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λ轻链抗原的克隆与表达
1
作者
韩焕兴
黄宗文
+4 位作者
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期528-530,共3页
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连...
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体.结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4 kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带;电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应.结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法.
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关键词
λ轻链纯化
抗体基因表达
免疫转印
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题名
λ轻链抗原的克隆与表达
1
作者
韩焕兴
黄宗文
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
机构
上海长征医院解放军临床免疫中心
上海长征医院
呼吸科
广州南方
医院
肿瘤科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第10期528-530,共3页
基金
国家自然科学基金
文摘
目的:应用分子生物学方法克隆、表达λ轻链基因,探索有效制备高纯度轻链抗原技术.方法:应用已有pComb3抗-HBsFab表达载体,用限制性双酶切去除Fab中的H链基因,合成互补于两酶点粘端的短核苷酸链,并加以多聚组氨酸编码基因,通过复性、连接酶连接构建λ轻链表达载体.结果:重构建载体的单酶切、电泳表明分子的大小为4.4 kb,已切除H链基因;阳性株经IPTG诱导表达上清的免疫转印结果显示为抗轻链血清反应带;电泳位置与轻链的分子量吻合,成单一区带;直接ELISA结果表明,正确连接的克隆表达上清与抗Polyhis血清发生反应.结论:用生物工程技术克隆表达λ轻链具有简便、实用的特点,更易获得高纯度产品,是可以替代常规轻链抗原提纯的理想方法.
关键词
λ轻链纯化
抗体基因表达
免疫转印
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
λ轻链抗原的克隆与表达
韩焕兴
黄宗文
郑大勇
罗荣城
叶伟民
陆慧琦
孔宪涛
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
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