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健脾化瘀方协同吉西他滨通过Nrf2/SLC7A11/GPX4轴诱导胰腺癌细胞铁死亡并抑制其生长
1
作者
陈鑫球
张正则
+6 位作者
刘抒伟
朱小玉
赖永恒
方崇锴
黄俊海
赵希琳
钟崇
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第6期1077-1087,共11页
目的:探究健脾化瘀方(Jianpi-Huayu decoction,JPHYD)联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)对胰腺癌PANC-1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:体外培养PANC-1细胞,采用CCK8法检测JPHYD、GEM不同浓度干预后的细胞活力以选择合适的联用浓度进...
目的:探究健脾化瘀方(Jianpi-Huayu decoction,JPHYD)联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)对胰腺癌PANC-1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:体外培养PANC-1细胞,采用CCK8法检测JPHYD、GEM不同浓度干预后的细胞活力以选择合适的联用浓度进行后续实验;EDU实验、集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、BODIPY 581/591 C11染色检测细胞内脂质过氧化水平;试剂盒检测细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、亚铁离子(Fe^(2+))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)和长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-coA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)等分子mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照(control)组相比,JPHYD和GEM处理后PANC-1细胞活力显著降低,并呈现浓度依赖性;且两者联用可以显著提高GEM的细胞毒性,具有协同作用;与control组相比,JPHYD组、GEM组,JPHYD+GEM组可以显著降低EDU阳性效率、集落形成数并促进细胞凋亡,联用组效果最明显;在细胞中加入JPHYD+GEM后,细胞变圆,细胞活力降低,而细胞中加入铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)对细胞形态和活力没有显著影响,用JPHYD+GEM和Fer-1共处理可逆转JPHYD+GEM对细胞形态和活力的影响;与control,GEM组相比,JPHYD+GEM组可以显著提高细胞内ROS水平以及脂质过氧化水平,提高细胞内Fe^(2+)和MDA水平,降低GSH水平,进一步促进脂质过氧化反应,诱导铁死亡;同时JPHYD+GEM还能显著下调Nrf2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达水平,上调TFR1和ACSL4 mRNA和蛋白表达。而加入Fer-1后则显著逆转联合用药组对铁死亡的激活效应,逆转药效,差异具有统计学意义。结论:健脾化瘀方协同吉西他滨在体外可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4轴诱导PANC-1细胞铁死亡,从而发挥协同抗癌作用。
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关键词
健脾化瘀方
吉西他滨
胰腺癌
铁死亡
Nrf2/SLC7A11/GPX4轴
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题名
健脾化瘀方协同吉西他滨通过Nrf2/SLC7A11/GPX4轴诱导胰腺癌细胞铁死亡并抑制其生长
1
作者
陈鑫球
张正则
刘抒伟
朱小玉
赖永恒
方崇锴
黄俊海
赵希琳
钟崇
机构
中医证候重点实验室/广州中医药大学第一临床医学院
广州中医药大学
科技创新中心
广东省
中医
临床
研究院
广州中医药大学
第一
附属医院胆胰外科
出处
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第6期1077-1087,共11页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.82274526)
广东省自然科学基金资助项目(No.2023A1515011069)
+1 种基金
广州中医药大学“双一流”与高水平大学学科后备人才培育项目(No.A1-2601-22-415-023)
广州中医药大学第一临床医学院“揭榜挂帅”研究生创新能力提升项目(No.A3-0317-25-110-005)。
文摘
目的:探究健脾化瘀方(Jianpi-Huayu decoction,JPHYD)联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)对胰腺癌PANC-1细胞铁死亡的影响及其作用机制。方法:体外培养PANC-1细胞,采用CCK8法检测JPHYD、GEM不同浓度干预后的细胞活力以选择合适的联用浓度进行后续实验;EDU实验、集落形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、BODIPY 581/591 C11染色检测细胞内脂质过氧化水平;试剂盒检测细胞中谷胱甘肽(glutathione,GSH)、亚铁离子(Fe^(2+))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量。RT-qPCR和Western blot分别检测细胞中核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor 1,TFR1)和长链脂酰辅酶A合成酶4(acyl-coA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)等分子mRNA和蛋白表达水平。结果:与对照(control)组相比,JPHYD和GEM处理后PANC-1细胞活力显著降低,并呈现浓度依赖性;且两者联用可以显著提高GEM的细胞毒性,具有协同作用;与control组相比,JPHYD组、GEM组,JPHYD+GEM组可以显著降低EDU阳性效率、集落形成数并促进细胞凋亡,联用组效果最明显;在细胞中加入JPHYD+GEM后,细胞变圆,细胞活力降低,而细胞中加入铁死亡抑制剂ferrostatin-1(Fer-1)对细胞形态和活力没有显著影响,用JPHYD+GEM和Fer-1共处理可逆转JPHYD+GEM对细胞形态和活力的影响;与control,GEM组相比,JPHYD+GEM组可以显著提高细胞内ROS水平以及脂质过氧化水平,提高细胞内Fe^(2+)和MDA水平,降低GSH水平,进一步促进脂质过氧化反应,诱导铁死亡;同时JPHYD+GEM还能显著下调Nrf2、HO-1、SLC7A11和GPX4的mRNA和蛋白表达水平,上调TFR1和ACSL4 mRNA和蛋白表达。而加入Fer-1后则显著逆转联合用药组对铁死亡的激活效应,逆转药效,差异具有统计学意义。结论:健脾化瘀方协同吉西他滨在体外可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4轴诱导PANC-1细胞铁死亡,从而发挥协同抗癌作用。
关键词
健脾化瘀方
吉西他滨
胰腺癌
铁死亡
Nrf2/SLC7A11/GPX4轴
Keywords
Jianpi-Huayu decoction
gemcitabine
pancreatic cancer
ferroptosis
Nrf2/SLC7A11/GPX4 axis
分类号
R735.9 [医药卫生—肿瘤]
R285.5 [医药卫生—中药学]
R363 [医药卫生—病理学]
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被引量
操作
1
健脾化瘀方协同吉西他滨通过Nrf2/SLC7A11/GPX4轴诱导胰腺癌细胞铁死亡并抑制其生长
陈鑫球
张正则
刘抒伟
朱小玉
赖永恒
方崇锴
黄俊海
赵希琳
钟崇
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025
0
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