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髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
被引量：
3
1
作者
宋达疆
黄晓元
+2 位作者
杨兴华
肖目张
王双
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期970-977,共8页
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;...
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;将以上5对双链DNA oligo退火后连入pGCSIL-GFP载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Raw264.7细胞后,运用real-time PCR和ELISA检测TREM-1 mR-NA和蛋白表达水平。实时定量PCR和ELISA观察干扰TREM-1后脆弱杆菌内毒素引发的Raw264.7细胞内毒素血症模型中TREM-1的表达变化。结果:PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pGCSIL-GFP载体;各质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生了高滴度的慢病毒颗粒;各组慢病毒感染Raw264.7细胞后均可以显著抑制TREM-1的表达,以pGCSIL-GFP/Lenti-1组效果最明显。在脆弱杆菌内毒素引发的体外细胞内毒素血症模型中TREM-1表达明显增高,实时定量PCR表明慢病毒干扰载体能显著抑制模型中TREM-1的表达。结论:成功构建了小鼠TREM-1基因RNAi慢病毒载体,所构建的慢病毒载体能够抑制脆弱类杆菌内毒素所诱导的TREM-1的表达。
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关键词
RNAI
髓系触发受体-1
慢病毒载体
脆弱类杆菌
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职称材料
SP1介导CD147通过HIF-1α/VEGF信号通路影响卵巢癌的血管形成
被引量：
13
2
作者
孙丽莎
邓红玉
+3 位作者
沈浩明
单冬勇
杨勇文
屈斌
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期649-654,共6页
目的:探讨特异性蛋白(specific protein,SP1)介导CD147,即细胞外基质金属蛋白诱导因子(extracellular matrix metalloprotein inducer,EMMPRIN)的表达激活缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子(vas...
目的:探讨特异性蛋白(specific protein,SP1)介导CD147,即细胞外基质金属蛋白诱导因子(extracellular matrix metalloprotein inducer,EMMPRIN)的表达激活缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路对卵巢癌血管形成的影响。方法:血管生长是肿瘤发生的关键步骤,多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成试验能很好地模拟肿瘤的血管发生过程,实验分为过表达组(OE组)、沉默组(SI组)、控制组(CONTROL组)、阴性对照质粒组(NC组),通过沉默或过表达卵巢癌细胞株SKOV3中SP1或CD147,并使用HIF-1α蛋白翻译抑制剂KC7F2阻断HIF-1α/VEGF信号通路,然后用培养上清液作用于人脐静脉血管内皮细胞HUVEC-12,进行体外血管形成实验来模拟肿瘤血管生成改变,并使用荧光实时定量PCR技术检测CD147和VEGF在细胞中的表达分布。结果:阴性对照组血管分支数(206.33±16.03)高于SI-CD147组血管分支数(137.00±15.09);OE-SP1组的CD147 mRNA水平(2.38±0.26)高于SI-SP1组中CD147 mRNA水平(0.55±0.12);SI-SP1+OE-CD147组血管分支数(200.00±19.52)高于SI-SP1组血管分支数(130.00±12.01);OE-CD147组血管分支数(373.67±29.02)高于OECD147+KC7F2组血管分支数(187.00±19.52),OE-CD147组VEGF分子水平(4.05±0.09)高于OE-CD147+KC7F2组VEGF分子水平(1.02±0.11)。结论:卵巢癌中CD147表达升高,上游转录因子SP1可以上调CD147表达,从而激活HIF-1α/VEGF信号通路,促进卵巢癌血管形成过程,最终参与卵巢癌发病。
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关键词
卵巢癌
CD147
SP1
缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路
血管形成
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职称材料
题名
髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
被引量：
3
1
作者
宋达疆
黄晓元
杨兴华
肖目张
王双
机构
中南大学
湘雅一
医院
烧伤整形
科
中南大学湘雅一医院检验科
出处
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第10期970-977,共8页
基金
国家自然科学基金(30471785)~~
文摘
目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;将以上5对双链DNA oligo退火后连入pGCSIL-GFP载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Raw264.7细胞后,运用real-time PCR和ELISA检测TREM-1 mR-NA和蛋白表达水平。实时定量PCR和ELISA观察干扰TREM-1后脆弱杆菌内毒素引发的Raw264.7细胞内毒素血症模型中TREM-1的表达变化。结果:PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pGCSIL-GFP载体;各质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生了高滴度的慢病毒颗粒;各组慢病毒感染Raw264.7细胞后均可以显著抑制TREM-1的表达,以pGCSIL-GFP/Lenti-1组效果最明显。在脆弱杆菌内毒素引发的体外细胞内毒素血症模型中TREM-1表达明显增高,实时定量PCR表明慢病毒干扰载体能显著抑制模型中TREM-1的表达。结论:成功构建了小鼠TREM-1基因RNAi慢病毒载体,所构建的慢病毒载体能够抑制脆弱类杆菌内毒素所诱导的TREM-1的表达。
关键词
RNAI
髓系触发受体-1
慢病毒载体
脆弱类杆菌
Keywords
RNA interference
triggering receptors expressed on myeloid cells-1
lentiviral vector
Bacteroides fragilis
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
SP1介导CD147通过HIF-1α/VEGF信号通路影响卵巢癌的血管形成
被引量：
13
2
作者
孙丽莎
邓红玉
沈浩明
单冬勇
杨勇文
屈斌
机构
湖南省肿瘤
医院
输血
科
湖南省肿瘤
医院
检验
科
中南大学
湘雅
三
医院
肿瘤
科
放疗中心
中南大学湘雅一医院检验科
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第6期649-654,共6页
基金
湖南省自然科学基金青年资助项目(编号:2018JJ3791)
湖南省卫计委科研资助项目(编号:20200557、20201513)
+1 种基金
湖南省肿瘤医院启航基金资助项目(QH201904)
长沙市重点研发、平台和人才科技计划资助项目(编号:kq1907127)。
文摘
目的:探讨特异性蛋白(specific protein,SP1)介导CD147,即细胞外基质金属蛋白诱导因子(extracellular matrix metalloprotein inducer,EMMPRIN)的表达激活缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)/血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路对卵巢癌血管形成的影响。方法:血管生长是肿瘤发生的关键步骤,多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。这是由于肿瘤细胞自身可分泌多种生长因子,诱导血管生成。因此,血管生成在肿瘤的发展转移过程中起到重要作用,抑制这一过程将能明显阻止肿瘤组织的发展和扩散转移。体外的血管生成试验能很好地模拟肿瘤的血管发生过程,实验分为过表达组(OE组)、沉默组(SI组)、控制组(CONTROL组)、阴性对照质粒组(NC组),通过沉默或过表达卵巢癌细胞株SKOV3中SP1或CD147,并使用HIF-1α蛋白翻译抑制剂KC7F2阻断HIF-1α/VEGF信号通路,然后用培养上清液作用于人脐静脉血管内皮细胞HUVEC-12,进行体外血管形成实验来模拟肿瘤血管生成改变,并使用荧光实时定量PCR技术检测CD147和VEGF在细胞中的表达分布。结果:阴性对照组血管分支数(206.33±16.03)高于SI-CD147组血管分支数(137.00±15.09);OE-SP1组的CD147 mRNA水平(2.38±0.26)高于SI-SP1组中CD147 mRNA水平(0.55±0.12);SI-SP1+OE-CD147组血管分支数(200.00±19.52)高于SI-SP1组血管分支数(130.00±12.01);OE-CD147组血管分支数(373.67±29.02)高于OECD147+KC7F2组血管分支数(187.00±19.52),OE-CD147组VEGF分子水平(4.05±0.09)高于OE-CD147+KC7F2组VEGF分子水平(1.02±0.11)。结论:卵巢癌中CD147表达升高,上游转录因子SP1可以上调CD147表达,从而激活HIF-1α/VEGF信号通路,促进卵巢癌血管形成过程,最终参与卵巢癌发病。
关键词
卵巢癌
CD147
SP1
缺氧诱导因子-1α/血管内皮生长因子信号通路
血管形成
Keywords
ovarian cancer
CD147
SP1
hypoxia inducible factor-1α/vascular endothelial growth factor signaling pathway
angiogenesis
分类号
R711 [医药卫生—妇产科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
髓系触发受体-1基因RNAi慢病毒载体的构建及功能初步检测
宋达疆
黄晓元
杨兴华
肖目张
王双
《中南大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2009
3
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下载PDF
职称材料
2
SP1介导CD147通过HIF-1α/VEGF信号通路影响卵巢癌的血管形成
孙丽莎
邓红玉
沈浩明
单冬勇
杨勇文
屈斌
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
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