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人源结缔组织生长因子单链可变区抗体片段的筛选 被引量:4
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作者 吴国球 刘乃丰 +3 位作者 赵桂琴 范小波 张臣 王明虹 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期464-468,共5页
目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲... 目的:从人源单链可变区片段(ScFv)文库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆,获得ScFv氨基酸序列。方法:以重组硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白为靶目标,用差异吸附法,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取8个克隆,提取DNA后测序;测序阳性的DNA转化E.coliHB2151,IPTG诱导后用间接ELISA方法检测培养上清单链抗体的活性。MTT法测定单链抗体对CTGF促人近曲肾小管上皮HK-2细胞增殖作用的影响。结果:从8个克隆中获得7个完全一致的DNA序列(W0616);另有1个克隆丢失了重链,且轻链框架区(FR)和互补决定区(CDR)序列与W0616不一致;阳性克隆经诱导后,培养上清用间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.001)。同时,该单链抗体片段能明显抑制CTGF引起的HK-2细胞的增殖。结论:成功获得与CTGF特异结合的人源单链抗体可变区序列,为CTGF抑制剂的研究奠定基础。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 噬菌体展示 人源单链可变区片段
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十二肽库中与结缔组织生长因子特异结合噬菌体的筛选 被引量:1
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作者 吴国球 王明虹 +1 位作者 张臣 刘乃丰 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期87-91,共5页
目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆。方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增... 目的:从随机十二肽库中筛选与结缔组织生长因子(CTGF)特异结合的噬菌体克隆。方法:用基因重组方法制备硫氧化还原蛋白(TrxA)以及硫氧化还原蛋白-结缔组织生长因子(TrxA-CTGF)融合蛋白;噬菌体肽库经TrxA预吸附后,与TrxA-CTGF结合,逐步增加选择压力,经过4轮亲和筛选后随机挑取10个克隆,提取单链DNA后测序;用直接和间接ELISA方法检测噬菌体阳性克隆与CTGF结合的特异性。结果:10个克隆中8个DNA序列完全一致(810A),另有2个有不同序列(810B,810C);3个阳性克隆用直接和间接ELISA试验证实能与CTGF发生特异性结合,与TrxA及阴性对照比较差异显著(P<0.05)。结论:成功获得与CTGF特异结合的噬菌体克隆,为CTGF小分子抑制剂的研究打下基础。 展开更多
关键词 结缔组织生长因子 噬菌体展示 生物淘选 抑制剂
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人巨细胞病毒核酸定量荧光PCR检测的尿液室内质控物制备 被引量:1
3
作者 陈克平 徐玉蓉 李丽 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1766-1769,共4页
目的制备人巨细胞病毒核酸定量荧光PCR检测的尿液室内质控物,并观察其稳定性。方法收集荧光PCR检测结果为阳性的尿液标本,经简单过滤处理,-80℃保存观察其稳定性;并比较-20℃与-80℃保存条件对质控物稳定性的影响。结果在120次检测结果... 目的制备人巨细胞病毒核酸定量荧光PCR检测的尿液室内质控物,并观察其稳定性。方法收集荧光PCR检测结果为阳性的尿液标本,经简单过滤处理,-80℃保存观察其稳定性;并比较-20℃与-80℃保存条件对质控物稳定性的影响。结果在120次检测结果中,前20次采用即刻法,室内质控结果均在控;20次后绘制Levey-Jennings质控图,根据Westgard多规则评价室内质控物,结果均在控;-20℃与-80℃保存条件对制备的室内质控物稳定性无影响。结论简单方法制备的尿液室内质控物具有较好的稳定性,可以用作人巨细胞病毒核酸定量荧光PCR检测的室内质控物。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 荧光PCR 室内质控物
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癌胚抗原、糖类抗原CA19-9在肠癌中应用价值探讨 被引量:1
4
作者 董桂冠 吴国球 翟卫中 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期508-509,共2页
目的:探讨癌胚抗原(CEA)、糖类抗原CA19鄄9在肠癌中应用价值。方法:化学发光技术对65例肠癌患者进行术前、术后跟踪检测。结果:CEA、CA19鄄9能反映病情的发展、手术的效果。结论:CEA、CA19鄄9与病情发展密切相关,可作肠癌手术随诊指标。
关键词 肠癌 癌胚抗原(CEA) 糖类抗原CA19—9
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