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基于环介导等温扩增微流控芯片技术检测4种鱼类病毒方法的建立
1
作者
任向阳
丁宁
+7 位作者
苗子毅
黄献培
潘一峰
柏建山
黎浩权
袁建文
陈进会
张险朋
《广东海洋大学学报》
北大核心
2025年第5期106-112,共7页
【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、...
【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、KHV、NNV和VHSV各自保守基因设计LAMP引物,预包埋LAMP引物至微流控芯片,注入等温扩增反应试剂,通过电浸润法将反应试剂驱动至各反应位点,复溶预包埋的LAMP引物,在各反应位点进行等温扩增反应。分析该检测体系的特异性、灵敏性和重复性验证,并应用于实际样品检测。【结果】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系对SVCV、KHV、NNV和VHSV阳性样品均出现特异性扩增反应,且不同病毒间未出现交叉反应;对鱼类易感的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、大口黑鲈虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、本尼登虫(Benedenia girellae)和刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)等8种常见病原体阳性样品均无特异性扩增反应。灵敏度实验结果表明,对SVCV、VHSV的检测限均为10 fg/μL,对KHV、NNV的检测限均为1 fg/μL。重复性实验结果表明,4种病毒的变异系数均<5%。该检测体系与实时荧光PCR方法相比,对20份实际样品的检测结果均保持一致。【结论】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系于63℃等温扩增30 min即可完成对SVCV、KHV、NNV和VHSV的同时检测,且特异性好、灵敏度高、重复性好,可为鱼类SVCV、KHV、NNV和VHSV等温快速联检提供技术支撑。
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关键词
环介导等温扩增微流控芯片技术
鲤春病毒血症病毒
锦鲤疱疹病毒
神经坏死病毒
病毒性出血性败血症病毒
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职称材料
题名
基于环介导等温扩增微流控芯片技术检测4种鱼类病毒方法的建立
1
作者
任向阳
丁宁
苗子毅
黄献培
潘一峰
柏建山
黎浩权
袁建文
陈进会
张险朋
机构
广东省口岸安全智能化检测
重点
实验室
/黄埔海关
黄埔海关技术
中心
广州海关技术
中心
汕尾市海洋产业研究院
广州白云机场海关综合技术服务
中心
东莞市人兽共患病重点实验室/东莞市动物疫病预防控制中心
出处
《广东海洋大学学报》
北大核心
2025年第5期106-112,共7页
基金
广东省口岸安全智能化检测重点实验室资助项目(2023B1212010011)
汕尾市2023年度省级科技专项资金(“大专项+任务清单”)项目(2023A014)
+1 种基金
东莞市社会发展科技项目(20231800939872)
东莞市2021年省乡村振兴战略专项资金(“大专项+任务清单”)项目(20211800400112)。
文摘
【目的】建立适合鲤春病毒血症病毒(SVCV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)、神经坏死病毒(NNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)联合检测的环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片检测体系,为4种鱼类病毒等温快速联检提供技术支撑。【方法】根据病毒SVCV、KHV、NNV和VHSV各自保守基因设计LAMP引物,预包埋LAMP引物至微流控芯片,注入等温扩增反应试剂,通过电浸润法将反应试剂驱动至各反应位点,复溶预包埋的LAMP引物,在各反应位点进行等温扩增反应。分析该检测体系的特异性、灵敏性和重复性验证,并应用于实际样品检测。【结果】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系对SVCV、KHV、NNV和VHSV阳性样品均出现特异性扩增反应,且不同病毒间未出现交叉反应;对鱼类易感的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、大口黑鲈虹彩病毒、传染性脾肾坏死病毒、草鱼呼肠孤病毒、本尼登虫(Benedenia girellae)和刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)等8种常见病原体阳性样品均无特异性扩增反应。灵敏度实验结果表明,对SVCV、VHSV的检测限均为10 fg/μL,对KHV、NNV的检测限均为1 fg/μL。重复性实验结果表明,4种病毒的变异系数均<5%。该检测体系与实时荧光PCR方法相比,对20份实际样品的检测结果均保持一致。【结论】本研究建立的LAMP微流控芯片检测体系于63℃等温扩增30 min即可完成对SVCV、KHV、NNV和VHSV的同时检测,且特异性好、灵敏度高、重复性好,可为鱼类SVCV、KHV、NNV和VHSV等温快速联检提供技术支撑。
关键词
环介导等温扩增微流控芯片技术
鲤春病毒血症病毒
锦鲤疱疹病毒
神经坏死病毒
病毒性出血性败血症病毒
Keywords
loop-mediated isothermal amplification microfluidic chip technology
spring viraemia of carp virus
koi herpesvirus
nervous necrosis virus
viral haemorrhagic septicaemia virus
分类号
S917.1 [农业科学—水产科学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
基于环介导等温扩增微流控芯片技术检测4种鱼类病毒方法的建立
任向阳
丁宁
苗子毅
黄献培
潘一峰
柏建山
黎浩权
袁建文
陈进会
张险朋
《广东海洋大学学报》
北大核心
2025
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