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小麂Sry基因的克隆和测序 被引量：13
1
作者 鲁晓瑄 张悦 单祥年 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期299-301,共3页
应用人的性别决定基因SRY(Sex determiningRegionYgene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补... 应用人的性别决定基因SRY(Sex determiningRegionYgene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补法克隆到质粒pGEM-T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果表明小麂Sry基因保守序列与人的SRY基因保守区相同碱基的比值为152/184,达到82.6%。提示小麂Sry基因与人的SRY基因存在着较高的同源性,说明SRY基因在进化过程中高度保守。 展开更多
关键词 SRY基因 性别决定 小麂 克隆 DNA 人 同源性 序列分析
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戊型肝炎病毒第4基因型中国株ORF2编码蛋白的抗原表位分析 被引量：4
2
作者 张红梅 戴星 +2 位作者 孟继鸿 赵宇 单祥年 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期637-642,共6页
以戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体（McAbs）,同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白,与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起,通过ELISA、免疫印迹（Western blot）以及竞争抑制实验对主... 以戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体（McAbs）,同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白,与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起,通过ELISA、免疫印迹（Western blot）以及竞争抑制实验对主要存在于我国的HEV第4基因型毒株进行抗原表位分析。结果发现所制备的McAbs与p166Chn截短蛋白的免疫反应有两种类型,以1G10为代表的McAbs能与N端不短于aa477、C端不短于aa613的截短蛋白反应,其针对的抗原表位是构象依赖型表位,依赖于aa477-aa613肽链区段;而McAb2F11则能与N端不短于aa474、C端不短于aa617的截短蛋白反应,其针对的抗原表位也是构象表位,但需依赖于较长的肽链区段（aa474-aa617）。竞争抑制实验显示两类McAbs互不抑制,进一步证实了所发现的两个抗原表位在空间位置上的不同。更有意义的是,两类McAbs均能与其他不同HEV基因型和亚型来源的p166重组蛋白发生阳性反应,表明这两个抗原表位是HEV基因型共同性的,可以在世界各国分布的不同基因型HEV毒株中诱导交叉免疫。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 单克隆抗体 基因型 表位
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抗戊型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建与筛选 被引量：5
3
作者 魏华 张建琼 +3 位作者 吕海芹 孟继鸿 鲁晓瑄 谢维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期473-475,485,共4页
目的 :构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV)噬菌体抗体库 ,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体 (mAb)。方法 :取抗HEV抗体阳性的 6例HE患者静脉血 ,分离淋巴细胞 ,提取细胞总RNA后逆转录。用一组人IgGFab基因特异性引物 ,分别扩增IgGκ0轻链与重... 目的 :构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV)噬菌体抗体库 ,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体 (mAb)。方法 :取抗HEV抗体阳性的 6例HE患者静脉血 ,分离淋巴细胞 ,提取细胞总RNA后逆转录。用一组人IgGFab基因特异性引物 ,分别扩增IgGκ0轻链与重链Fd段基因。将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点 ,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1 Blue ,再以辅助噬菌体VCSM13超感染 ,构建人抗HEV噬菌体抗体库。采用独特的 5轮筛选法 (逐渐降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原 ,筛选人噬菌体抗体库 ,并以ELISA鉴定噬菌体抗体。结果 :经数次电转化构建了容量为1.9× 10 7重组率为 80 %的κ轻链基因库 ;容量为 1.8× 10 7重组率为 2 0 %的Fab基因库。以含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异淘筛 5次 ,出现特异富集。ELISA鉴定第 5轮筛选产物 ,得到 4株与HEVORF2重组混合抗原具有较高亲和力的Fab噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。结论 :成功地构建了人抗HEV噬菌体抗体库 ,并获得人源抗HEV特异性噬菌体抗体。 展开更多
关键词 噬菌体展示 抗体库 戊型肝炎病毒
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唇受精卵的皮层反应及其引发机制 被引量：21
4
作者 甘光明 张耀光 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期479-487,共9页
唇皮层小泡1-4层,在光镜和透射电镜下均具5种形态,由外及内,小泡内颗粒直径逐渐减少。在H．E染 色中,动物极低纬度区和精孔器附近的卵膜和质膜之间,具少量均匀的着色非常深的紫色斑点,与Ⅰ型皮层小泡内 容物形态结构相似,在透射电镜下... 唇皮层小泡1-4层,在光镜和透射电镜下均具5种形态,由外及内,小泡内颗粒直径逐渐减少。在H．E染 色中,动物极低纬度区和精孔器附近的卵膜和质膜之间,具少量均匀的着色非常深的紫色斑点,与Ⅰ型皮层小泡内 容物形态结构相似,在透射电镜下,这些斑点和卵膜、质膜有明显的界限,其外没有包被膜相结构,我们称之皮层反 应引发斑,这是在鱼类受精卵中发现的一个新的结构。扫描电镜下,引发斑成絮状。引发斑对皮层反应的引发具 有重要作用。皮层反应可分为潜伏期、始发期、高潮期、衰退期四个时期,潜伏期没有皮层反应发生,始发期只是位 于受精卵外围的少量皮层小泡释放,高潮期为多个皮层小泡相互融合形成一个大的泡状体,泡状体再与质膜接触、 融合后,随后破裂,释放内容物,可分为两个阶段,衰退期释放Ⅴ型皮层小泡和其他残存的皮层小泡以及未完全降 解卵黄颗粒碎屑;皮层反应是由Ⅰ型皮层小泡和引发斑诱导的爆发性的链式反应,卵子外侧的皮层反应可以诱导 内侧皮层反应。皮层反应有两个起始区域,在受精后35s开始于动物极低纬度区,稍后出现在精孔器前庭附近,随 后在这两个始发区向四周扩散,并在前庭以外的区域愈合、打通。皮层小泡分批多次释放,质膜多次重组。精子入 卵位点附近没有皮层小泡,不发生皮层反应,这提示皮层反应对鱼类多精受精的抑制效应有限。 展开更多
关键词 唇[鱼骨] 皮层小泡 皮层反应 引发斑 引发机制
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抗果蝇ECP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量：2
5
作者 刘加彬 汪道涌 +3 位作者 孙明宽 徐敏 刘琍 谢维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期745-746,共2页
目的: 制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白, 免疫6～8 wk的雌性BALB/c小鼠, 取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系.用间接ELISA... 目的: 制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白, 免疫6～8 wk的雌性BALB/c小鼠, 取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系.用间接ELISA及Western blot等方法对mAb的Ig亚类(型)、腹水效价及特异性进行鉴定.结果: 获得1株杂交瘤细胞株, 命名为8G9.Ig亚类(型)鉴定表明, 此株mAb为IgG1(κ型).腹水mAb的效价为 1∶ 1×105.Western blot分析表明, 该株mAb可与果蝇的幼虫、蛹及成虫组织中表达的ECP特异性结合, 可特异性的识别ECP抗原的231～300aa区段.结论: 获得1株能稳定分泌抗ECP mAb的细胞株, 为进一步研究ECP的功能奠定了基础. 展开更多
关键词 黑腹果蝇 ECP 单克隆抗体 抗原表位
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抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用 被引量：2
6
作者 单军 张建琼 +4 位作者 金俊飞 马达 鲍海逊 缪凤琴 谢维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期60-63,共4页
　目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mA... 　目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。 展开更多
关键词 ARL-1蛋白 单克隆抗体 免疫组化染色
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食管癌组织HLA-I类抗原及相关分子的表达及意义 被引量：6
7
作者 缪凤琴 张建琼 +5 位作者 单军 蒋芹 陈昊 李淑锋 张建民 谢维 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2004年第4期76-79,共4页
为探讨HLA抗原及相关分子在食管癌中的表达水平及其与病理学分型的关系 ,应用了 5种HLA抗原及相关分子单抗 ,采用免疫组织化学方法 (ABC法 )对江苏省 83例食管癌组织石蜡切片进行检测并结合肿瘤的临床病理资料综合分析 .得出结果 :HLA ... 为探讨HLA抗原及相关分子在食管癌中的表达水平及其与病理学分型的关系 ,应用了 5种HLA抗原及相关分子单抗 ,采用免疫组织化学方法 (ABC法 )对江苏省 83例食管癌组织石蜡切片进行检测并结合肿瘤的临床病理资料综合分析 .得出结果 :HLA B/C、HLA A、β2 m、LMP2、calnexin各分子的下调率分别为 12 %、2 5 .3 %、15 .7%、19.3 %、2 0 .8% ;丢失率分别为 2 9%、3 3 .7%、49.3 %、2 4.1%、41.5 % .其中LMP2位点的表达与肿瘤分型相关 ,随着食管癌分化程度降低 ,下调率增加 .2 7例病例有淋巴结转移 ,但统计学分析各分子的表达与转移均无明显相关性 .研究表明 ,食管癌中有明显的HLA I类分子表达下调或缺失 . 展开更多
关键词 食管癌 HLA 免疫组织化学方法
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抗果蝇Dxl6蛋白抗体的制备及特异性分析
8
作者 王善治 袁榴娣 +2 位作者 万永奇 刘琍 谢维 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期460-464,共5页
为了研究果蝇中SR蛋白家族新成员Dxl6的功能,通过RT PCR得到Dxl6的全长cDNA,并根据Dxl6基因产物的功能区,分别将Dxl6中间区域(Dxl6middlepart,Dxl6MP)、Dxl6C末端RS结构域(Dxl6RSdomain,Dxl6RSD)序列亚克隆至pGEX 4T 1(His)6C及pET32a... 为了研究果蝇中SR蛋白家族新成员Dxl6的功能,通过RT PCR得到Dxl6的全长cDNA,并根据Dxl6基因产物的功能区,分别将Dxl6中间区域(Dxl6middlepart,Dxl6MP)、Dxl6C末端RS结构域(Dxl6RSdomain,Dxl6RSD)序列亚克隆至pGEX 4T 1(His)6C及pET32a表达载体中,表达和纯化获得融合蛋白。用纯化的融合蛋白GST Dxl6RSD His和GST Dxl6MP His免疫家兔,分别得到抗Dxl6RSD和抗Dxl6MP两种抗体。WESTERNBLOT结果显示两种抗体能特异地识别在原核表达系统内表达的抗原,抗Dxl6RSD的抗体对果蝇组织中的Dxl6具有较高的特异性。 展开更多
关键词 SR蛋白 果蝇 Dx16基因 原核表达 抗体制备
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抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定
9
作者 马达 金俊飞 +3 位作者 孙明宽 单军 张建琼 谢维 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期738-742,共5页
目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosett... 目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosetta诱导表达GST-AR蛋白.以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定.使用Clustalx和 Antheprot软件, 比较AR与ARL-1的同源性, 表达GST-Dar[80～142氨基酸(aa)], 与ARL-1差异较大; 并分析AR的抗原性, 表达GST-Da1(1～79 aa)、GST-Da2(80～99 aa)、 GST-Da3(111～142 aa)、 GST-Da4(143～316 aa).利用AR全长及截短蛋白, 采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位.结果: 获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、 AR7B3G4和ARF10.3株抗GST-AR的 mAb均为IgG1(κ型), 腹水mAb效价为1∶ 4×105, 细胞培养上清mAb效价为1∶ 1×104, 3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应, 而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应.它们分别为抗GST-Da1、GST-Da3和GST-Da4蛋白的mAb.结论: 成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的 1～79、111～142、143～316位氨基酸.将它们与抗ARL-1 mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能, 并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具. 展开更多
关键词 醛糖还原酶 醛糖还原酶相似蛋白 单克隆抗体
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