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日本血吸虫中国株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的克隆、表达及其免疫保护性研究(英文) 被引量:14
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作者 余俊龙 汪世平 +10 位作者 何卓 戴橄 李文凯 姜孝新 曾少华 肖小芹 徐绍锐 吕志跃 彭先楚 周松华 刘雪琴 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第7期665-672,共8页
根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)EST(BU803192)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进... 根据基因库中日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)EST(BU803192)以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgt11多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物,以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板,采用锚式PCR对SjHGPRT基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序,用电子软件拼接,获得SjHGPRT全长cDNA(1270bp),经序列分析,推断该片段含有编码SjHGPRT基因的完整阅读框,其编码基因与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SmHGPRT)全长编码基因碱基一致性为82%,其理论推导的氨基酸组成与曼氏血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的一致性约为83%.将其编码基因克隆到表达载体pQE30上,在大肠杆菌M15中获得准确、高效表达,表达产物分子质量约为28ku.用日本血吸虫成虫抗原免疫血清对表达产物进行蛋白质印迹检测,在预测位置上出现明显的识别条带.重组蛋白动物免疫保护性结果显示:在虫荷、每克肝卵、每克粪卵和雌子宫内卵数方面,疫苗组与对照组比较差异均具有显著性(P<0.05,P<0.01).结果表明,日本血吸虫次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(SjHGPRT)全长cDNA成功克隆并在大肠菌中得到表达,表达产物具有良好的抗原性和动物免疫保护效果,是一种潜在的具有部分免疫保护性的抗血吸虫病疫苗候选分子. 展开更多
关键词 日本血吸虫 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 基因克隆 基因表达
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日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫差异表达蛋白的筛选与鉴定 被引量:8
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作者 戴橄 汪世平 +5 位作者 余俊龙 徐绍锐 彭先楚 刘雪琴 周松华 刘芬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第3期283-291,共9页
采用双向凝胶电泳和质谱技术对日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫蛋白质表达谱进行分析,并在mRNA水平进行验证;观察差异表达SJCHGC蛋白重组真核表达质粒pEGFP-C1/SJCHGC在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,并分析其表达产物的抗原性.... 采用双向凝胶电泳和质谱技术对日本血吸虫单性感染雄虫和双性感染雄虫蛋白质表达谱进行分析,并在mRNA水平进行验证;观察差异表达SJCHGC蛋白重组真核表达质粒pEGFP-C1/SJCHGC在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位,并分析其表达产物的抗原性.成功鉴定了9个日本血吸虫雌雄合抱差异表达蛋白,其中在日本血吸虫雄虫合抱前表达上调的蛋白质有6个;而有3个蛋白质在日本血吸虫雄虫合抱后表达明显上调.大多数差异蛋白功能涉及血吸虫的生长发育、生殖、营养、运动、信号传递等过程.重组质粒pEGFP-C1/SJCHGC融合基因真核表达载体在真核细胞COS-7中获得了表达,可用荧光显微镜直接观察其表达情况及亚细胞定位,细胞所表达的融合蛋白具有血吸虫抗原性.研究结果为揭示日本血吸虫雌雄合抱机制、研制抗血吸虫雌雄合抱疫苗提供了理论依据. 展开更多
关键词 日本血吸虫 雌雄合抱 蛋白质组学 双向电泳(2-DE) 基因克隆 绿色荧光蛋白 COS-7细胞
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日本血吸虫成虫组分抗原的分离及小鼠免疫试验 被引量:2
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作者 袁仕善 易新元 +3 位作者 曾宪芳 黄跃龙 张顺 Larry McReynolds 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期85-88,共4页
目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原 (AWA)中的组分抗原 ,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原 ,计算各组分抗原的分子量 ,并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠 ,攻击感染日... 目的 分离日本血吸虫可溶性成虫抗原 (AWA)中的组分抗原 ,分析其诱导的抗血吸虫的免疫保护性。方法 电泳层析法分离日本血吸虫AWA中的组分抗原 ,计算各组分抗原的分子量 ,并分析其免疫学活性。将各组分抗原分别免疫小鼠 ,攻击感染日本血吸虫尾蚴 ,感染后 4 5d剖杀 ,观察各组分抗原的免疫保护效果。结果 采用电泳层析法分离获得多个组分抗原 ,选择收集其中 4个较纯的组分抗原 ,分子量分别为 5 2kD、6 3kD、6 7kD和 74kD ;其中 6 3kD和 6 7kD抗原与感染血清有强的反应 ,而 5 2kD和 74kD抗原则反应弱 ;4种组分抗原均与AWA的免疫血清反应。 6 3kD抗原诱导的免疫保护力水平较5 2kD、6 7kD和 74kD抗原好。结论 电泳层析法分离的 4个血吸虫组分抗原有良好的免疫原性 ,且 6 3kD抗原有一定的免疫保护性。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 抗原 分离 小鼠 免疫学 试验
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日本血吸虫成虫67kD蛋白的分离与鉴定 被引量:2
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作者 袁仕善 曾宪芳 +3 位作者 黄跃龙 王敏 周东明 易新元 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第2期102-104,共3页
目的 :分离日本血吸虫感染及免疫血清识别的成虫抗原 (AWA)中的特异蛋白带 ,为血吸虫病免疫诊断提供新的抗原分子。方法 :免疫印迹法分析AWA的特异蛋白带 ,电泳层析法分离靶抗原。结果 :获得了感染血清和免疫血清识别的 6 7kD蛋白。结论
关键词 日本血吸虫 成虫抗原 免疫印迹法 电泳 67kD蛋白 AWA
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寄生虫病细胞工程学免疫防治研究 被引量:2
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作者 张中庸 李靓如 +7 位作者 张京 曾宪芳 易新元 言敢威 曾庆仁 马春艳 吴莲英 章洁 《天津农学院学报》 CAS 2002年第4期1-4,共4页
寄生虫病细胞工程学免疫防治研究,经历了20余a,首先在中国获得成功。在国家 九五"两项重大科技攻关项目支持下,建立了猪囊尾蚴CC-97细胞系,研制成功了猪囊尾蚴细胞疫苗;2000年以来,在国家自然科学基金等基金支持下,日本血吸虫幼虫... 寄生虫病细胞工程学免疫防治研究,经历了20余a,首先在中国获得成功。在国家 九五"两项重大科技攻关项目支持下,建立了猪囊尾蚴CC-97细胞系,研制成功了猪囊尾蚴细胞疫苗;2000年以来,在国家自然科学基金等基金支持下,日本血吸虫幼虫———毛蚴、尾蚴和成虫细胞体外培养相继获得成功,开创了血吸虫病细胞工程学免疫防治的新局面。 展开更多
关键词 免疫防治 寄生虫病 细胞工程学 猪囊尾蚴细胞系 细胞疫苗 日本血吸虫
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血吸虫生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP DNA在小鼠体内的组织分布及整合的观察
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作者 刘芬 汪希雅 +2 位作者 高冬梅 余平 汪世平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期944-947,共4页
目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后... 目的探讨日本血吸虫生殖产卵相关基因DNA在小鼠体内组织分布以及整合到宿主基因组上的可能性。方法将生殖产卵相关基因重组质粒pcDNA3/Sj SDISP经肌注免疫小鼠后,在注射后12h、1w、3w和6w取小鼠各组织,抽提其基因组DNA进行PCR扩增,然后纯化基因组DNA进行PCR扩增,结果经琼脂糖凝胶电泳分析。结果注射后12h,在血液、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉中可检测到pcDNA3/Sj SDISP,至第1w,仍可在部分小鼠中检测到,至第3w不再检出。未发现生殖产卵相关基因pcDNA3/Sj SDISP整合入小鼠基因组中。结论肌注pcDNA3/Sj SDISP后,可在组织中广泛分布,但并未持续存在体内。未发现与宿主细胞基因组整合的直接证据。 展开更多
关键词 pcDNA3/Sj SDISP DNA疫苗 组织分布 整合
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CT358蛋白在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特性分析(英文) 被引量:6
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作者 李忠玉 吴移谋 +2 位作者 黄秋林 汪世平 钟光明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期549-555,共7页
确定沙眼衣原体CT358蛋白在衣原体感染细胞中的位置并初步鉴定其生物学功能.采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增CT358基因,并克隆入pGEX和pDSRedC1表达载体中.将重组质粒pGEX-CT358转化到XL1-blue宿主菌,并诱导表达融合蛋白GST-C... 确定沙眼衣原体CT358蛋白在衣原体感染细胞中的位置并初步鉴定其生物学功能.采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增CT358基因,并克隆入pGEX和pDSRedC1表达载体中.将重组质粒pGEX-CT358转化到XL1-blue宿主菌,并诱导表达融合蛋白GST-CT358.纯化后的CT358融合蛋白免疫小鼠制备抗体,应用间接免疫荧光技术对CT358蛋白在衣原体感染细胞内的定位及表达模式进行分析.同时,pDSRedC1-CT358重组质粒瞬时转染HeLa细胞,观察CT358蛋白对衣原体感染的影响.实验结果证明CT358蛋白为沙眼衣原体包涵体膜蛋白.该蛋白质在衣原体感染12h后就表达定位于包涵体膜上,直至持续到整个感染周期,转基因在胞浆表达的CT358融合蛋白不影响其后的衣原体感染.该研究为深入研究衣原体与宿主细胞间相互作用提供了新的线索,并可为衣原体性的治疗、预防提供新方向. 展开更多
关键词 沙眼衣原体 CT358 包涵体膜蛋白
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