目的:获得尘螨变应原第6组分Der f 6原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE结合率。方法:酶切质粒p ET28a(+)-Der f 6获得目的基因Der f 6,将其与p ET32a(+)载体连接成质粒p ET32a(+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基...目的:获得尘螨变应原第6组分Der f 6原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE结合率。方法:酶切质粒p ET28a(+)-Der f 6获得目的基因Der f 6,将其与p ET32a(+)载体连接成质粒p ET32a(+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹实验(Western blot)和蛋白质串联质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定纯化产物。以纯化获得的产物为包被抗原建立间接ELISA法检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况。结果:成功构建了原核表达质粒p ET32a(+)-Der f 6,将该质粒转化E.coli BL21诱导表达,亲和层析纯化后,SDS-PAGE显示获得目的蛋白,Western blot验证其能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其Der f 6结构一致。以此产物为包被抗原建立间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为41.3%(19/46)。结论:成功构建了原核表达质粒p ET32a(+)-Der f 6,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性。展开更多
文摘目的探讨前置基于多模型的自适应统计迭代重建(ASiR-V)技术对胸部CT辐射剂量和图像质量的影响。方法采用GE Revolution CT对胸部仿真体模和120例胸部CT平扫患者(分为6组,每组20例)分别设定前置ASiR-V权重为0、20%、40%、60%、80%、100%进行扫描。管电压120kV,管电流采用自动毫安(Smart mA 10-500)技术,噪声指数设为11。记录胸部体模及各组患者扫描的剂量长度乘积,计算并比较各组有效剂量(ED)。以胸部体模不同组织结构(肺组织、脊柱旁软组织、主动脉和椎体)的CT值和标准差(SD)作为客观指标,结合对各组患者的图像主观评分,比较图像质量的组间差异。结果随着前置ASiR-V权重的增加,体模及患者的ED均呈对数降低,体模不同组织CT值、图像噪声均未见明显改变。ASiR-V权重为40%时纵隔窗和肺窗的主观评分开始下降;60%时纵隔窗和肺窗图像主观评分相对40%时出现明显下降(P<0.05)。ASiR-V权重为40%,ED降至ASiR-V权重为0时的57.21%。结论前置ASiR-V可以降低辐射剂量,同时又不影响图像客观指标;前置ASiR-V权重为40%时,图像仍可保证临床诊断需求,且辐射剂量明显降低,临床应用价值最高。
文摘目的:获得尘螨变应原第6组分Der f 6原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE结合率。方法:酶切质粒p ET28a(+)-Der f 6获得目的基因Der f 6,将其与p ET32a(+)载体连接成质粒p ET32a(+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹实验(Western blot)和蛋白质串联质谱(MALDI-TOF/TOF)鉴定纯化产物。以纯化获得的产物为包被抗原建立间接ELISA法检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况。结果:成功构建了原核表达质粒p ET32a(+)-Der f 6,将该质粒转化E.coli BL21诱导表达,亲和层析纯化后,SDS-PAGE显示获得目的蛋白,Western blot验证其能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其Der f 6结构一致。以此产物为包被抗原建立间接ELISA检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为41.3%(19/46)。结论:成功构建了原核表达质粒p ET32a(+)-Der f 6,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性。
