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抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析
被引量：
2
1
作者
苗平
钱柳
+5 位作者
赵蓉
余奇文
张继英
陈雪华
陆梅生
张冬青
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1119-1122,1128,共5页
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp...
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。
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关键词
IL-6
GP130
单克隆抗体
特异性
亲和力
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职称材料
类风湿性关节炎与自身反应性B细胞
被引量：
8
2
作者
钱柳
陆梅生
张冬青
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1133-1140,共8页
关键词
类风湿性关节炎
自身反应性B细胞
自身抗体谱
IL-13
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职称材料
全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
5
3
作者
张夏玲
孙见宇
+7 位作者
殷珏
李明
周亦凭
刘云成
李万波
朱进
冯振卿
Mason Lu
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期739-744,共6页
目的:利用人源IgM转基因小鼠制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对其进行初步鉴定。方法:以灭活的狂犬病病毒CTN株作为抗原免疫人IgM转基因小鼠。采用杂交瘤技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA)高通量交叉筛选技术(HTS)制备全人源抗狂犬...
目的:利用人源IgM转基因小鼠制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对其进行初步鉴定。方法:以灭活的狂犬病病毒CTN株作为抗原免疫人IgM转基因小鼠。采用杂交瘤技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA)高通量交叉筛选技术(HTS)制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。通过双抗体夹心ELISA鉴定单抗的人源性和抗体型,间接ELISA、斑点杂交(Dot Blot)实验及Western blot检测单抗的特异性,BiaCore X-100测定单抗结合抗原的亲和力。结果:建立了2株稳定分泌抗狂犬病病毒人源性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为9E3和9F2。双抗体夹心ELISA结果显示2株单抗均为人源性免疫球蛋白IgM型。间接ELISA、斑点杂交实验结果表明2株单抗均能特异性识别灭活的狂犬病病毒CTN株。Western blot结果显示2株单抗均能与狂犬病病毒糖蛋白特异性结合。2株单抗与狂犬病病毒CTN株抗原结合的亲和力分别为2.62×10-10mol/L、4.06×10-11mol/L。结论:筛选制备了2株特异性、高亲和力的全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。本研究为进一步筛选人源抗狂犬病病毒免疫预防性中和抗体及其免疫治疗的应用奠定了基础。
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关键词
人IgM转基因小鼠
狂犬病病毒
全人源单克隆抗体
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职称材料
题名
抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析
被引量：
2
1
作者
苗平
钱柳
赵蓉
余奇文
张继英
陈雪华
陆梅生
张冬青
机构
上海
交通大学医学院
上海
市免疫学研究所
上海
交通大学医学院附属瑞金医院
上海麦柏星生物科技有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第12期1119-1122,1128,共5页
基金
上海市免疫学研究所项目(08-A04)
上海市科委重点项目(10JC1408500)
上海市科委重点学科(外科学)开放课题(S30204-K01)等基金资助
文摘
目的:制备小鼠抗人IL-6Rβ(gp130)单克隆抗体,并分析其生物学特性及初步的免疫学功能。方法:用gp130抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫获得高效价的ELISA结果后,取小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经多次亚克隆筛选得到稳定分泌抗gp130单克隆抗体的杂交瘤细胞株。大量扩增杂交瘤细胞,收集细胞上清,随即过亲合层析柱进行纯化,对经纯化的抗人gp130单克隆抗体进行亚型鉴定,用Western blot及间接ELISA、biacore方法分析抗人gp130单克隆抗体的纯度、特异性及亲和力,用FACS术检测抗人gp130单克隆抗体与膜表面富含IL-6受体的U266细胞系的结合率,同时建立IL-6诱导的U266细胞增殖系统,用以检测和分析抗人gp130单克隆抗体的抑制和阻断效应。结果:本研究获得了多株能够稳定分泌抗人gp130单克隆抗体的细胞株,取其中一株(14C4)进行分析,表明其亚型属于IgG2b,轻链为κ链,经Western blot及间接ELISA证明此株抗体有较高的纯度及特异性,biacore结果显示14C4与抗原结合的亲和力为2.62E-10,FACS结果证实能与U266细胞表面的gp130特异性结合,并且呈剂量依赖性,细胞增殖实验说明14C4在一定程度上可抑制IL-6诱导的U266细胞的增殖。结论:初步成功制备了抗gp130单克隆抗体,并且具备较好的生物学特性,为研究人IL-6gp130在抗感染、炎症以及肿瘤和自身免疫病学中的诊断和治疗中的意义提供了有效的工具和手段。
关键词
IL-6
GP130
单克隆抗体
特异性
亲和力
Keywords
IL-6
gp130
Monoclonal antibody
Specificity
Affinity
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
类风湿性关节炎与自身反应性B细胞
被引量：
8
2
作者
钱柳
陆梅生
张冬青
机构
上海
交通大学医学院
上海
市免疫学研究所
上海麦柏星生物科技有限公司
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期1133-1140,共8页
基金
国家自然科学基金(No.30471593,No.30670939)
上海市科委重点项目(07JC14033)
上海市免疫学研究所项目(08-A04)资助
关键词
类风湿性关节炎
自身反应性B细胞
自身抗体谱
IL-13
Keywords
Rheumatoid arthritis
B lymphocytes
Autoantibodies
IL-13
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
5
3
作者
张夏玲
孙见宇
殷珏
李明
周亦凭
刘云成
李万波
朱进
冯振卿
Mason Lu
机构
南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室
上海麦柏星生物科技有限公司
福瑞邦
生物科技
有限公司
南京军区军事医学研究所
University of Texas MD Anderson Cancer Center
出处
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第6期739-744,共6页
基金
国家“863”计划资助(2007AA02Z418)
江苏省科技支撑计划资助(BE2011842)
上海市浦江人才计划资助(09PJ1431300)
文摘
目的:利用人源IgM转基因小鼠制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对其进行初步鉴定。方法:以灭活的狂犬病病毒CTN株作为抗原免疫人IgM转基因小鼠。采用杂交瘤技术结合酶联免疫吸附试验(ELISA)高通量交叉筛选技术(HTS)制备全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。通过双抗体夹心ELISA鉴定单抗的人源性和抗体型,间接ELISA、斑点杂交(Dot Blot)实验及Western blot检测单抗的特异性,BiaCore X-100测定单抗结合抗原的亲和力。结果:建立了2株稳定分泌抗狂犬病病毒人源性单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为9E3和9F2。双抗体夹心ELISA结果显示2株单抗均为人源性免疫球蛋白IgM型。间接ELISA、斑点杂交实验结果表明2株单抗均能特异性识别灭活的狂犬病病毒CTN株。Western blot结果显示2株单抗均能与狂犬病病毒糖蛋白特异性结合。2株单抗与狂犬病病毒CTN株抗原结合的亲和力分别为2.62×10-10mol/L、4.06×10-11mol/L。结论:筛选制备了2株特异性、高亲和力的全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体。本研究为进一步筛选人源抗狂犬病病毒免疫预防性中和抗体及其免疫治疗的应用奠定了基础。
关键词
人IgM转基因小鼠
狂犬病病毒
全人源单克隆抗体
Keywords
humanized IgM transgenic mice, rabies virus, human monoclonal antibody
分类号
R512.99 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗人gp130单克隆抗体的制备及其生物学特性分析
苗平
钱柳
赵蓉
余奇文
张继英
陈雪华
陆梅生
张冬青
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
类风湿性关节炎与自身反应性B细胞
钱柳
陆梅生
张冬青
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
全人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的制备与鉴定
张夏玲
孙见宇
殷珏
李明
周亦凭
刘云成
李万波
朱进
冯振卿
Mason Lu
《南京医科大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
5
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