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野生型与L10P突变型DJ-1蛋白稳定表达单克隆细胞株的基因表达谱分析
被引量：
2
1
作者
刘振华
唐北沙
+1 位作者
严新翔
郭纪锋
《中国现代神经疾病杂志》
CAS
2013年第7期587-595,共9页
研究背景 DJ-1基因是常染色体隐性遗传性早发性帕金森综合征(AREP)的致病基因之一,其作用机制尚不十分清楚。既往研究提示,DJ-1蛋白可以通过其转录调控活性调控某些基因的表达,从而在帕金森病的发病机制中发挥作用。本研究小组发现一种...
研究背景 DJ-1基因是常染色体隐性遗传性早发性帕金森综合征(AREP)的致病基因之一,其作用机制尚不十分清楚。既往研究提示,DJ-1蛋白可以通过其转录调控活性调控某些基因的表达,从而在帕金森病的发病机制中发挥作用。本研究小组发现一种新的DJ1基因突变位点——L10P,即DJ-1基因编码框第29位碱基胸腺嘧啶(T)→胞嘧啶(C),从而使DJ-1蛋白第10位上的亮氨酸被脯氨酸替代。探讨DJ-1基因L10P突变在帕金森病发病机制中的作用,可以明确其通过转录调控活性调控相关基因表达的具体方式,继而参与帕金森病之发病机制。方法筛选稳定表达pCMV-Tag2A-Flag、pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1和pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1-L10P的人胚肾细胞293(HEK293)单克隆细胞株,通过DNA、RNA和蛋白质水平鉴定,以证实获得的HEK293单克隆细胞株是否能够稳定表达空载体、野生型DJ1蛋白和L10P突变型DJ1蛋白,基因芯片检测技术对各组HEK293单克隆细胞株进行差异基因筛选。结果基因芯片技术检测显示,与空载体组相比,野生型组共有14个基因表达上调、28个基因表达下调,L10P突变型组有14个基因表达上调、9个基因表达下调;与野生型组相比,L10P突变型组共有59个基因表达上调、27个基因表达下调。这些差异基因分别参与信号转导、基因转录调控、细胞周期调节、细胞凋亡、氧化应激等生物学过程。结论 L10P突变型DJ1蛋白可能通过直接或间接方式对差异基因进行表达调控,从而影响这些信号转导通路的正常功能,进而参与帕金森病的发病机制。
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关键词
帕金森病
基因表达谱
突变
转染
免疫印迹法
DNA探针
细胞
培养的
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职称材料
题名
野生型与L10P突变型DJ-1蛋白稳定表达单克隆细胞株的基因表达谱分析
被引量：
2
1
作者
刘振华
唐北沙
严新翔
郭纪锋
机构
中南大学湘雅医院
神经
内科
中南大学湘雅医院
医学遗传学国家
重点
实验室
中南大学湘雅医院神经退行性疾病湖南省重点实验室
出处
《中国现代神经疾病杂志》
CAS
2013年第7期587-595,共9页
基金
国家重点基础研究计划(973计划)项目(项目编号:2011CB510000)
国家自然科学基金重点资助项目(项目编号:81130021)
+2 种基金
国家自然科学基金资助项目(项目编号:81171198)
国家自然科学基金资助项目(项目编号:81200870)
国家自然科学基金资助项目(项目编号:81000542)~~
文摘
研究背景 DJ-1基因是常染色体隐性遗传性早发性帕金森综合征(AREP)的致病基因之一,其作用机制尚不十分清楚。既往研究提示,DJ-1蛋白可以通过其转录调控活性调控某些基因的表达,从而在帕金森病的发病机制中发挥作用。本研究小组发现一种新的DJ1基因突变位点——L10P,即DJ-1基因编码框第29位碱基胸腺嘧啶(T)→胞嘧啶(C),从而使DJ-1蛋白第10位上的亮氨酸被脯氨酸替代。探讨DJ-1基因L10P突变在帕金森病发病机制中的作用,可以明确其通过转录调控活性调控相关基因表达的具体方式,继而参与帕金森病之发病机制。方法筛选稳定表达pCMV-Tag2A-Flag、pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1和pCMV-Tag2A-Flag-DJ-1-L10P的人胚肾细胞293(HEK293)单克隆细胞株,通过DNA、RNA和蛋白质水平鉴定,以证实获得的HEK293单克隆细胞株是否能够稳定表达空载体、野生型DJ1蛋白和L10P突变型DJ1蛋白,基因芯片检测技术对各组HEK293单克隆细胞株进行差异基因筛选。结果基因芯片技术检测显示,与空载体组相比,野生型组共有14个基因表达上调、28个基因表达下调,L10P突变型组有14个基因表达上调、9个基因表达下调;与野生型组相比,L10P突变型组共有59个基因表达上调、27个基因表达下调。这些差异基因分别参与信号转导、基因转录调控、细胞周期调节、细胞凋亡、氧化应激等生物学过程。结论 L10P突变型DJ1蛋白可能通过直接或间接方式对差异基因进行表达调控,从而影响这些信号转导通路的正常功能,进而参与帕金森病的发病机制。
关键词
帕金森病
基因表达谱
突变
转染
免疫印迹法
DNA探针
细胞
培养的
Keywords
Parkinson disease
Gene expression profiling
Mutation
Transfection
Immunoblotting
DNA probes
Cells,cultured
分类号
R742.5 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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作者
出处
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被引量
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1
野生型与L10P突变型DJ-1蛋白稳定表达单克隆细胞株的基因表达谱分析
刘振华
唐北沙
严新翔
郭纪锋
《中国现代神经疾病杂志》
CAS
2013
2
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