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髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
被引量：
3
1
作者
宋达疆
黄晓元
+2 位作者
杨兴华
肖目张
王双
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期970-977,共8页
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;...
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;将以上5对双链DNA oligo退火后连入pGCSIL-GFP载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Raw264.7细胞后,运用real-time PCR和ELISA检测TREM-1 mR-NA和蛋白表达水平。实时定量PCR和ELISA观察干扰TREM-1后脆弱杆菌内毒素引发的Raw264.7细胞内毒素血症模型中TREM-1的表达变化。结果:PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pGCSIL-GFP载体;各质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生了高滴度的慢病毒颗粒;各组慢病毒感染Raw264.7细胞后均可以显著抑制TREM-1的表达,以pGCSIL-GFP/Lenti-1组效果最明显。在脆弱杆菌内毒素引发的体外细胞内毒素血症模型中TREM-1表达明显增高,实时定量PCR表明慢病毒干扰载体能显著抑制模型中TREM-1的表达。结论:成功构建了小鼠TREM-1基因RNAi慢病毒载体,所构建的慢病毒载体能够抑制脆弱类杆菌内毒素所诱导的TREM-1的表达。
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关键词
RNAI
髓系触发受体-1
慢病毒载体
脆弱类杆菌
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职称材料
题名
髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
被引量：
3
1
作者
宋达疆
黄晓元
杨兴华
肖目张
王双
机构
中南大学湘雅一医院烧伤整形科
中南大学
湘雅一
医院
检验
科
出处
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期970-977,共8页
基金
国家自然科学基金(30471785)~~
文摘
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;将以上5对双链DNA oligo退火后连入pGCSIL-GFP载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Raw264.7细胞后,运用real-time PCR和ELISA检测TREM-1 mR-NA和蛋白表达水平。实时定量PCR和ELISA观察干扰TREM-1后脆弱杆菌内毒素引发的Raw264.7细胞内毒素血症模型中TREM-1的表达变化。结果:PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pGCSIL-GFP载体;各质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生了高滴度的慢病毒颗粒;各组慢病毒感染Raw264.7细胞后均可以显著抑制TREM-1的表达,以pGCSIL-GFP/Lenti-1组效果最明显。在脆弱杆菌内毒素引发的体外细胞内毒素血症模型中TREM-1表达明显增高,实时定量PCR表明慢病毒干扰载体能显著抑制模型中TREM-1的表达。结论:成功构建了小鼠TREM-1基因RNAi慢病毒载体,所构建的慢病毒载体能够抑制脆弱类杆菌内毒素所诱导的TREM-1的表达。
关键词
RNAI
髓系触发受体-1
慢病毒载体
脆弱类杆菌
Keywords
RNA interference
triggering receptors expressed on myeloid cells-1
lentiviral vector
Bacteroides fragilis
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
宋达疆
黄晓元
杨兴华
肖目张
王双
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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