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小麂线粒体基因组全序列的测定和分析 被引量：17
1
作者 张晓梅 单祥年 +3 位作者 施燕峰 张海军 李健 郑爱玲 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期849-853,共5页
通过建立麂属动物小麂线粒体DNA文库、鸟枪法测序 ,获得了小麂线粒体基因组全序列并对其基因组成、蛋白质的编码序列、tRNA基因等结构作了详细分析 ,这也是国内有关哺乳动物线粒体基因组全序列的首次报道。与其他哺乳动物线粒体基因组... 通过建立麂属动物小麂线粒体DNA文库、鸟枪法测序 ,获得了小麂线粒体基因组全序列并对其基因组成、蛋白质的编码序列、tRNA基因等结构作了详细分析 ,这也是国内有关哺乳动物线粒体基因组全序列的首次报道。与其他哺乳动物线粒体基因组全序列的比较研究发现 :全长为 16 35 4bp的小麂线粒体基因组同样编码 13种蛋白质、2种rRNA和 2 2种tRNA ,除了用于调控线粒体DNA复制和转录的D Loop区以外 ,小麂线粒体基因组各基因长度、位置与其他哺乳动物相似 。 展开更多
关键词 小麂 线粒体基因组 鸟枪法测序 序列分析
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非综合征耳聋大家系永生细胞系的建立及几种EB病毒转化外周血淋巴细胞建系方法的探讨 被引量：12
2
作者 赵苏瑛 张海军 +3 位作者 徐春宏 单云峰 单祥年 史庭燕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期447-450,共4页
永久保存珍贵的家系材料,是对该家系进行深入研究的基础,为此采用EB病毒(Epstein Barrvirus,EBV)转化淋巴细胞的方法对中国江苏淮阴地区非综合征耳聋大家系行建系工作。该家系患者呈典型的母系遗传特征,且研究发现患者中均具有线粒体DNA... 永久保存珍贵的家系材料,是对该家系进行深入研究的基础,为此采用EB病毒(Epstein Barrvirus,EBV)转化淋巴细胞的方法对中国江苏淮阴地区非综合征耳聋大家系行建系工作。该家系患者呈典型的母系遗传特征,且研究发现患者中均具有线粒体DNA12SRNAA1555G突变,是迄今世界上最大的非综合征耳聋家系之一,在该家系的建系过程中使用了4种不同的方法。建系结果分别为:微量全血法1株,冻存全血法1株,冻存白细胞法14株及环孢霉素A(CyA)法36株,共计52株。文章就建系工作及这4种转化方法作一简单探讨。 展开更多
关键词 EB病毒 永生细胞系 非综合征耳聋
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黑麂线粒体基因组序列分析 被引量：12
3
作者 张海军 李健 +3 位作者 施燕峰 张晓梅 徐春宏 单祥年 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期513-518,共6页
采用PCR产物直接测序方法测定了黑麂线粒体基因组全序列 ,初步分析了其基因组特点并定位了各基因的位置 .结果显示 :黑麂的线粒体基因组全序列长度为 1 6 35 7bp ,可编码 2 2种tRNA、2种rRNA、1 3种蛋白质 ,碱基组成及基因位置与小麂、... 采用PCR产物直接测序方法测定了黑麂线粒体基因组全序列 ,初步分析了其基因组特点并定位了各基因的位置 .结果显示 :黑麂的线粒体基因组全序列长度为 1 6 35 7bp ,可编码 2 2种tRNA、2种rRNA、1 3种蛋白质 ,碱基组成及基因位置与小麂、赤麂和其它哺乳类动物的线粒体基因组相似 ;模拟电子酶切图谱与先前的报道基本一致 ;基于细胞色素b的全基因序列 ,分别以最大简约法、N J法、最大似然数法与其它 1 4种鹿类动物的相应序列进行了聚类分析 ,构建出相似的系统进化树 :初步确定了麂亚科动物在鹿科中处于与鹿亚科、北美鹿亚科并列的进化地位 .在此基础上 ,进一步以黑麂、赤麂、小麂的线粒体编码RNA和编码蛋白质的基因序列构建系统进化树 ,分析了三者的亲缘关系 .结果表明 :黑麂和赤麂亲缘关系较近 ,是较新的物种 。 展开更多
关键词 黑麂 线粒体基因组 种系进化树
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含HSVtk基因重组逆转录病毒包装细胞PA317/TK的建立 被引量：13
4
作者 陈道桢 李淑锋 +7 位作者 鲁晓萱 王静 苏宁 刘璐 黄鹰 童冠圣 洪泽辉 张丽珊 《医学研究生学报》 CAS 2003年第1期1-3,共3页
目的 :研究肿瘤的自杀基因疗法 ,建立含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因重组逆转录病毒包装细胞PA317/TK。　方法 :应用脂质体转移方法将逆转录病毒载体GINaTK导入PA317,经G4 18筛选阳性克隆细胞后分别用PCR和扫描电镜检测HSVtk基因... 目的 :研究肿瘤的自杀基因疗法 ,建立含单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSVtk)基因重组逆转录病毒包装细胞PA317/TK。　方法 :应用脂质体转移方法将逆转录病毒载体GINaTK导入PA317,经G4 18筛选阳性克隆细胞后分别用PCR和扫描电镜检测HSVtk基因整合和病毒颗粒分泌情况。　结果 :逆转录病毒载体GINaTK导入PA317,G4 18后筛选得到阳性克隆细胞 ,命名为PA317/TK。PCR检测PA317/TK细胞出现一特异性 4 0 4bp阳性条带 ,而PA317细胞没有扩增出相应条带。PA317/TK细胞经扫描电镜检测见其表面有颗粒状突起 ,其周围有许多呈团状的病毒颗粒。证实含HSVtk基因重组逆转录病毒存在于包装细胞中。　结论 展开更多
关键词 HSVtk 基因重组 逆转录病毒 包装细胞 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
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反义hTR抑制人胰腺癌P3细胞系端粒酶活性和增殖的研究 被引量：2
5
作者 张红梅 张丽珊 +2 位作者 杨德同 周家华 洪泽辉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期237-241,共5页
设计针对端粒酶RNA模板序列并经硫代磷酸修饰的正义、反义和随机序列寡核苷酸 ,以正常人成纤维细胞作对照 ,观察其对人胰腺癌细胞端粒酶活性和细胞生长增殖的影响作用以及对正常细胞是否有毒副作用。结果表明 :针对hTR模板区的反义寡核... 设计针对端粒酶RNA模板序列并经硫代磷酸修饰的正义、反义和随机序列寡核苷酸 ,以正常人成纤维细胞作对照 ,观察其对人胰腺癌细胞端粒酶活性和细胞生长增殖的影响作用以及对正常细胞是否有毒副作用。结果表明 :针对hTR模板区的反义寡核苷酸能降低胰腺癌P3细胞端粒酶活性 ,抑制细胞生长 ,促进细胞周期改变并诱导细胞发生凋亡 ,而且对正常细胞没有明显的毒副作用。因此我们认为利用反义技术封闭hTR基因很可能成为治疗肿瘤的安全、有效手段之一。 展开更多
关键词 反义HTR 抑制 人胰腺癌P3细胞系 端粒酶活性 细胞周期 细胞增殖
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枳PPF-1同源基因的克隆及分析 被引量：2
6
作者 罗海澜 王大勇 夏仁学 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期28-32,共5页
以枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]实生苗为材料,采用RT-PCR及RACE技术,获得了PPF-1(开花、衰老相关基因)同源基因的cDNA全长序列PtPPF-1,该cDNA全长1 493 bp,编码452个氨基酸,与豌豆PPF-1、拟南芥ALB3、水稻PPF-1及葡萄一未命名基因... 以枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]实生苗为材料,采用RT-PCR及RACE技术,获得了PPF-1(开花、衰老相关基因)同源基因的cDNA全长序列PtPPF-1,该cDNA全长1 493 bp,编码452个氨基酸,与豌豆PPF-1、拟南芥ALB3、水稻PPF-1及葡萄一未命名基因的氨基酸序列同源性较高,说明PPF-1基因在进化过程中可能变异较小。半定量RT-PCR分析表明PtPPF-1在叶片中表达量最高,顶芽和茎中相似,在根中未检测到,表明该基因功能与叶绿体有关。 展开更多
关键词 枳 PtPPF-1 克隆 RT—PCR
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一个能诱生戊型肝炎病毒中和抗体的ORF2编码蛋白短片段 被引量：1
7
作者 张红梅 孟继鸿 +1 位作者 戴星 单祥年 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期483-487,共5页
目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472～617)和pN477-C613(aa477～613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间... 目的:比较戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型ORF2编码蛋白片段pN472-C617(aa472～617)和pN477-C613(aa477～613)的免疫原性,找到能诱生HEV中和抗体的ORF2编码蛋白的更短片段。方法:表达和纯化pN472-C617和pN477-C613,分别免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA检测免疫血清的抗体效价,并以基于PCR的体外中和试验检测免疫血清的中和活性。结果:pN472-C617和pN477-C613可在大肠杆菌高效可溶性表达,纯化后的重组蛋白能在小鼠体内诱导出高效价的抗体。基于PCR的体外中和试验显示pN472-C617免疫血清可有效中和HEV,阻断其在敏感细胞表面的吸附和细胞内复制;而两端仅比pN472-C617各短5个氨基酸的pN477-C613的免疫血清不具有中和HEV的活性。结论:重组蛋白pN472-C617具有良好的抗原性和诱生中和抗体的能力,是目前文献报道中含有HEV中和抗原表位的最短ORF2编码蛋白片段,可作为重组亚单位候选疫苗用于HEV疫苗的开发。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 重组蛋白 中和抗原表位 中和抗体
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HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗小鼠乳腺癌的研究 被引量：1
8
作者 陈道桢 张丽珊 +9 位作者 唐秋莎 鲁晓萱 赵琪 薛文群 樊启英 黄学文 苏宁 刘璐 黄鹰 童冠圣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期267-270,274,F003,共6页
目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组。分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋... 目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组。分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋窝皮下,观察各组肿瘤形成及肿瘤治疗情况并统计各组生存期。治疗结束后将标本制成石蜡切片进行病理学分析,RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中的表达情况。统计学处理采用SPSS软件进行完全随机的方差分析(ANOVA)。结果:实验结果显示小鼠成瘤率为100％。丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)可明显抑制MA782/5S-8102/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。经GCV治疗后,MA782/5S-8102/TK组和混合细胞组的肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约36.7％和28.6％(均P<0.001);生存期也明显延长(P<0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达。实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论:逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782/5S-8102并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内对乳腺癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 丙氧鸟苷 旁观者效应 逆转录病毒载体 小鼠乳腺癌
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单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷自杀基因系统对宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用的研究 被引量：2
9
作者 薛文群 詹惠英 +5 位作者 陈道桢 赵琪 朱云霞 杨幼易 鲁晓萱 樊启英 《医学研究生学报》 CAS 2005年第1期4-7,共4页
目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。　方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela... 目的 :观察单纯疱疹病毒胸苷激酶 (HSV TK)丙氧鸟苷 (GCV)自杀基因系统对人宫颈癌Hela细胞系体外杀伤作用及其旁观效应。　方法 :采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317。取病毒上清液感染Hela细胞 ,得到带有HSV TK基因的Hela/TK细胞 ,并将其用于体外实验。　结果 :载体HSV TK导入了PA317细胞。体外实验结果显示 ,当Hela/TK细胞数占混合细胞 10 %时 ,低浓度 (10mg/L)的GCV就可将 5 0 %左右的肿瘤细胞杀死。GCV作用后的实验组Hela /TK细胞基因组经琼脂糖凝胶电泳后可观察到典型的DNA梯状条带。　结论 :逆转录病毒可介导HSV TK基因转入人宫颈癌Hela细胞并获稳定表达 ,HSV TK/GCV自杀基因系统在体外对宫颈癌细胞有杀伤作用 ,且存在明显的旁观效应。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒胸苷激酶 旁观效应 逆转录病毒载体 人宫颈癌 自杀基因治疗
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