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小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
4
1
作者
刘斌
陈晓宇
+5 位作者
牟筱
黄银君
牟克斌
祁光宇
许涛
胡永浩
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期1-6,共6页
【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体p...
【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.
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关键词
小反刍兽疫
N5基因
间接酶联免疫吸附试验
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职称材料
题名
小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
被引量：
4
1
作者
刘斌
陈晓宇
牟筱
黄银君
牟克斌
祁光宇
许涛
胡永浩
机构
甘肃农业大学动物医学院
中农
威特
(
天津
)
生物医药
有限责任公司
兰州市城关区动物疫病预防控制中心
中国农业科学院兰州兽医研究所
出处
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第2期1-6,共6页
基金
甘肃省科技计划资助项目(1104NKCA167)
天津市支持科研院所来津发展项目(16PTYJNC00060)
文摘
【目的】建立一种适用于PPRVN蛋白抗体的间接ELISA检测方法,应用于PPR防疫.【方法】根据GenBank中登录小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株N基因序列进行人工合成,设计1对特异引物对N5基因扩增,经测序分析后将N5基因片段和原核表达载体pET-32a(+)相连接,成功构建pET-32a-N5质粒.将pET-32a-N5转化于TransB(DE3)原核表达感受态细胞后用IPTG诱导表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定,重组蛋白分析具有良好的反应原性.【结果】利用原核表达纯化的PPRV N重组蛋白作为包被抗原,初步建立了一种能够检测针对PPRV N蛋白抗体的间接ELISA方法.用建立的方法对112山羊份血清进行了抗体检测,该方法与竞争ELISA试剂盒对比,临床符合率94.8%.【结论】该方法具有较好的敏感性、重复性和特异性.
关键词
小反刍兽疫
N5基因
间接酶联免疫吸附试验
Keywords
peste des petits ruminants
N5 gene
indirect ELISA
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小反刍兽疫N5蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
刘斌
陈晓宇
牟筱
黄银君
牟克斌
祁光宇
许涛
胡永浩
《甘肃农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
4
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