对活性低于T3[(9.98±1.40)%和(7.76±1.05)%,P<0.05];凝胶滞留实验表明与核蛋白作用后,T3和T5在凝胶上形成一条迁移率相同的滞留区带;T5有2个反式作用因子结合位点,CGCGCCCGCGGGCGGCGGC和GGGCGGCTGGTGGCGGCTG,与T3相同。结论:尽管T5的变异未改变Hela细胞核蛋白提取物的DNA结合位点,但是它引起的转录活性的下降可能是携带者2型糖尿病发生发展的重要因素。展开更多
基金This project was supported by National Natural Science Foundation of China (39470340)
文摘目的:研究2型糖尿病患者胰岛素受体底物-1(IRS-1)基因5′-调控区CAG富含区的一种变异对基因表达活性的影响及其机制。方法:构建荧光素酶(luciferase,luc)报告基因重组体: pGL2.P-T3和pGL2.P-T5,T3和T5分别为野生型和缺失型等位基因。重组体与pSV-β-Galactosidase Control Vector共转染Hela细胞,通过luc活性分析检测基因的转录活性;采用凝胶滞留和DNA足纹技术,确定DNA调节序列和Hela细胞核蛋白的相互作用。结果:T5的相对活性低于T3[(9.98±1.40)%和(7.76±1.05)%,P<0.05];凝胶滞留实验表明与核蛋白作用后,T3和T5在凝胶上形成一条迁移率相同的滞留区带;T5有2个反式作用因子结合位点,CGCGCCCGCGGGCGGCGGC和GGGCGGCTGGTGGCGGCTG,与T3相同。结论:尽管T5的变异未改变Hela细胞核蛋白提取物的DNA结合位点,但是它引起的转录活性的下降可能是携带者2型糖尿病发生发展的重要因素。
文摘外体(exosome)是由细胞内多泡体(multivesicular body,MVB)与细胞膜融合而释放到细胞外的纳米大小的膜性小囊泡,具有一定的免疫调节功能。造血细胞以及非造血细胞都可以分泌外体。肿瘤来源的外体(tumor-derived exosome,TEX)存在于肿瘤细胞培养上清液、肿瘤患者血浆或者恶性渗出液中,包含天然的肿瘤相关抗原,并能将其呈递给T细胞,可有效地促进细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的活化,产生抗瘤免疫。近年来,也有文献报道外体可诱导免疫耐受,甚至产生免疫抑制作用而使得肿瘤逃逸宿主免疫系统对它的免疫监视,并能促进肿瘤细胞的增殖。这些功能的不一致与外体的表型密切相关。
