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Wnt3a和Activin A共同促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化 被引量:6
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作者 周静 李进 +1 位作者 林戈 卢光琇 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第4期37-41,共5页
【目的】研究Wnt3a和ActivinA存限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎于细胞中,加入25ng/mLWnt3a和100ng/mLActivinA,共同作用不同时间(1~4d),收集不同作用时间点(0,1,2,3,4,5d... 【目的】研究Wnt3a和ActivinA存限定性内胚层诱导中共同作用的最佳时间窗。【方法】在无饲养层体系培养的人胚胎于细胞中,加入25ng/mLWnt3a和100ng/mLActivinA,共同作用不同时间(1~4d),收集不同作用时间点(0,1,2,3,4,5d)细胞,对原条、内中胚层前体标记Brachyury及限定性内胚层标记Sox17分别进行免疫荧光染色,统计阳性细胞总数,计算阳性细胞率。以看家基阕β-actin作为对照,采用RTPCR方法对原肠作用基因(Goosecoid(GSC)、Mixll)及三胚层发育相关基因(内胚层基因Sox17、Foxa2,内中胚层前体基因Braarchyury,中胚层基因Flk-1,外胚层基闪Pax6,胚外内胚层基因Sox7、CDX2)的表达进行检测。【结果]Wnt3a与ActivinA共同作用1~4d,均能获得限定性内胚层细胞,其中二者共同作用1d分别能获得(78.9±7.3)%Brachyury阳性细胞和(85.2±3.8)%的Sox17阳性细胞。RTPCR结果显示,在Wnt3a与ActivinA共同作用下,原肠作用基因及三胚层发育相关基因表达的时间有差异。【结论】Wnt3a和ActivinA共同作用1d,是有效促进人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的最佳作用时间窗。 展开更多
关键词 人胚胎干细胞 限定性内胚层 WNT3A ACTIVIN A
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粒-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠体内树突状细胞增殖和活化的影响 被引量:2
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作者 刘薇 李传昶 卢光琇 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期32-35,共4页
目的:研究粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在体内对树突状细胞(DC)增殖和活化的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为GM-CSF处理组和对照组,致死量γ射线照射后移植入绿色荧光蛋白(GFP)标记的骨髓来源的造血干细胞(HSC),GM-CSF处理组隔天... 目的:研究粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在体内对树突状细胞(DC)增殖和活化的影响。方法:将Balb/c小鼠随机分为GM-CSF处理组和对照组,致死量γ射线照射后移植入绿色荧光蛋白(GFP)标记的骨髓来源的造血干细胞(HSC),GM-CSF处理组隔天皮下注射0.1μg直至处死,对照组隔天皮下注射PBS。应用流式细胞仪分析和比较两组移植后1,2,3及4周小鼠脾脏内DC的数目、活化状态和随时间变化的DC动力学。结果:移植后各时间点GM-CSF处理组小鼠脾脏内DC数目明显高于对照组(均P<0.05),其中最大高出倍数为5倍;GM-CSF处理组DC的CD40,CD80和CD86均高于处理组;骨髓移植后第1周,小鼠脾脏内即出现HSC来源的DC,第2周数目开始上升,至第3周达到高峰,第4周开始下降。结论:GM-CSF对体内HSC分化为DC具有促进作用,并且可促进体内DC的成熟与活化。 展开更多
关键词 造血干细胞 树突状细胞 粒-巨噬细胞集落刺激因子
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Activin A特异性对人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化的促进作用 被引量:1
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作者 孙懿 周静 +1 位作者 林戈 卢光琇 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第6期13-18,共6页
【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞(hESCs)向限定性内胚层(DE)诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,9... 【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞(hESCs)向限定性内胚层(DE)诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96,120h的细胞,用实时荧光定量RT-PCR检测原条标记Gsc和Mixl1、中内胚层共同前体标记Brachyury、内胚层标记Foxa2和Sox17、中胚层标记Flk1、外胚层基因Pax6、多能性相关基因Oct4与Nanog表达水平的变化,用细胞免疫荧光检测Brachyury和Sox17蛋白表达水平的变化。【结果】在人饲养层(HEF)培养体系上,高浓度Activin A能更快地促进中内胚层基因的表达并提高其表达水平;Brachyury和Sox17蛋白的细胞免疫荧光检测表明,Activin A诱导12和48h就可检测二者的表达明显增加,且二者的表达水平分别在诱导48和96h时达到高峰;hESCs高效分化为限定性内胚层细胞,DE细胞分化率为(81.7±5.4)%,并且体外的内胚层分化过程遵循从原条开始、经过中内胚层共同前体阶段、再到内胚层的发育过程,与体内发育规律相似。【结论】Activin A能特异性地诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层分化,转录调控Brachyury和Sox17蛋白的表达。 展开更多
关键词 干细胞工程学 人胚胎干细胞 限定性内胚层 ACTIVIN A
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不同剂量碱性成纤维细胞因子对人类胚胎干细胞生长、凋亡和DNA完整性的影响
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作者 罗树伟 林戈 +3 位作者 孙争 谢平原 刘天成 卢光琇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期2137-2139,共3页
目的探讨碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)浓度对人类胚胎干细胞(human embry-onicstem cells,hESCs)特性的影响。方法建立化学限定性hESCs培养体系,以有饲养细胞培养体系作为参照,比较4、40ng/ml和100ng/mlbFG... 目的探讨碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)浓度对人类胚胎干细胞(human embry-onicstem cells,hESCs)特性的影响。方法建立化学限定性hESCs培养体系,以有饲养细胞培养体系作为参照,比较4、40ng/ml和100ng/mlbFGF对hESCs多能性标记、细胞周期、细胞凋亡和DNA完整性的影响。结果①低浓度bFGF(4ng/ml)足以维持hESCs在化学限定性培养基(基础培养基DMEM/F12,N2,B27,简称NB体系)中培养;②bFGF可以抑制hESCs细胞凋亡,且具有剂量依赖性,而对hESCs细胞周期没有影响;③bFGF有助于hESCsDNA完整性维持,在NB体系加入4ng/mlbFGF时,hESCs在DNA水平上存在75个异常区域,而在加入40ng/mlbFGF时,只存在1个异常区域。结论高剂量bFGF有助于hESCs体外快速扩增和hESCsDNA完整性维持。提高bFGF浓度为hESCs体外培养所必需。 展开更多
关键词 人类胚胎干细胞 饲养细胞 碱性成纤维细胞生长因子 比较基因组杂交
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无饲养细胞无外源因子条件下高克隆密度维持人类胚胎干细胞自身未分化状态(英文)
5
作者 罗树伟 林戈 +3 位作者 孙真 谢平原 刘天成 卢光琇 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1123-1128,共6页
目的:建立人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养体系。方法:比较hESCs克隆种植密度对其无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养的影响,以及克隆种植密度对hESCs培养体系骨形蛋白(bone morp... 目的:建立人类胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养体系。方法:比较hESCs克隆种植密度对其无饲养细胞无外源性细胞因子体外培养的影响,以及克隆种植密度对hESCs培养体系骨形蛋白(bone morphology protein,BMP)样诱导活性的影响。结果:在没有外源性细胞因子条件下,高克隆密度(34克隆/cm2)可以维持hESCs处于未分化状态,而低克隆密度不能维持hESCs处于未分化状态。同时,NB体系BMP样诱导活性可以被hESCs克隆种植密度所改变,高hESCs克隆密度时,培养基具有高的BMP样诱导活性。结论:高hESCs克隆种植密度可以改变自身生长的微环境,可以维持自身未分化状态,这为阐明hESCs自身未分化状态机制和简化hESCs无饲养培养体系提供了新的思路。 展开更多
关键词 人类胚胎干细胞 饲养细胞 自分泌
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卵巢早衰候选基因的突变研究进展 被引量:4
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作者 谭跃球 程德华 卢光琇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1467-1471,共5页
卵巢早衰病因复杂,多数病例病因不明。在已知的病因中,遗传因素非常重要。卵巢早衰不但可导致不孕症,患者的低雌激素水平还增加了患骨质疏松症和冠心病的危险。目前临床上的主要治疗措施包括激素替代治疗和供卵治疗不孕症等,但效果都不... 卵巢早衰病因复杂,多数病例病因不明。在已知的病因中,遗传因素非常重要。卵巢早衰不但可导致不孕症,患者的低雌激素水平还增加了患骨质疏松症和冠心病的危险。目前临床上的主要治疗措施包括激素替代治疗和供卵治疗不孕症等,但效果都不理想。鉴定卵巢早衰的致病基因是从根本上治疗和预防该病的基础。目前已发现在X染色体上和常染色体上多个基因与之相关,文章综述了近年来对卵巢早衰候选基因的突变分析情况,旨在从分子水平分析研究卵巢早衰的发病机制提供基础。 展开更多
关键词 卵巢早衰 候选基因 突变分析
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体外受精助孕并发异位妊娠92例分析 被引量:16
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作者 肖红梅 龚斐 +2 位作者 毛增辉 张红 卢光琇 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期584-587,共4页
目的:探讨体外受精助孕中异位妊娠的发生率与影响因素。方法:对接受体外受精(invitro fertilization and embryo transfer,IVF)、单精子卵胞浆内注射(intracytopla smicsperm injection,ICSI)、冻融胚胎移植(frozen-thawing embryo tran... 目的:探讨体外受精助孕中异位妊娠的发生率与影响因素。方法:对接受体外受精(invitro fertilization and embryo transfer,IVF)、单精子卵胞浆内注射(intracytopla smicsperm injection,ICSI)、冻融胚胎移植(frozen-thawing embryo transfer,FET)助孕后发生异位妊娠病例的助孕指征、助孕方式、异位妊娠类型等进行回顾总结。结果:6007人次接受助孕治疗者,临床妊娠2322人次(38.7%),94人次为异位妊娠,发生率4.05%。其中输卵管妊娠92人次,发生率3.96%,占总异位妊娠病例的97.87%(92/94),其他部位2人次(腹腔妊娠和子宫角妊娠各1人次),发生率为0.86‰,占异位妊娠比例为2.32%。宫内宫外合并妊娠20人次,发生率为0.86%(20/2322),占异位妊娠病例的21.28%(20/94)。86例患者助孕指征为输卵管因素和/或盆腔粘连,占91.49%,其中24人有异位妊娠史(25.53%)。3种助孕方式(IVF-ET,ICSI和FET)比较,其总妊娠率差异无统计学意义(P>0.05)。3组间异位妊娠发生率比较,IVF-ET组显著高于ICSI和FET组(均P<0.05);FET组亦显著高于ICSI组(P<0.05)。结论:体外受精助孕异位妊娠发生率较自然受孕人群高,有输卵管病变史是发生异位妊娠的主要原因。 展开更多
关键词 体外受精 异位妊娠 发病率 病因
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改良超长方案对子宫内膜异位症患者IVF/ICSI妊娠结局的影响 被引量:18
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作者 李元 龚斐 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期299-302,共4页
目的:探讨改良超长方案对子宫内膜异位症患者在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵细胞浆内单精子注射(ICSI)的应用及其对妊娠结局的影响。方法:对65例子宫内膜异位症患者长效长方案助孕未孕之后行改良超长方案(n=65),比较两种方案促性腺激... 目的:探讨改良超长方案对子宫内膜异位症患者在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵细胞浆内单精子注射(ICSI)的应用及其对妊娠结局的影响。方法:对65例子宫内膜异位症患者长效长方案助孕未孕之后行改良超长方案(n=65),比较两种方案促性腺激素启动前一日黄体生成素(LH)水平、注射绒促性素(HCG)日LH水平、孕酮(P)水平、雌激素(E2)水平、P/E2比值、子宫内膜厚度、促排天数、用药量、平均获卵数、受精率、优胚率,且统计改良超长方案组着床率、临床妊娠率、活产率等。结果:与长效长方案组相比,改良超长方案组Gn启动前一日LH水平(2.54±0.87 U/L vs 1.04±1.76 U/L,P=0.000)、HCG日LH水平(1.39±0.66 U/L vs 1.01±0.52 U/L,P=0.000)、P/E2比值(0.42±0.25 vs 0.32±0.17,P=0.010)均明显下降,而HCG日E2(657.86±260.39 pmol/L vs 781.11±401.34 pmol/L,P=0.040)、促排卵用药量(2425.19±868.56 U vs 3172.31±1137.67 U,P=0.000)明显增加。虽其他指标无明显差异,但改良超长方案组受精率[(64.22±24.03)%vs(75.49±19.1)%,P=0.004]明显增加。改良超长方案组着床率39.26%,临床妊娠率64.41%,活产率45.76%。结论:改良超长方案有助于改善子宫内膜异位症患者IVF/ICSI妊娠结局。 展开更多
关键词 子宫内膜异位症 体外受精 促性腺激素释放激素激动剂 妊娠结局
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植入前遗传学诊断中性别选择的伦理辩护 被引量:4
9
作者 谭珂 谭跃球 +1 位作者 卢光琇 贺达仁 《医学与哲学(A)》 CSSCI 北大核心 2008年第10期13-15,共3页
植入前遗传学诊断(PGD)是在胚胎植入子宫前进行遗传学检查的新技术。它可对植入胚胎进行性别选择,从而引发了会增加我国出生人口性别比的担忧。通过对PGD性别选择伦理风险的分析,指出其用于医学需要时不会对性别比造成危害。但在实施过... 植入前遗传学诊断(PGD)是在胚胎植入子宫前进行遗传学检查的新技术。它可对植入胚胎进行性别选择,从而引发了会增加我国出生人口性别比的担忧。通过对PGD性别选择伦理风险的分析,指出其用于医学需要时不会对性别比造成危害。但在实施过程中需要医生、患者及社会全体人员共同参与,避免该技术用于非医学目的的需要。 展开更多
关键词 植入前遗传学诊断 性别选择 人口性别比 伦理辩护 男性偏好
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IVF/ICSI发生中-重度卵巢过度刺激综合征的产科结局探讨 被引量:7
10
作者 李元 龚斐 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期787-789,共3页
目的:行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵细胞浆内单精子注射(ICSI)助孕治疗患者发生中-重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)对产科结局是否产生不利影响进行探讨。方法:回顾性分析中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心2004年1月至2012年9月助孕... 目的:行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵细胞浆内单精子注射(ICSI)助孕治疗患者发生中-重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)对产科结局是否产生不利影响进行探讨。方法:回顾性分析中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心2004年1月至2012年9月助孕时发生中-重度OHSS者264例(OHSS组)和随机抽取同期助孕未发生OHSS的妇女264例(对照组)的临床资料,比较两组的产科结局。结果:OHSS组的自然流产率、巨大胎儿发生率、低体重儿发生率、早产率、分娩多胎率和先天畸形率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组临床妊娠率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:IVF/ICSI助孕过程发生中-重度OHSS并未影响妊娠结局。 展开更多
关键词 体外受精 卵巢过度刺激综合征 妊娠结局 先天畸形
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