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单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察
被引量：
13
1
作者
王锋
吴小涛
+2 位作者
王运涛
邵建树
张明
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期300-304,共5页
目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内...
目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况。结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P<0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。
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关键词
椎间盘退行性变
髓核细胞
胶原酶
细胞培养
甲苯胺蓝
免疫细胞化学
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职称材料
题名
单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察
被引量：
13
1
作者
王锋
吴小涛
王运涛
邵建树
张明
机构
东南大学附属南京市中大医院骨科
出处
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期300-304,共5页
基金
江苏省自然科学基金资助项目(BK2007107)
东南大学国家自然科学基金预研项目(XJ2008342)
文摘
目的:探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外培养扩增人退变椎间盘髓核细胞的可行性。方法:收集20例人退变椎间盘髓核,单纯Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞并连续培养传代,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态学变化,甲苯胺蓝染色检测髓核细胞内聚集蛋白聚糖的表达,免疫细胞化学法行Ⅱ型胶原染色,观察髓核细胞的类软骨表型表达情况。结果:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可较好的分离培养人退变椎间盘髓核细胞,20例人退变椎间盘髓核,培养成功16例;原代髓核细胞平均7d贴壁,呈类圆形或多角形,P1代髓核细胞平均12h贴壁,呈大梭形或多角形,两代细胞融合95%所需时间分别为30d和7d,差异有统计学意义(P<0.01);聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原主要表达于原代和P1代髓核细胞浆内,被甲苯胺蓝染成天蓝色,免疫细胞化学染色主要表现为黄褐色沉淀,两代间聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:单纯Ⅱ型胶原酶消化法可简化髓核细胞分离步骤,提高培养效率;传一代后髓核细胞增殖速率提高,但仍维持类软骨表型,表达聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原。
关键词
椎间盘退行性变
髓核细胞
胶原酶
细胞培养
甲苯胺蓝
免疫细胞化学
Keywords
Intervertebral disc degeneration
Nucleus pulpusus cell
Collagenase
Cell culturing
Toluidineblue
Immunocytochemistry
分类号
Q813.1 [生物学—生物工程]
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1
单纯Ⅱ型胶原酶消化法分离、培养人退变椎间盘髓核细胞的形态学观察
王锋
吴小涛
王运涛
邵建树
张明
《中国脊柱脊髓杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
13
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