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牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化被引量：2: 1; 作者高学军刘丽杰 +3 位作者李冬李姗姗陈东莹于萌萌《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1-7,共7页; m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节... 展开更多; 关键词牛 METTL3 原核表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛eIF5基因原核表达与蛋白纯化被引量：2: 2; 作者高学军臧艳丽 +1 位作者魏诚杰骆超超《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期68-73,共6页; 研究应用PCR方法扩增牛e IF5基因编码序列,通过Eco RⅠ和SalⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-e IF5,并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定正确后,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达... 展开更多; 关键词牛 eIF5 克隆原核表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1: 3; 作者高学军李姗姗 +1 位作者于萌萌李冬《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期33-38,共6页; NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原... 展开更多; 关键词奶牛 NF-κB1 克隆原核表达纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

基于FemAB基因特异引物的动物双歧杆菌PCR检测方法的建立: 4; 作者温学鹏祁昊 +2 位作者郭思圻王哲高学军《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期41-44,54,共5页; 分离和鉴定了两株双歧杆菌,通过16SrDNA通用引物扩增条带测序和非特异引物随机扩增法扩增条带测序推测其为动物双歧杆菌。随后使用以编码肽聚糖肽桥形成蛋白(Peptidoglycan bridge formation protein)FemAB基因为目的扩增片段设计的特... 展开更多; 关键词 FemAB基因双歧杆菌属动物双歧杆菌 PCR; 在线阅读下载PDF 职称材料

NFκB1在奶牛乳腺上皮细胞中的表达与定位被引量：1: 5; 作者臧艳丽古新宇 +3 位作者黄鑫于翠平骆超超高学军《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期2112-2119,共8页; 试验旨在研究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中NFκB1的表达与定位变化,以阐明NFκB1对BMEC乳合成的转录调节机理。通过组织块法培养原代细胞,利用BMEC和成纤维细胞对胰蛋白酶敏感性的不同进行纯化和传代;利用W... 展开更多; 关键词 NFκB1 p-NFκB1 奶牛乳腺上皮细胞蛋氨酸乳合成; 在线阅读下载PDF 职称材料

SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用被引量：2: 6; 作者祁昊孟春雨 +1 位作者高学军甄贞《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2516-2525,共10页; 钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2)是一种氨基酸转运蛋白,可转运中性氨基酸,广泛分布于多种细胞中。氨基酸既可作为蛋白质合成的底物,也是调节细胞新陈代谢的关键信号分子,但SNAT2是否介导氨基酸调节BMECs增殖和自噬尚未见报道。本... 展开更多; 关键词钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2) 牛乳腺上皮细胞(BMECs) MTOR 增殖自噬; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化被引量：2: 1; 作者高学军刘丽杰李冬李姗姗陈东莹于萌萌; 机构东北农业大学; 出处《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1-7,共7页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102504-03); 文摘 m^6A甲基转移酶(methyltransferase-like protein 3,METTL3)可调控m RNA的m6A甲基化水平,调节细胞蛋白质合成,实验室前期发现METTL3为乳腺上皮细胞乳合成重要调节分子,发挥泌乳调节作用。目前尚不清楚METTL3分子结构基础及其参与的调节机制。为揭示METTL3结构与功能关系,对METTL3蛋白作原核表达及纯化。研究采用PCR方法扩增牛mettl3基因完整CDS区,将CDS区插入原核表达载体p GEX-4T-1,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导METTL3蛋白大量表达,用8 mol·L-1尿素裂解包涵体,利用GST蛋白纯化试剂盒纯化诱导获得METTL3蛋白。SDS-PAGE证实GST-METTL3融合蛋白存在于包涵体内,试验获得高纯度GST-METTL3融合蛋白,为进一步研究METTL3蛋白在奶牛泌乳中作用提供重要依据。; 关键词牛 METTL3 原核表达纯化; Keywords dairy cow METTL3 prokaryotic expression purification; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛eIF5基因原核表达与蛋白纯化被引量：2: 2; 作者高学军臧艳丽魏诚杰骆超超; 机构东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室; 出处《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期68-73,共6页; 基金国家高技术研究发展计划(863)项目(2013AA102504-03); 文摘研究应用PCR方法扩增牛e IF5基因编码序列,通过Eco RⅠ和SalⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-e IF5,并转化大肠埃希菌BL21。酶切和测序鉴定正确后,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-e IF5构建成功,Western Blot证实融合蛋白大量表达,纯化后获得GSTe IF5融合蛋白,为深入研究牛e IF5蛋白功能奠定基础。; 关键词牛 eIF5 克隆原核表达纯化; Keywords bovine elF5 cloning prokaryotic expression purification; 分类号 S823 [农业科学—畜牧学] Q785 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化被引量：1: 3; 作者高学军李姗姗于萌萌李冬; 机构东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室; 出处《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期33-38,共6页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102504-03); 文摘 NF-κB1是一类重要核转录因子,参与多种基因表达调控。NF-κB1能与奶牛乳腺中乳合成调控相关基因结合,发挥泌乳调节作用。研究应用PCR方法扩增奶牛NF-κB1基因编码序列,通过Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点将其定向插入p GEX-4T-1载体中,构建原核表达重组质粒p GEX-4T-1-NF-κB1,转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)。经酶切和测序鉴定正确后,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)大量诱导表达,8 mol·L^(-1)尿素裂解包涵体,裂解后上清经GST-Sepharose 4B亲和纯化,SDS-PAGE和Western blotting鉴定。结果表明,原核表达载体p GEX-4T-1-NF-κB1构建成功,SDS-PAGE证实NF-κB1融合蛋白存在于包涵体内,纯化后得到GST-NF-κB1融合蛋白,为进一步研究NF-κB1蛋白在奶牛泌乳中作用提供试验依据。; 关键词奶牛 NF-κB1 克隆原核表达纯化; Keywords bovine NF-κB1 cloning prokaryotic expression purification; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于FemAB基因特异引物的动物双歧杆菌PCR检测方法的建立: 4; 作者温学鹏祁昊郭思圻王哲高学军; 机构东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室; 出处《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期41-44,54,共5页; 基金黑龙江省应用技术研究与开发计划重大项目(GA15B203) 东北农业大学大学生创新创业训练项目(SIPT项目 201610224153); 文摘分离和鉴定了两株双歧杆菌,通过16SrDNA通用引物扩增条带测序和非特异引物随机扩增法扩增条带测序推测其为动物双歧杆菌。随后使用以编码肽聚糖肽桥形成蛋白(Peptidoglycan bridge formation protein)FemAB基因为目的扩增片段设计的特异引物进行了扩增鉴定。结果表明,此特异引物对这两株动物双歧杆菌菌株扩增结果为阳性,其他对照菌株扩增结果为阴性,且扩增条带测序结果与预计一致。FemAB基因在PCR特异扩增法鉴定细菌种属中具有较好的分辨能力,并使用其建立了动物双歧杆菌PCR检测方法。本研究旨为应用FamAB基因鉴定细菌种属以及双歧杆菌属微生物的鉴定提供了数据参考。; 关键词 FemAB基因双歧杆菌属动物双歧杆菌 PCR; Keywords FemAB gene Bifidobacterium Bifidobacterium animal PCR; 分类号 TS252.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名NFκB1在奶牛乳腺上皮细胞中的表达与定位被引量：1: 5; 作者臧艳丽古新宇黄鑫于翠平骆超超高学军; 机构东北农业大学; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期2112-2119,共8页; 基金国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2013AA102504-03); 文摘试验旨在研究奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cell,BMEC)中NFκB1的表达与定位变化,以阐明NFκB1对BMEC乳合成的转录调节机理。通过组织块法培养原代细胞,利用BMEC和成纤维细胞对胰蛋白酶敏感性的不同进行纯化和传代;利用Western blotting和免疫荧光染色法检测细胞中角蛋白18和β-酪蛋白的表达以鉴定细胞的纯度和泌乳功能;通过添加0.6mmol/L蛋氨酸建立氨基酸刺激BMEC泌乳的体外模型;Western blotting和免疫荧光法检测添加蛋氨酸后NFκB1和p-NFκB1表达与定位的变化。结果显示,获得了纯化的BMEC;Western blotting检测发现NFκB1在细胞浆中存在约141和105ku两种形式,在细胞核中只存在105ku形式;p-NFκB1(50ku)主要存在于细胞核内。在添加蛋氨酸后NFκB1的141ku形式的含量有一定增加;105ku形式在细胞浆内蛋白水平变化不明显,在细胞核内水平明显升高;p-NFκB1在细胞核中的定位明显增加。结果提示,NFκB1参与BMEC乳合成的转录调节,氨基酸通过促进细胞核内NFκB1磷酸化以调节泌乳相关基因的转录和促进乳合成。; 关键词 NFκB1 p-NFκB1 奶牛乳腺上皮细胞蛋氨酸乳合成; Keywords NFκB1 p-NFκB1 BMEC methionine lactogenesis; 分类号 S814.8 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用被引量：2: 6; 作者祁昊孟春雨高学军甄贞; 机构东北农业大学黑龙江省高校农业生物功能基因重点实验室; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期2516-2525,共10页; 基金国家自然科学基金项目(31671473); 文摘钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2)是一种氨基酸转运蛋白,可转运中性氨基酸,广泛分布于多种细胞中。氨基酸既可作为蛋白质合成的底物,也是调节细胞新陈代谢的关键信号分子,但SNAT2是否介导氨基酸调节BMECs增殖和自噬尚未见报道。本研究利用CASY细胞计数和Western blotting技术检测SNAT2过表达和siRNA干扰后牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖情况以及SNAT2对自噬标志蛋白LC3-Ⅰ/Ⅱ表达量的影响,并利用免疫荧光检测细胞自噬斑点(LC3-Ⅱ)变化。结果显示,SNAT2过表达时,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量增加,反之,p-PI3K、p-mTOR和Cyclin D1表达量下降。SNAT2抑制时,LC3-Ⅱ表达量增加,免疫荧光检测自噬斑点增多。添加自噬增强剂海藻糖(trehalose,Tre)和蛋氨酸(methionine,Met)后,与单一添加Tre组相比,Met+Tre组p-mTOR表达量增加,LC3-Ⅱ表达量降低,胞浆内绿色自噬斑点减少;添加Tre和Met并抑制SNAT2时,p-mTOR表达量下降,LC3-Ⅱ表达量增多,胞浆内绿色自噬斑点增加。以上结果表明,SNAT2可介导Met通过调控PI3K-mTOR/Cyclin D1信号通路调节BMECs的增殖与自噬。; 关键词钠离子依赖性中性氨基酸转运体2(SNAT2) 牛乳腺上皮细胞(BMECs) MTOR 增殖自噬; Keywords SNAT2 BMECs mTOR proliferation autophagy; 分类号 Q291 [生物学—细胞生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	牛mettl3基因的原核表达与蛋白纯化	高学军刘丽杰李冬李姗姗陈东莹于萌萌	《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	牛eIF5基因原核表达与蛋白纯化	高学军臧艳丽魏诚杰骆超超	《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	牛NF-κB1基因的原核表达与蛋白纯化	高学军李姗姗于萌萌李冬	《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	基于FemAB基因特异引物的动物双歧杆菌PCR检测方法的建立	温学鹏祁昊郭思圻王哲高学军	《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	NFκB1在奶牛乳腺上皮细胞中的表达与定位	臧艳丽古新宇黄鑫于翠平骆超超高学军	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料
6	SNAT2介导蛋氨酸对牛乳腺上皮细胞增殖与自噬的调节作用	祁昊孟春雨高学军甄贞	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料