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载体和基因片段的选择对戊型肝炎病毒基因免疫抗原表达的影响 被引量：4
1
作者 房雪峰 王立新 +3 位作者 孟继鸿 董晨 田华 翟理杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期22-25,共4页
目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1... 目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平。结果成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达。结论载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 基因免疫 中和抗原表位 基因表达
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戊型肝炎病毒Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅳ基因型B细胞抗原表位的异同 被引量：10
2
作者 赵宇 梁久红 +4 位作者 孟继鸿 张兰芳 张红梅 丁福 季晓辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期591-595,共5页
目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 ... 目的 :制备戊型肝炎病毒 (HEV)缅甸株和墨西哥株ORF2重组蛋白 (p16 6Bur和p16 6Mex)的单克隆抗体(McAbs) ,用于分析HEV不同基因型B细胞抗原表位的特点。方法 :将免疫BALB C小鼠脾细胞与SP2 0骨髓瘤细胞融合 ,获得分泌抗 p16 6Bur和抗 p16 6MexMcAbs的杂交瘤细胞株 ,然后采用ELISA和免疫印迹法测定McAbs与不同基因型HEVORF2编码蛋白p16 6的免疫反应性。结果 :获得 4株杂交瘤细胞株 ,即分泌抗 p16 6BurMcAbs的 2C2 、2B1 以及分泌抗 p16 6MexMcAbs的D8G1 0 和E5E1 2 ,其中 2B1 分泌的McAb仅能与第Ⅰ、Ⅱ基因型编码的重组蛋白结合 ,而其余 3株分泌的McAbs既能与I、II基因型HEV的p16 6重组蛋白发生反应 ,也能与III、IV基因型的p16 6蛋白反应。结论 :HEV第Ⅰ、Ⅱ基因型与Ⅲ、Ⅳ基因型ORF2编码蛋白既有共同又有不同的B细胞抗原表位。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 抗原表位 单克隆抗体 重组蛋白 基因型
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小鼠白细胞介素21 cDNA的克隆及真核表达质粒的构建 被引量：14
3
作者 陈国兵 窦骏 +1 位作者 陈峻崧 洪晓武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期49-52,共4页
目的 :克隆小鼠白细胞介素 2 1(IL 2 1)基因 ,构建真核表达质粒 ,用以进行肿瘤的基因治疗。方法 :用RT PCR法 ,从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL 2 1cDNA ,克隆入哺乳动物细胞高效表达质粒 pcDNA3.1中 ,构建重组mIL 2 1真核表达质粒。重... 目的 :克隆小鼠白细胞介素 2 1(IL 2 1)基因 ,构建真核表达质粒 ,用以进行肿瘤的基因治疗。方法 :用RT PCR法 ,从ConA活化的小鼠T细胞中扩增IL 2 1cDNA ,克隆入哺乳动物细胞高效表达质粒 pcDNA3.1中 ,构建重组mIL 2 1真核表达质粒。重组体用载体上的通用引物和PCR下游引物为测序引物 ,鉴定克隆的正确性。将已鉴定的重组质粒用脂质体法转染Sp2 / 0细胞 ,用RT PCR法鉴定转染细胞中IL 2 1基因的表达 ,用MTT比色法检测表达的mIL 2 1诱导的NK细胞杀伤活性的增强。结果 :正确构建了重组真核表达质粒 pcD NA3.1/mIL 2 1,并在转染的细胞中检测出IL 2 1的表达 ,表达的mIL 2 1可在体外增强NK细胞的杀伤活性。结论 :成功地构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1/mIL 2 1,为进一步在肿瘤动物模型中进行IL 2 展开更多
关键词 白细胞介素21 RT-PCR 重组质粒
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海洋放线菌ACMA006抗肿瘤活性成分的分离纯化及结构鉴定 被引量：4
4
作者 曹雪 杨瑞丽 +2 位作者 袁献温 奚涛 杨臻峥 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期400-404,共5页
对从中国江苏连云港海域中筛选出的海洋放线菌ACMA006的发酵产物进行了分离纯化,获得2种抗肿瘤活性化合物,并进一步鉴定其结构.海洋放线菌ACMA006经大规模发酵后,发酵液采用溶剂萃取法提取其中的抗肿瘤活性成分,并利用硅胶柱层析、制备... 对从中国江苏连云港海域中筛选出的海洋放线菌ACMA006的发酵产物进行了分离纯化,获得2种抗肿瘤活性化合物,并进一步鉴定其结构.海洋放线菌ACMA006经大规模发酵后,发酵液采用溶剂萃取法提取其中的抗肿瘤活性成分,并利用硅胶柱层析、制备薄层及HPLC等方法对萃取物进行分离得到单体化合物.利用红外光谱、质谱、核磁共振1H-HMR谱和13C-NMR谱等波谱数据对单体化合物的结构进行解析和鉴定.结果表明化合物B为放线菌素D,其分子式为C62H86N12O16,含有2个多肽酯环,由L-苏氨酸、D-缬氨酸、L-脯氨酸、N-甲基甘氨酸和L-N-甲基缬氨酸组成,通过羧基与发色母核吩噁嗪酮相连接.化合物A可能为放线菌素D的衍生物.这是国内外首次从海洋放线菌中分离提取出放线菌素D. 展开更多
关键词 海洋生物学 放线菌 抗肿瘤活性 放线菌素D 分离纯化 结构鉴定
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mIL-21基因转染的Sp2/0瘤苗细胞的抗肿瘤机制探讨 被引量：5
5
作者 褚莉莉 窦骏 +4 位作者 赵枫姝 唐权 张爱凤 王永仿 顾宁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-510,共4页
目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿... 目的:探讨小鼠IL-21瘤苗-Sp2/0-mIL-21抗肿瘤效应的机制。方法:用流式细胞术检测Sp2/0-mIL-2瘤苗细胞表面MHC-Ⅰ类分子及CD80分子的表达。以瘤苗细胞接种BALB/c小鼠,以CFSE,7-AAD标记,用流式细胞术检测NK细胞、CTL的细胞毒活性。观察肿瘤组织中淋巴细胞的浸润。用RT-PCR检测肿瘤组织中CXC家族趋化因子I-TAC的表达。结果:与对照组相比,瘤苗细胞膜表面MHC-Ⅰ类分子的表达明显上调。瘤苗接种组小鼠NK细胞、CTL的细胞毒活性明显增强。病理分析发现,肿瘤组织中有较多的淋巴细胞浸润并检测到干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC)的表达上调。结论:肿瘤细胞瘤苗Sp2/0-mIL21可增强小鼠的细胞免疫作用,其抗肿瘤机制可能与T细胞的增殖、活化,促进NK细胞的分化成熟,淋巴细胞向肿瘤组织浸润,以及增强NK细胞和CTL的细胞毒活性有关。 展开更多
关键词 白细胞介素-21 瘤苗 羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE) 7-氨基放线菌素D(7-AAD) 干扰素诱导的T细胞α趋化因子(I-TAC) 抗肿瘤机制
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戊型肝炎病毒第4基因型中国株ORF2编码蛋白的抗原表位分析 被引量：4
6
作者 张红梅 戴星 +2 位作者 孟继鸿 赵宇 单祥年 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期637-642,共6页
以戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体（McAbs）,同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白,与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起,通过ELISA、免疫印迹（Western blot）以及竞争抑制实验对主... 以戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体（McAbs）,同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白,与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起,通过ELISA、免疫印迹（Western blot）以及竞争抑制实验对主要存在于我国的HEV第4基因型毒株进行抗原表位分析。结果发现所制备的McAbs与p166Chn截短蛋白的免疫反应有两种类型,以1G10为代表的McAbs能与N端不短于aa477、C端不短于aa613的截短蛋白反应,其针对的抗原表位是构象依赖型表位,依赖于aa477-aa613肽链区段;而McAb2F11则能与N端不短于aa474、C端不短于aa617的截短蛋白反应,其针对的抗原表位也是构象表位,但需依赖于较长的肽链区段（aa474-aa617）。竞争抑制实验显示两类McAbs互不抑制,进一步证实了所发现的两个抗原表位在空间位置上的不同。更有意义的是,两类McAbs均能与其他不同HEV基因型和亚型来源的p166重组蛋白发生阳性反应,表明这两个抗原表位是HEV基因型共同性的,可以在世界各国分布的不同基因型HEV毒株中诱导交叉免疫。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 单克隆抗体 基因型 表位
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一株海洋放线菌发酵液抗肿瘤活性初探 被引量：7
7
作者 杨瑞丽 袁献温 +2 位作者 郑杰 王淑军 李丹 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期351-355,共5页
用四氮唑蓝(MTT)法对96株海洋放线菌、细菌、真菌的发酵液进行细胞毒活性的筛选,结果显示13%的放线菌和3%的细菌发酵液具有细胞毒活性.其中放线菌ACMA006具有显著细胞毒活性,而且能抑制多种肿瘤细胞的生长.进一步用DNAladder电泳分析和... 用四氮唑蓝(MTT)法对96株海洋放线菌、细菌、真菌的发酵液进行细胞毒活性的筛选,结果显示13%的放线菌和3%的细菌发酵液具有细胞毒活性.其中放线菌ACMA006具有显著细胞毒活性,而且能抑制多种肿瘤细胞的生长.进一步用DNAladder电泳分析和荧光染色法观察到放线菌ACMA006发酵液能明显诱导肿瘤细胞凋亡.这株具有抗肿瘤潜力的放线菌ACMA006值得进一步开发研究. 展开更多
关键词 海洋放线菌 抗肿瘤活性
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PKH26标记UMSC示踪技术在细胞移植治疗卵巢癌中的应用 被引量：2
8
作者 胡卫华 王净 +4 位作者 窦骏 何向峰 赵枫殊 邹丹丹 李晓丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期828-831,共4页
目的:探讨PKH26荧光染料作为脐血间充质干细胞(UMSC)示踪剂在移植治疗卵巢癌中应用的可行性。方法:从脐血单个核细胞(MNC)中培养获得传至第3代贴壁细胞,流式细胞仪(FCM)检测其表面分子表达,茜素红及油红O染色观察其向成骨、成脂细胞诱... 目的:探讨PKH26荧光染料作为脐血间充质干细胞(UMSC)示踪剂在移植治疗卵巢癌中应用的可行性。方法:从脐血单个核细胞(MNC)中培养获得传至第3代贴壁细胞,流式细胞仪(FCM)检测其表面分子表达,茜素红及油红O染色观察其向成骨、成脂细胞诱导分化状况。用PKH26标记经鉴定的UMSC,荧光显微镜观察其标记率,再用标记的2×106个UM-SC经尾静脉移植给荷卵巢癌裸鼠,14天后观察标记细胞的迁移和转归。结果:从脐血MNC培养获得传至第3代贴壁细胞,其低表达CD34和CD133而高表达CD44、CD29及CD90特征性分子,并能诱导分化为成骨、成脂细胞。经鉴定表明:从脐血MNC中可培养出UMSC。PKH26标记的UMSC呈长梭形或纺锤形,标记阳性率达98.63%。标记的UMSC在裸鼠经14天迁移后,在裸鼠脾脏及肿瘤组织中均可见发出红色荧光的标记细胞。结论:PKH26标记的UMSC可作为体内示踪细胞移植治疗卵巢癌的有效方法。 展开更多
关键词 PKH26 脐血间充质干细胞 卵巢癌 细胞移植
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联合输注Flt3-L和GM-CSF表达质粒体内诱导小鼠DC的研究 被引量：3
9
作者 苏舒 薛萌 +1 位作者 曹萌 王立新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期515-517,521,共4页
目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表... 目的:探讨联合输注Flt3-L和GM-CSF真核表达质粒体内诱导小鼠DC的方法并检测其抗原提呈功能。方法:采用尾静脉注射法分别输注Flt3-L及GM-CSF质粒,15d后收获小鼠脾脏;采用流式细胞术检测小鼠脾细胞CD11c、CD11b、B220、CD8α和NK1.1等表面标志以鉴定DC的比例及亚型;将体内诱导DC与HBsAg共孵育,然后刺激HBsAg预免疫小鼠的脾细胞并检测其分泌IFN-的水平。结果:联合输注Flt3-L和GM-CSF质粒小鼠的脾细胞达到4×108个细胞/脾脏、其中CD11c+细胞占20%以上,CD11c+细胞中CD11b+、CD11b-、B220+、CD8+、NK1.1+细胞的比例分别达17%、10%、26%、16%、7%左右;体内诱导DC负载HB-sAg后刺激HBsAg特异性淋巴细胞分泌IFN-γ的水平明显高于HBsAg单独刺激组。结论:采用小鼠尾静脉注射技术输注Flt3-L及GM-CSF质粒能够诱导CD11c+ DC的产生并包含多种亚型,体内诱导DC具备有效的抗原提呈功能。 展开更多
关键词 Flt3-L GM-CSF 真核表达质粒 树突状细胞 体内诱导 小鼠
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