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题名Cep70的细胞定位分析及在微管聚合中的作用研究
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作者
张俞
史兴娟
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机构
东南大学生命科学研究院/发育与疾病相关基因教育部重点实验室
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出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第6期1094-1099,共6页
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基金
国家自然科学基金项目(81770381
31301113)
+1 种基金
江苏省自然科学基金项目(BK20130607)
中央高校基本科研业务费专项资金
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文摘
[目的]本试验旨在研究Cep70的细胞定位及其在微管聚合中的调节作用。[方法]利用原核表达质粒p MALp2TCep70,在细菌中诱导表达融合蛋白MBP-Cep70。用融合蛋白免疫小鼠,获得特异性的抗Cep70抗体。首先用该抗体对细胞进行免疫荧光显微分析,检测Cep70在细胞内的定位,再利用荧光标记的微管体外组装试剂盒研究Cep70在体外微管聚合中对微管形态的调节,最后利用微管混浊度试验,验证Cep70对微管聚合的功能影响。[结果]通过从细菌中诱导纯化蛋白,获得了大量高纯度的融合蛋白MBP-Cep70。纯化蛋白免疫小鼠后得到了靶向Cep70的抗体。免疫荧光显微分析发现Cep70定位在微管组织中心(MTOC),即中心体上。通过对荧光标记的微管蛋白进行体外组装分析,发现Cep70增加了体外聚合微管的长度。进一步通过微管浑浊度试验,发现Cep70促进了体外微管的聚合。[结论]Cep70在细胞内定位在微管组织中心上,且在体外微管聚合上具有一定促进作用。
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关键词
Cep70
抗体
免疫荧光
微管聚合
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Keywords
Cep70
antibody
immunofluorescence
microtubule polymerization
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分类号
S852
[农业科学—基础兽医学]
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