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新生猪胰岛移植治疗糖尿病病人的临床研究(英文) 被引量:9
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作者 王维 莫朝辉 +3 位作者 叶斌 胡平安 刘晟 易受南 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1134-1140,共7页
目的:评估新生猪胰岛移植治疗1型糖尿病方法的安全性和有效性。方法:所有22例病人均接受经肝动脉新生猪胰岛移植治疗,移植后病人接受多种免疫抑制治疗方案;第1组14例病人使用环孢菌素、骁息和甲基强的松龙,没有接受猪C肽检测;第2组2例... 目的:评估新生猪胰岛移植治疗1型糖尿病方法的安全性和有效性。方法:所有22例病人均接受经肝动脉新生猪胰岛移植治疗,移植后病人接受多种免疫抑制治疗方案;第1组14例病人使用环孢菌素、骁息和甲基强的松龙,没有接受猪C肽检测;第2组2例病人只使用环孢菌素和骁息,第3组6例病人的免疫抑制方案是OKT3、他克莫司、西罗莫司和甲基强的松龙。在移植治疗前和移植后1年,病人进行了血糖、外源性胰岛素用量、糖化血红蛋白、猪内源性反转录病毒(PERV)和肝功能的评估,第2组和第3组的8例病人接受了血清猪C肽检测。6例病人在移植后4~6年进行了复查。结果:第1组14例病人移植后胰岛素用量减少和HbA1c水平降低。第2组2例病人在移植后代谢指标没有变化,猪C肽检测阴性。第3组的6例病人在移植3个月以后,胰岛素用量均减少,HbA1c正常,6例病人血清均检测到有意义的猪C肽。其中2例病人接受了第2次新生猪胰岛移植,1例病人短暂脱离胰岛素治疗7 d。所有病人在移植后均未出现严重不良反应,没有PERV感染的证据。6例病人在新生猪胰岛移植4~6年后接受检查,此6例病人均在接受移植治疗1年后停止免疫抑制治疗,复查时6例病人均接受胰岛素治疗。其中4例病人严格限制糖的摄入,2例病人为自由饮食;这2例病人中,有1例出现2次酮症,有轻度糖尿病视网膜病变;1例出现1次由于急性胃肠炎导致的酮症;其余4例均未出现任何并发症。6例病人再次接受PERV检测均为阴性。结论:异种胰岛可以在人体内存活并发挥其功能,没有发现严重不良反应。 展开更多
关键词 新生猪胰岛 异种移植 糖尿病病人
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异种移植微囊化新生猪胰岛细胞受体感染PERV潜在风险分析 被引量:3
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作者 叶征 邢晓为 +2 位作者 童琼娟 容鹏飞 王维 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期747-752,共6页
目的:研究新生猪胰岛细胞(neonatal pig islets,NPIs)经微囊化后异种移植到狗体内,受体感染猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的风险。方法:将10只狗随机分成实验组和对照组,分别移植微囊化猪胰岛细胞和未被微囊... 目的:研究新生猪胰岛细胞(neonatal pig islets,NPIs)经微囊化后异种移植到狗体内,受体感染猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的风险。方法:将10只狗随机分成实验组和对照组,分别移植微囊化猪胰岛细胞和未被微囊化猪胰岛细胞。应用放射免疫的方法检测狗体内血清特异性猪C-肽以判断胰岛移植物活性;采用免疫组织化学技术检测28d后肝移植部位是否有微囊化猪胰岛细胞;PCR和RT-PCR技术分别检测不同时间点狗外周血中PERV及猪mt DNA。结果:移植微囊化猪胰岛细胞2周后,给受体注射葡萄糖,15~30min狗的外周血中猪C-肽表达明显升高,而对照组检测不到猪C-肽;免疫组化结果表明,狗肝脏移植部位周围可检测到少量微囊化猪胰岛细胞,肝组织无明显异常;PCR和RT-PCR结果表明,移植微囊化猪胰岛细胞在不同时间点狗外周血内均未检测到猪mt DNA及PERV表达,而对照组于移植后4d内检测到猪mt DNA及PERV呈微弱表达,10d后均未见表达。结论:微囊化猪胰岛细胞能够在受体肝脏内存活并发挥作用,受体内不存在PERV的感染,提示海藻酸钠微囊可以有效地防止猪mt DNA及PERV的穿越,可能在异种移植中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 移植 异种 猪内源性逆转录病毒 微囊化 胰岛
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湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的研究 被引量:12
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作者 邢晓为 薛立群 +2 位作者 黄生强 黎淑娟 王维 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期799-804,共6页
为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵... 为评价从猪到人异种移植的生物安全性提供依据,从湖南沙子岭猪的保种群内随机采集31头个体的耳样组织,应用PCR和RT-PCR技术分别检测这些组织中内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)的前病毒DNA和mRNA,并对PCR扩增的灵敏性进行评估。多组织RT-PCR检测3头沙子岭猪肾、心、肝、肺、脾等组织中PERV的表达情况,了解其在各组织中的分布情况;最后,扩增、测序该猪种的env基因,结果用NCBI中的BLAST软件进行分析。PCR和RT-PCR结果表明,所检测的31头沙子岭猪均带有PERV前病毒DNA,耳样组织中均有PERV mRNA表达,其中有2头个体携带env-A、env-B、env-C3种囊膜蛋白基因,而其余的29头个体只带有env-Ae、nv-B两种囊膜蛋白基因,未检测到env-C基因。多组织RT-PCR扩增结果表明,3头沙子岭猪的肾、心、肝、肺、脾等组织中,pol、gage、nv-A、env-B基因均有表达,未检测到env-C基因表达。测序沙子岭猪的env基因,结果发现,沙子岭猪env-B和env-C基因与其他猪种序列比较分别存在2和10个碱基的差异,而env-A基因序列没有差异,说明不同的猪种之间env基因存在多态性。以上结果表明,沙子岭猪种群携带PERV,其亚型主要以PERV-A,B为主;PERV在该猪种肾、心、肝、肺、脾等多种组织中的分布没有明显组织特异性,且93.5%(29/31)个体表现为env-C基因缺失,提示沙子岭猪作为候选猪种可能在异种移植中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪内源性逆转录病毒 亚型 沙子岭猪 异种移植 组织分布
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AAV体外介导hCTLA4-Ig在新生猪胰岛细胞中的表达与生物学活性 被引量:1
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作者 莫朝晖 王维 +3 位作者 刘涛 曾秋华 吴小兵 谢艳红 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期36-40,共5页
目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性。方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达... 目的:探讨AAV-hCTLA4-Ig体外感染猪胰岛细胞后,hCTLA4-Ig基因的表达能力及生物学活性。方法:腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),用RT-PCR和免疫细胞化学法检测胰岛细胞内hCTLA4-Ig mRNA及蛋白质水平的表达。转染后的新生猪胰岛细胞与人淋巴细胞共孵育,通过ELISA法检测培养基中IL-2,IFN-γ,TNF-α细胞因子水平的变化。并观察转染组与对照组葡萄糖刺激后的胰岛素释放反应。结果:转染组NIPs可检测到hCTLA4-Ig基因及蛋白表达;与人淋巴细胞共孵育后IL-2,TNF-α,IFN-γ浓度明显低于对照组(P<0.01);且葡萄糖刺激胰岛素释放反应与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:AAV-CTLA4-Ig体外转染的胰岛细胞能够表达具有生物学活性的hCTLA4-Ig,可抑制T细胞激活,而胰岛细胞生理功能不受影响。 展开更多
关键词 CTLA4-IG 基因转染 新生猪胰岛细胞
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湖南大围子猪SLA-DR基因克隆及其生物信息学分析 被引量:5
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作者 王燕 邢晓为 +3 位作者 薛立群 黄生强 吴晓丽 王维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期770-773,共4页
目的:研究湖南大围子猪SLA-DR基因特性,评价该猪种在异种器官移植中是否具有应用前景。方法:应用RT-PCR扩增大围子猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,插入pUCM-T载体,双向测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY软件进行生物信息学分析。结果:大围子猪SLA-... 目的:研究湖南大围子猪SLA-DR基因特性,评价该猪种在异种器官移植中是否具有应用前景。方法:应用RT-PCR扩增大围子猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,插入pUCM-T载体,双向测序,用NCBI中的BLAST和ExPASY软件进行生物信息学分析。结果:大围子猪SLA-DRA和SLA-DRB基因扩增片段大小分别为1177bp和909bp,均包含完整的开放阅读框,分别编码252和266个氨基酸残基。生物信息学分析结果表明,大围子猪SLA-DRA和SLA-DRB与人类相应的DRA、DRB相比,氨基酸同源性分别为82%和73%。SLADRα链与人CD4分子结合部位介于第124至136位氨基酸,大围子猪SLA-DRA在该结合区域与人类相应的DRA存在两个氨基酸差异,即:第127位(lle→Val),第136位(Ser→Thr);SLADRβ链与人CD4分子结合部位位于第134至148位氨基酸,大围子猪SLA-DRB在该结合区域与人类相应的DRB相比氨基酸序列完全相同。与国际GenBank已登录的许多猪种相比,SLA-DRA基因同源性高达100%,而SLA-DRB基因在各猪种之间具有很高的多态性。结论:克隆湖南大围子猪SLA-DRA和SLA-DRB基因,该基因与人类相应的HLA-DRA和HLA-DRB基因高度同源,提示该猪种有望作为异种移植的候选供体。 展开更多
关键词 SLA-DR基因 湖南大围子猪 基因克隆 异种移植
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湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒的检测及亚型分析 被引量:4
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作者 黎淑娟 邢晓为 +3 位作者 薛立群 黄生强 袁洪 王维 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期530-534,共5页
为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头... 为探明湖南沙子岭猪内源性逆转录病毒携带情况及病毒亚型分布,应用gag,pol特异性引物,对31头湖南沙子岭猪耳部组织的DNA,RNA样品进行了PCR,RT-PCR检测,依据env基因表型env-A,env-B,env-C,鉴定了每头猪携带PERV亚型.结果表明,在所检31头个体中,93.5%的个体基因组中同时有PERV的A,B 2种亚型(记为env-AB),另外6.5%的个体基因组中则同时有PERV的A,B,C 3种亚型(记为env-ABC),所有个体的耳样组织中均未检测到单独存在的PERV的A,B或C亚型.说明湖南沙子岭猪中存在PERV序列,且能以mRNA的形式表达,病毒亚型以env-AB为主. 展开更多
关键词 异种移植 猪内源性逆转录病毒 病毒亚型 湖南沙子岭猪
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