某高校医学研究生对实验动物伦理和福利认知现状的调查

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作者 冯丹丹 成海鹏 +4 位作者 黎梅 柯浩 韩仰 周艳 罗自强 《中国医学科学院学报》 北大核心 2025年第3期478-482,共5页

目的了解中南大学医学研究生对实验动物伦理道德的认知状态,为加强医学研究生实验动物伦理教育提供参考。方法自行编制问卷进行在线调查,回收有效调查问卷524份,对问卷结果进行分析,了解中南大学医学研究生对实验动物伦理的认知状态。... 目的了解中南大学医学研究生对实验动物伦理道德的认知状态,为加强医学研究生实验动物伦理教育提供参考。方法自行编制问卷进行在线调查,回收有效调查问卷524份,对问卷结果进行分析,了解中南大学医学研究生对实验动物伦理的认知状态。结果医学研究生在动物福利和伦理道德方面表现出高度认同,这反映了我国本科教育阶段在实验动物伦理教育方面取得的显著成效;但在动物福利及伦理法规知识的知晓度与具体动物实验操作技术细则上存在“知行分离”现象,也反映出本科教学中存在“知行分离”问题以及实验技术教学内容更新的滞后。结论实验动物伦理教育既要注重培养学生关爱实验动物的行为习惯,还要加强教师在教学过程中对实验动物伦理及福利知识与技术的掌握。 展开更多

关键词 实验动物 动物伦理 动物福利 医学研究生

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医学机能学国家级实验教学示范中心的建设与发展 被引量：12

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作者 何晓凡 秦晓群 +2 位作者 杨绿化 许建平 李竺亭 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2010年第7期7-10,18,共5页

为了加快实验教学改革和实验室建设,促进优质资源整合和共享,全面推进素质教育、培养有创新精神和实践能力的高素质医学人才,该文从中心的建设思路、建设手段和建设成果等方面作了重点介绍。

关键词 实验教学 示范中心 医学机能学 建设 发展

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黏液纤毛清除系统在呼吸道疾病中的作用 被引量：8

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作者 伍迪 向阳 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期275-284,共10页

黏液纤毛清除系统是呼吸道重要的防御机制之一,它在气道上皮抵御病原微生物感染及有毒颗粒刺激中发挥重要作用。黏液纤毛清除系统由气道和黏膜下腺上皮细胞介导,通过在气道表面分泌液体、电解质、抗菌和抗炎蛋白以及黏液,在多层防御系... 黏液纤毛清除系统是呼吸道重要的防御机制之一,它在气道上皮抵御病原微生物感染及有毒颗粒刺激中发挥重要作用。黏液纤毛清除系统由气道和黏膜下腺上皮细胞介导,通过在气道表面分泌液体、电解质、抗菌和抗炎蛋白以及黏液,在多层防御系统中发挥关键作用。环境的改变、药物或者疾病均能使气道黏液分泌与纤毛运动异常,导致黏液清除速率下降,进一步加重对黏液纤毛清除系统的破坏。黏液纤毛清除系统障碍常见于原发性纤毛功能障碍、囊性肺纤维化、哮喘和慢性阻塞性肺疾病等慢性呼吸系统疾病,表现为杯状细胞化生和黏膜下腺细胞肥大、黏液高分泌、纤毛倒伏粘连和缺失、气道阻塞。 展开更多

关键词 黏液纤毛清除系统 原发性纤毛功能障碍 囊性纤维化 哮喘 慢性阻塞性肺疾病

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CRISPR-Cas9系统的发现 被引量：11

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作者 潘少伟 张华莉 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1392-1402,共11页

2020年诺贝尔化学奖授予法国科学家艾曼纽尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国科学家詹妮弗·杜德纳(Jennifer A.Doudna),以表彰她们发现基因技术中最大的利器之一CRISPR-Cas9基因剪刀。CRISPR-Cas系统是一种细菌针对... 2020年诺贝尔化学奖授予法国科学家艾曼纽尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpentier)和美国科学家詹妮弗·杜德纳(Jennifer A.Doudna),以表彰她们发现基因技术中最大的利器之一CRISPR-Cas9基因剪刀。CRISPR-Cas系统是一种细菌针对外源性遗传物质的防御免疫系统,该系统可以特异性识别并剪切DNA,因而被广泛应用于动物、植物和微生物DNA的精准编辑上。CRISPR-Cas9基因剪刀的发现使得原本繁琐复杂的细胞基因编辑工作能在几周甚至更短的时间内完成,推动了各个领域基因编辑技术的发展,并给生命科学领域带来革命性影响。同时CRISPR基因编辑技术因靶点数目多、操作较为简便,成为肿瘤的新型疗法之一,也使得基因治疗有可能成为现实。虽然该技术目前依旧需要解决脱靶、启动子低效等问题,但随着生命科学与基础医学的不断发展,相信CRISPR-Cas系统将会在更多的领域展现其独有的优势。 展开更多

关键词 CRISPR-Cas9系统 sgRNA PAM序列 基因编辑

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MiR-412-3p表达水平与鼻咽癌发病的关系及其对鼻咽癌细胞株CNE1顺铂敏感性的影响 被引量：3

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作者 刘惺 喻泊遥 +3 位作者 王慷慨 马恒 梁琳 周艳宏 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期745-751,共7页

目的:探讨miR-412-3p及乳运铁蛋白(lactotransferrin,LTF)在鼻咽癌组织及癌旁组织中的表达差异并观察干预miR-412-3p能否改善鼻咽癌细胞株CNE1的顺铂敏感性。方法:分别采用实时反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测收集的20... 目的:探讨miR-412-3p及乳运铁蛋白(lactotransferrin,LTF)在鼻咽癌组织及癌旁组织中的表达差异并观察干预miR-412-3p能否改善鼻咽癌细胞株CNE1的顺铂敏感性。方法:分别采用实时反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法检测收集的20例配对的鼻咽癌组织及癌旁组织中miR-412-3p及LTF的表达水平;MTT法及克隆形成实验检测miR-412-3p抑制剂、顺铂处理对CNE1细胞活性及克隆形成能力的影响;蛋白质印迹法检测不同处理对CNE1细胞ERK1/2,STAT3,AKT信号通路的影响。结果:与配对的癌旁组织相比,鼻咽癌组织中miR-412-3p的表达明显升高,伴随LTF表达的显著降低(均P<0.01);在体外培养的CNE1细胞中,不同浓度的miR-412-3p抑制剂可显著抑制miR-412-3p及磷酸化AKT蛋白的表达,同时促进LTF蛋白的表达(P<0.05);预先使用200 nmol/L miR-412-3p抑制剂处理CNE1细胞24 h后,可明显增加20μg/mL顺铂对CNE1细胞活性及克隆形成能力的抑制(P<0.01)。结论:鼻咽癌组织中miR-412-3p的高表达及LTF的低表达可能与鼻咽癌的发病有关;利用miR-412-3p抑制剂降低CNE1细胞中miR-412-3p的水平可增加CNE1细胞对顺铂的敏感性。 展开更多

关键词 鼻咽癌 miR-412-3p 乳运铁蛋白 顺铂 蛋白激酶B

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过表达LncRNAMEG3通过促进铁死亡增强肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性 被引量：5

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作者 朱权 黄柏胜 +1 位作者 位磊艳 罗奇志 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期17-24,共8页

目的探讨过表达LncRNAMEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌(HCC)患者的表达情况;将HepG2和LM3细胞各自分成2组,NC组:转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞;ME... 目的探讨过表达LncRNAMEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌(HCC)患者的表达情况;将HepG2和LM3细胞各自分成2组,NC组:转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞;MEG3-OE组:转染pcDNA3.1(+)-MEG3质粒的细胞。另外在检测活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)实验中,将上述两组细胞分别各自给予顺铂(DDP)或铁死亡抑制剂Fer-1处理,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中MEG3的表达;CCK8和划痕实验检测肝癌细胞的增殖和迁移;另外采用CCK8实验检测DDP对肝癌细胞的抑制率;活性氧荧光探针(DCFH-DA)检测肝癌细胞中ROS的表达,MDA试剂盒检测肝癌细胞中MDA的浓度;Westernblotting实验检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白表达水平。结果MEG3在肝癌细胞中的表达显著低于LO2细胞,与生物信息学分析结果一致(P<0.05);与阴性对照组相比,MEG3-OE组肝癌细胞增殖迁移能力降低(P<0.05)、DDP的抑制率增高(P<0.05)、ROS水平升高、MDA表达水平升高(P<0.05);MEG3-OE组肝癌细胞GPX4和FTH1蛋白表达均显著降低。结论肝癌细胞中LncRNA-MEG3表达降低,过表达MEG3可抑制肝癌细胞增殖与迁移,增强DDP的化疗敏感性,其机制与促进肝癌细胞铁死亡有关。 展开更多

关键词 肝细胞癌 LncRNAMEG3 顺铂 化疗敏感性 铁死亡

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C57BL／6小鼠骨癌痛模型的制备与评价 被引量：15

7

作者 黄东 黄晓玲 +2 位作者 阎雪彬 邬力祥 王明安 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期115-120,共6页

目的：探讨用Lewis肺癌细胞系制备C57BL／6小鼠股骨癌痛动物模型的可行性。方法：选用体质量18～20g雄性C57BL／6小鼠60只，随机分为4组（n=15）。实验组接种Lewis肺癌细胞2×10^6个；热灭活组接种相同数目并热灭活的Lewis肺癌细胞... 目的：探讨用Lewis肺癌细胞系制备C57BL／6小鼠股骨癌痛动物模型的可行性。方法：选用体质量18～20g雄性C57BL／6小鼠60只，随机分为4组（n=15）。实验组接种Lewis肺癌细胞2×10^6个；热灭活组接种相同数目并热灭活的Lewis肺癌细胞；PBS组接种等容积的PBS液；空白对照组只做假手术，不注入任何溶液。分别于接种前及接种后第7天起隔日观察小鼠自发痛行为及测定机械触诱发痛。术后第7，15，23天，将小鼠麻醉后行双侧后肢X线摄片，评估肿瘤诱发的骨组织破坏程度。每次摄片后，取小鼠术侧后肢行HE染色，光镜下观察骨质破坏情况。结果：实验组接种后第11天左右出现明显自发痛行为，表现为自发抬足时间延长；接种后第13天左右出现明显的触诱发痛，表现为50％缩足阈值明显下降，且持续整个观察期。术后23d放射学结果显示，肿瘤细胞充满骨髓腔，且穿破骨皮质向外生长，侵犯周围肌肉组织。结论：C57BL／6小鼠股骨骨髓腔接种Lewis肺癌细胞能够成功制备小鼠骨癌痛模型，且此模型与人类骨癌痛高度相似。 展开更多

关键词 骨癌痛 小鼠 动物模型

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非小细胞肺癌患者区域淋巴结LUNX基因表达及其临床意义 被引量：8

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作者 谭思创 程章波 +4 位作者 马宇超 谭斯品 殷照初 胡文 喻风雷 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1236-1241,共6页

目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患... 目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患者作为对照组。通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测人类LUNX的靶基因的mRNA在实验组和对照组患者淋巴结中的表达,并与患者相对应的临床病理资料进行相关性分析。结果:LUNX mRNA在两组患者的肺组织及肿块中均为阳性表达;实验组43例患者的87枚淋巴结中有33枚(37.93%)有LUNX mRNA表达,对照组15例肺部良性病变患者的26枚淋巴结中有2枚(7.69%)表达LUNX mRNA,两组比较差异有统计学意义(P(0.05)。LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度、临床分期有密切关系(r=0.660,0.500,0.460;P=0.011,0.017,0.021);而与患者性别、年龄、吸烟史,以及血清肺癌4项肿瘤标志物(CEA,CA125,NSE和CYFRA211)无明显关系(r=0.230,0.235,0.180,0.354;P=0.739,0.714,0.773,0.125)。结论:与传统的病理切片检查判断NSCLC淋巴结微转移相比,RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性。LUNX mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 微转移 人类肺组织特异性X蛋白 反转录-聚合酶链式反应

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桃叶珊瑚苷减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤 被引量：10

9

作者 潘冰冰 周勇 +3 位作者 孔高茵 李萍 郭曲练 管茶香 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期128-133,共6页

目的:探讨预防性给予桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用。方法:以成年雄性BABL/c小鼠为研究对象,随机分为对照组、ALI组和AU处理组,每组16只。气管注射LPS(5 m... 目的:探讨预防性给予桃叶珊瑚苷(aucubin,AU)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的作用。方法:以成年雄性BABL/c小鼠为研究对象,随机分为对照组、ALI组和AU处理组,每组16只。气管注射LPS(5 mg/kg)复制ALI小鼠模型,AU处理组于造模前30 min腹腔注射AU(10 mg/kg)。LPS注射6 h后处死小鼠,采用HE染色检测肺组织形态学改变,并进行损伤评分;采用real-time PCR法检测小鼠肺组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)的mRNA表达;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage f luid,BALF)进行细胞计数、检测BALF中的总蛋白量、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性以及TNF-α和IL-10的蛋白含量。结果:与ALI组小鼠相比,AU处理组小鼠肺组织病理损伤明显减轻、损伤评分降低,BALF总细胞、中性粒细胞和巨噬细胞数目显著减少,LDH活性和总蛋白含量亦明显降低(均P<0.01)。同时,AU可减少ALI小鼠肺内TNF-αmRNA和蛋白的表达,增加IL-10 mRNA和蛋白的表达(均P<0.01)。结论:AU可减轻LPS诱导的小鼠ALI。 展开更多

关键词 急性肺损伤 桃叶珊瑚苷 脂多糖 炎症反应 小鼠

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卵清蛋白、金黄色葡萄球菌肠毒素B和维生素D类似物诱导小鼠特应性皮炎模型（英文） 被引量：5

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作者 谭丽娜 鲁建云 +7 位作者 陈美琳 向亚平 程庆梅 梁云生 黄进华 黄健 陈静 高丽华 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1023-1029,共7页

目的:阐明利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)和维生素D类似物(calcipotriene ointment,CO)局部刺激小鼠背部建立特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)动物模型的方法。方法:将BALB/c... 目的:阐明利用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)和维生素D类似物(calcipotriene ointment,CO)局部刺激小鼠背部建立特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)动物模型的方法。方法:将BALB/c小鼠背部去毛随机分为3组:对照组,OVA/SEB,OVA/SEB/CO,分别给予相应的处理。隔天给药并拍照记录皮损状态,于第15天处死小鼠,处死前用皮肤共聚焦显微镜测量表皮厚度。用ELISA方法检测血清IL-2,IL-4,IL-31,干扰素(interferon,IFN)-γ,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和IgE水平,HE染色检测皮损处炎症情况,实时荧光定量PCR检测皮损处上述因子的mRNA表达水平。结果:OVA/SEB/CO组皮损处炎症细胞浸润和表皮增厚明显,血清IgE水平显著增高,血清和皮损处IL-4,IL-31,IFN-γ,TNF-α和NGF表达水平均显著高于对照组或OVA/SEB组。结论:OVA/SEB/CO局部刺激可短时间、低成本地诱导BALB/c小鼠皮肤AD样改变。 展开更多

关键词 特应性皮炎 维生素D类似物 BALB/C小鼠 炎症因子 免疫球蛋白E 表皮厚度

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心型脂肪酸结合蛋白对脂多糖所致心肌细胞损伤的保护作用 被引量：5

11

作者 李异 王慷慨 +1 位作者 蒋永芳 陈军 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期457-463,共7页

目的:探讨心型脂肪酸结合蛋白(heart-fatt y acid binding protein,H-FABP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,通过基因转染方式改变H-FABP表达水平,采用Western... 目的:探讨心型脂肪酸结合蛋白(heart-fatt y acid binding protein,H-FABP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致心肌细胞损伤的保护作用。方法:以原代培养的新生大鼠心肌细胞为模型,通过基因转染方式改变H-FABP表达水平,采用Western印迹、定量PCR检测原代培养中H-FABP的表达。分别检测心肌细胞培养液中TNF-α,IL-1β,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量以及细胞存活率来反映LPS诱导的心肌细胞损伤与炎症反应。结果:LPS处理24 h能增加H-FABP表达。Si RNA降低H-FABP后,显著促进LPS引起的心肌细胞存活率下降、LDH释放以及TNF-α和IL-1β释放。相反,H-FABP过表达能显著抑制LPS引起的心肌细胞损伤与炎症反应。结论:H-FABP对LPS引起的心肌细胞损伤具有保护作用。 展开更多

关键词 心型脂肪酸结合蛋白 脂多糖 心肌细胞 炎症反应

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NMDA受体阻断剂美金刚胺对小鼠内毒素急性肺损伤的保护作用 被引量：2

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作者 马玲 刘伟 +5 位作者 冯丹丹 汉建忠 李杨 程庆梅 岳少杰 罗自强 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期12-16,共5页

目的:探讨NMDA受体阻断剂美金刚胺对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:健康成年雄性昆明小鼠随机分为正常组、美金刚胺组、ALI组和美金刚胺+ALI组。腹腔注射美金刚胺(10 mg/kg)30 min后腹腔注射LPS(10 mg/kg)制作... 目的:探讨NMDA受体阻断剂美金刚胺对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用。方法:健康成年雄性昆明小鼠随机分为正常组、美金刚胺组、ALI组和美金刚胺+ALI组。腹腔注射美金刚胺(10 mg/kg)30 min后腹腔注射LPS(10 mg/kg)制作ALI小鼠模型。各组小鼠处理后6 h测定全肺测定湿/干重比值;采用苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,采用比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;采用ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:美金刚胺预处理可降低LPS诱导的ALI小鼠肺湿/干重比值,减轻其肺组织病理学改变,减少肺组织中MPO和MDA的含量,同时可降低BALF中TNF-α含量以及LDH活性(均P<0.05)。结论:采用美金刚胺阻断NMDA受体可减轻LPS诱导的小鼠ALI,为临床治疗ALI提供了新思路。 展开更多

关键词 急性肺损伤 NMDA受体 美金刚胺 小鼠

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核仁素在糖尿病性心肌病中的表达 被引量：4

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作者 孙丽 贺欣 +5 位作者 王娟 蒋碧梅 童中艺 刘艳娟 李媛彬 肖献忠 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1056-1060,共5页

目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠... 目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠空腹血糖值并计算心脏质量与体质量的比值,观察心肌形态学病理改变,采用免疫组织化学法和Western印迹检测心肌核仁素的表达水平。结果:糖尿病模型组小鼠较对照组空腹血糖值明显升高(P<0.05);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱,出现断裂及溶解;免疫组织化学染色及Western印迹显示模型组小鼠心肌核仁素蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:核仁素可能在糖尿病性心肌病的发生和发展中起着一定的作用。 展开更多

关键词 Ⅱ型糖尿病 心肌病 核仁素 表达

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过表达PAX6抑制肝癌细胞生长和促进自然杀伤细胞杀伤能力的机制 被引量：1

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作者 朱权 黄柏胜 +1 位作者 邬力祥 罗奇志 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期947-956,共10页

目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对... 目的:配对盒基因6(paired box gene 6,PAX6)主要在胚胎发育中发挥调控作用,其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关,在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤(natural killer,NK)细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制。方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A(soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA)和可溶性UL16结合蛋白2(soluble UL16 binding protein 2,sULBP2)的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2,将PAX6过表达质粒(PAX6-OE)和空载体(NC)转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株,分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平;在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6,采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力,ELISA法检测其上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)、去整合素样金属蛋白酶10(disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)的蛋白质表达水平;采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力。结果:与健康人相比较,HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低(P=0.002),而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高(P=0.004和P<0.001)。Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比,HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05)。免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2。与NC组比较,PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降(均P<0.05);PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低(均P<0.05),且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中sMICA和sULBP2的分泌水平均显著低于NC组(均P<0.05)。流式细胞术显示:与NC组比较,PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高(均P<0.05)。结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低,过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长,增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率,其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和sULBP2的分泌水平有关。 展开更多

关键词 配对盒基因6 肝细胞癌 细胞生长 金属蛋白酶 自然杀伤细胞

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人抗肌萎缩蛋白Dp71 shRNA载体构建与检测

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作者 谭思创 陈志康 +4 位作者 曹小霞 文俏程 张蔚林 曾庆仁 谭斯品 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期338-343,共6页

目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DN... 目的:构建有效针对人Dystrophin Dp71基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并验证其干扰效果。方法:设计合成3对针对人Dystrophin Dp71基因的和1对无同源性的siRNA片段,在两端和中间加上酶切位点和Loop环。将合成的DNA片段插入到干扰载体pRNAT-U6.1/Neo中,经过酶切和测序验证,成功构建人Dp71基因的shRNA和空白对照载体。将各干扰载体和空白载体转染人正常胃黏膜上皮细胞(gastric epithelial cells,GES-1)和人支气管上皮细胞(human bronchial epithelium,HBE),Western印迹检测Dp71 shRNA真核表达载体的干扰效率。结果:酶切和测序验证均表明各Dp71-shRNA载体构建成功。将空载体及各Dp71 shRNA载体分别转染GES-1和HBEC,和空白细胞对照及shRNA空白载体组相比,3组Dp71-shRNA能够明显抑制Dp71蛋白表达,但是3组质粒的抑制效率有一定的差异,以Dp71 shRNA2对Dp71表达的干扰效率最强。结论:成功构建了3个有效针对人Dystrophin Dp71基因的shRNA干扰载体,3组质粒都能有效地抑制Dp71在GES-1和HBEC中的表达,其中以Dp71-shRNA2的抑制效率最高。 展开更多

关键词 DYSTROPHIN Dp71 shRNA载体 干扰效率

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小分子RNA干扰组织因子在新生猪胰岛细胞中的表达

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作者 暨明 易受南 +1 位作者 于德玲 王维 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1141-1146,共6页

目的:利用小分子RNA(siRNA)在基因水平对新生猪胰岛细胞进行修饰,抑制细胞组织因子的表达。方法:设计5对siRNA转染新生猪胰岛细胞,用real-time PCR方法筛选组织因子基因沉默效果最好的siRNA或组合,同时流式细胞仪检测siRNA转染对细胞活... 目的:利用小分子RNA(siRNA)在基因水平对新生猪胰岛细胞进行修饰,抑制细胞组织因子的表达。方法:设计5对siRNA转染新生猪胰岛细胞,用real-time PCR方法筛选组织因子基因沉默效果最好的siRNA或组合,同时流式细胞仪检测siRNA转染对细胞活性的影响,real-time PCR和流式细胞仪分别检测细胞组织因子的基因及蛋白沉默水平。结果:根据real-time PCR结果筛选出组织因子基因沉默效果最好的3对siRNA组合,转染新生猪胰岛细胞后,real-time PCR及流式细胞仪检测新生猪胰岛细胞组织因子的基因沉默效率达60%,蛋白表达水平降低约50%,同时流式细胞仪检测结果提示siRNA转染对新生猪胰岛细胞的活性没有明显的影响。结论:3对siRNA组合在体外特异性抑制新生猪胰岛细胞组织因子的表达。 展开更多

关键词 SIRNA 组织因子 新生猪胰岛细胞

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羟基磷灰石纳米颗粒/NR2B-siRNA复合物减轻小鼠福尔马林炎性痛

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作者 杨慧 颜辉 +2 位作者 谷永红 黄东 邬力祥 《中国疼痛医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期540-545,共6页

目的：观察羟基磷灰石纳米颗粒（hydroxyapatite nanoparticles,HA）/N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基（N-Methyl-D-aspartic Acid receptor 2B,NR2B）siRNA复合物（HA/NR2B-siRNA）鞘内转染对小鼠福尔马林炎性痛的影响及脊髓背角NR2B表... 目的：观察羟基磷灰石纳米颗粒（hydroxyapatite nanoparticles,HA）/N-甲基-D-天门冬氨酸受体2B亚基（N-Methyl-D-aspartic Acid receptor 2B,NR2B）siRNA复合物（HA/NR2B-siRNA）鞘内转染对小鼠福尔马林炎性痛的影响及脊髓背角NR2B表达的变化,初步探讨HA作为NR2B-siRNA体内转染载体的可行性.方法：制备HA/NR2B-siRNA,检测HA对NR2B-siRNA的结合能力和稳定性.选18～20 g昆明小鼠48只,随机分六组（n=8）：HANR组,PEINR组,HAGFP组,HA组,NS组,SO组.术后第7天,各组行福尔马林检测后,取腰段脊髓行NR2B免疫组化检测.结果：HA/NR2B-siRNA的最佳质量比为35：1,在生理盐水重悬液中不解离.HN组和PN组的Ⅱ相痛行为显著减少（P＜0.05）.HN组和PN组脊髓背角NR2B阳性细胞数明显减少（P＜0.05）.结论：①HA能与NR2B-siRNA形成稳定的转染复合物;②鞘内注射HA/NR2B-siRNA能减少福尔马林致痛小鼠Ⅱ相痛行为并有效抑制脊髓背角NR2B的表达. 展开更多

关键词 炎性痛 NMDA受体2B亚基 小干扰RNA 小鼠 羟基磷灰石纳米颗粒

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rAAV2载体介导GFP基因转染树突状细胞

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作者 周小莹 暨明 +1 位作者 刘君彦 谭孟群 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期742-746,共5页

目的:在诱导人骨髓CD34+细胞分化成树突状细胞(dendritic cells,DCs)的基础上,探讨2型重组腺相关病毒(Type2recombinant adeno-associated virus,rAAV2)载体介导绿色荧光蛋白(green fluo-rescent protein,GFP)基因转染DCs的条件。方法:... 目的:在诱导人骨髓CD34+细胞分化成树突状细胞(dendritic cells,DCs)的基础上,探讨2型重组腺相关病毒(Type2recombinant adeno-associated virus,rAAV2)载体介导绿色荧光蛋白(green fluo-rescent protein,GFP)基因转染DCs的条件。方法:采用免疫磁珠法分离纯化人骨髓来源的CD34+细胞。在含有IL-4和GM-CSF的培养体系中体外诱导CD34+细胞生成DCs,于第5天加入TNF-α诱导DCs成熟,在不同时间用rAAV2载体介导GFP基因转染未成熟和成熟的DCs。通过电子显微镜和流式细胞仪鉴定树突状细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP的表达。结果:人骨髓CD34+细胞经诱导分化后,在光镜及透射电镜下均可观察到DCs的形态特征,流式细胞仪检测到DCs表型;荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞培养第3天、第5天和加入TNF-α后的rAAV2-GFP转染率分别为0.45%,13.54%和0.25%。结论:本实验中所采用的培养体系可成功将人骨髓CD34+细胞诱导分化成DCs,rAAV2/GFP转染DCs效率随细胞诱导分化时间的延长而增高,且转染未成熟DCs的效率高于转染成熟DCs。 展开更多

关键词 重组腺相关病毒2型 GFP 树突状细胞 基因转导

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异氟醚可能通过ERK磷酸化增强肾动脉平滑肌收缩

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作者 汉建忠 罗自强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期332-335,共4页

目的实验观察异氟醚对去内皮肾动脉血管平滑肌收缩增强的作用,并观察肾动脉血管平滑肌细胞在异氟醚的作用下细胞内MAPK通路的激活状态,以探讨异氟醚引发肾动脉血管平滑肌收缩增强的可能信号通路。方法①去内皮肾动脉条,3%皂苷处理使膜通... 目的实验观察异氟醚对去内皮肾动脉血管平滑肌收缩增强的作用,并观察肾动脉血管平滑肌细胞在异氟醚的作用下细胞内MAPK通路的激活状态,以探讨异氟醚引发肾动脉血管平滑肌收缩增强的可能信号通路。方法①去内皮肾动脉条,3%皂苷处理使膜通透,咖啡因诱除内质网内贮钙,利用10-6钙离子浓度EGTA缓冲液平衡后,应用接近最大的钙离子浓度的EGTA缓冲液使肾动脉条压缩达平衡,加入不同浓度异氟醚EGTA缓冲溶液,观察动脉条张力变化。②1%、3%、5%异氟醚分别作用于培养的肾动脉血管平滑肌细胞,提取细胞内蛋白,Westenblot检测ERK磷酸化的变化。结果异氟醚能使压缩达平衡的肾动脉环张力进一步增强,且与异氟醚浓度呈剂量依赖性。随异氟醚浓度的增加,培养的肾动脉血管平滑肌细胞内ERK1/2(p44/42)磷酸化逐步增强,并随时间增强,在15min后,逐渐下降。 展开更多

关键词 异氟醚 肾动脉 血管平滑肌 ERK 1/2

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COX-2/sEH双抑制剂PTUPB抑制肝星型细胞活化减轻小鼠肝纤维化

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作者 马玲 洪洁茹 +4 位作者 金玲 刘昱镳 杨金桐 周勇 张晨宇 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第1期58-63,71,共7页

目的探讨花生四烯酸(ARA)经细胞色素P450(CYPs)及环氧合酶2(COX-2)代谢途径在非酒精性脂肪肝(NAFLD)相关肝纤维化中的作用,并从肝星形细胞(HSC)活化的角度探讨其机制。方法采用雄性C57BL/6J小鼠为研究对象,高糖高脂饲养(HFD)诱导小鼠NA... 目的探讨花生四烯酸(ARA)经细胞色素P450(CYPs)及环氧合酶2(COX-2)代谢途径在非酒精性脂肪肝(NAFLD)相关肝纤维化中的作用,并从肝星形细胞(HSC)活化的角度探讨其机制。方法采用雄性C57BL/6J小鼠为研究对象,高糖高脂饲养(HFD)诱导小鼠NAFLD相关肝纤维化模型。给予小鼠每天皮下注射COX-2/可溶性环氧化物水解酶(sEH)双抑制剂PTUPB(5 mg/kg)。12周后观察COX-2/sEH双抑制对小鼠NAFLD相关肝纤维化的影响。记录小鼠体重变化;检测小鼠葡萄糖耐受性;HE染色观察小鼠肝组织病理损伤;油红O染色观察小鼠肝组织脂质堆积;Masson染色及Western blot法检测肝组织胶原含量;Real-time PCR法检测小鼠肝组织基质金属蛋白酶抑制因子相关基因表达;Western blot法检测PTUPB对棕榈酸(PA)诱导的肝星形细胞JS1活化的影响。结果PTUPB可显著降低HFD小鼠的体重,提高小鼠葡萄糖耐受性,减轻肝组织病理损伤、脂质堆积和胶原沉积;PTUPB亦可降低HFD小鼠肝组织基质金属蛋白酶抑制因子Timp1及Timp2的基因表达;在细胞水平观察到PTUPB可降低PA诱导的JS1细胞的活化。结论抑制ARA的COX-2/sEH代谢可减轻HFD诱导的小鼠NAFLD相关肝纤维化,其机制与抑制HSC的活化有关。 展开更多

关键词 NAFLD 肝纤维化 COX-2/sEH双抑制剂 肝星形细胞

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