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H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
2
1
作者
贺贞
林东子
+3 位作者
李观强
马卫列
丁航
张志珍
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第16期1691-1694,共4页
目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下...
目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。
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关键词
禽流感病毒
NS1
融合蛋白
多克隆抗体
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职称材料
结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值
被引量：
2
2
作者
陈涛
陈亮
+13 位作者
李海成
郭卉欣
林东子
王威
李玉美
余丽
黎贞燕
孙琦
黄新春
李国周
周杰
赵梅桂
钟球
周琳
《中国防痨杂志》
CAS
2015年第8期827-835,共9页
目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI...
目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI者的筛查，以及这些细胞因子之间的相互调控网络关系。方法40份健康人（简称“健康组”）血液样本，40份确诊为活动性肺结核患者（简称“肺结核组”）的血液样本，40份LTBI者（简称“LTBI组”）的血液样本；通过结核分枝杆菌特异性抗原[早期分泌抗原靶6（ESAT6）和培养滤液蛋白10（CFP10）]进行刺激；通过人细胞因子芯片对刺激后的细胞因子表达变化进行检测；并筛选显著变化的因子，进行细胞因子调控网络构建。结果在肺结核组患者的外周血中嗜酸粒细胞趋化蛋白（CCI。）1（I-309）、趋化因子CXCLgE又称为Mig，即monokineinducedbyIFN-7（IFN-7诱导的单核因子）]、白细胞介素（IL）10、IL6、集落刺激因子（CSF）2、CSF3、IL8、IL1α、IL7、转化生长因子（TGF）-β1、CCL2、IL2、IL13、肿瘤坏死因子（TNF）α等因子在结核特异性抗原刺激后显著上调（2．06倍至3．18倍）；而在健康组和LTBI组当中却没有显著上调。在肺结核组和LTBI组患者的外周血中CCL3、IL1b、CCL8、IFN-γ、CXCL10因子在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后明显上调（2．44倍至11．56倍）；而在健康组中这些因子没有明显的上调。趋化因子CCL4和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α因子在健康组、LTBI组和肺结核组外周血中，经过结核分枝杆菌特异性抗原刺激后，表达都明显上调。细胞因子调控网络显示，这些表达上调的因子，主要集中于IFNγ和IL1α因子调控网络中。结论CXCL10（IP10）、CCL3、CCL8和ILII？因子可能比IFNγ更适合用于结核病或LTBI者的筛查。
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关键词
结核
肺/诊断
细胞因子类
抗原
细菌
细菌蛋白质类
生物学标记
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职称材料
题名
H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
被引量：
2
1
作者
贺贞
林东子
李观强
马卫列
丁航
张志珍
机构
广东医学
院
生物化学与分子生物学教研室
东莞市慢性病防治院检验科
深圳市龙岗区人民医
院
检验
科
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第16期1691-1694,共4页
基金
东莞市高等院校科研机构科技计划项目(2011108101007)
文摘
目的获取H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白的多克隆抗血清,制备NS1蛋白的多克隆抗体。方法利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白GST-NS1,采用Glutathione-sepharose 4B亲和层析纯化融合蛋白。纯化的GST-NS1蛋白以不同剂量皮下注射免疫BALB/c小鼠,收集抗血清,采用Protein A-sepharose和CNBr-sepharose 4B亲和层析从抗血清中纯化抗NS1蛋白的多克隆抗体。Western blot和免疫荧光法鉴定多克隆抗体的特异性,酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体的效价。结果 SDS-PAGE结果表明,融合蛋白GST-NS1以可溶形式表达,诱导4 h的表达量占细菌可溶性蛋白的32.6%,融合蛋白的纯度达到90%以上。Western blot分析显示,亲和层析制备的多克隆抗体对NS1蛋白具有高度特异性。ELISA结果表明,皮下注射25、50、100μg GST-NS1融合蛋白的BALB/c小鼠血清光密度D(450)值均明显增高(P<0.01),其滴度达到1∶3 200。免疫荧光观察到病毒感染的A549细胞中,有内源性NS1蛋白的表达。结论成功地从抗血清中制备出NS1蛋白的多克隆抗体,制备的抗体具有高度特异性。
关键词
禽流感病毒
NS1
融合蛋白
多克隆抗体
分类号
R373.13 [医药卫生—病原生物学]
R392.7 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值
被引量：
2
2
作者
陈涛
陈亮
李海成
郭卉欣
林东子
王威
李玉美
余丽
黎贞燕
孙琦
黄新春
李国周
周杰
赵梅桂
钟球
周琳
机构
广东省结核病控制中心
深圳市宝市安区
慢性病
防治
院
结核病
防治
科
佛山市第四人民医
院
检验
科
暨南大学医学
院
微生物与免疫教研室
华南理工大学轻工食品学
院
东莞市慢性病防治院检验科
出处
《中国防痨杂志》
CAS
2015年第8期827-835,共9页
基金
基金项目：“十二五”国家科技重大专项（2014ZX10003002-003）
广东省科技计划（2014A020212238）
广东省卫生科技项目（C2013008/C2012008）
文摘
目的γ-干扰素（IFN-γ）释放试验（IGRA）是目前广泛运用的结核病筛查和诊断技术，但其无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染（LTBI）。本研究旨在发现更加合适的血清标志物（细胞因子）可以替换IGRA，用于活动性结核病的诊断和LTBI者的筛查，以及这些细胞因子之间的相互调控网络关系。方法40份健康人（简称“健康组”）血液样本，40份确诊为活动性肺结核患者（简称“肺结核组”）的血液样本，40份LTBI者（简称“LTBI组”）的血液样本；通过结核分枝杆菌特异性抗原[早期分泌抗原靶6（ESAT6）和培养滤液蛋白10（CFP10）]进行刺激；通过人细胞因子芯片对刺激后的细胞因子表达变化进行检测；并筛选显著变化的因子，进行细胞因子调控网络构建。结果在肺结核组患者的外周血中嗜酸粒细胞趋化蛋白（CCI。）1（I-309）、趋化因子CXCLgE又称为Mig，即monokineinducedbyIFN-7（IFN-7诱导的单核因子）]、白细胞介素（IL）10、IL6、集落刺激因子（CSF）2、CSF3、IL8、IL1α、IL7、转化生长因子（TGF）-β1、CCL2、IL2、IL13、肿瘤坏死因子（TNF）α等因子在结核特异性抗原刺激后显著上调（2．06倍至3．18倍）；而在健康组和LTBI组当中却没有显著上调。在肺结核组和LTBI组患者的外周血中CCL3、IL1b、CCL8、IFN-γ、CXCL10因子在结核分枝杆菌特异性抗原刺激后明显上调（2．44倍至11．56倍）；而在健康组中这些因子没有明显的上调。趋化因子CCL4和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1α因子在健康组、LTBI组和肺结核组外周血中，经过结核分枝杆菌特异性抗原刺激后，表达都明显上调。细胞因子调控网络显示，这些表达上调的因子，主要集中于IFNγ和IL1α因子调控网络中。结论CXCL10（IP10）、CCL3、CCL8和ILII？因子可能比IFNγ更适合用于结核病或LTBI者的筛查。
关键词
结核
肺/诊断
细胞因子类
抗原
细菌
细菌蛋白质类
生物学标记
Keywords
Tuberculosis, pulmonary/diagnosis
Cytokines
Antigens, bacterial
Bacterial proteins
Biological markers
分类号
R971.1 [医药卫生—药品]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
H5N1亚型禽流感病毒NS1蛋白多克隆抗体的制备及鉴定
贺贞
林东子
李观强
马卫列
丁航
张志珍
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
结核抗原诱导的人外周血细胞因子调控网络在结核病诊断中的价值
陈涛
陈亮
李海成
郭卉欣
林东子
王威
李玉美
余丽
黎贞燕
孙琦
黄新春
李国周
周杰
赵梅桂
钟球
周琳
《中国防痨杂志》
CAS
2015
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