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10个肺癌相关基因多重甲基化特异性PCR检测方法的建立
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作者 娄加陶 薛剑 +3 位作者 吴传勇 葛歆悦 吴京 姚见儿 《生物医学工程与临床》 CAS 2012年第1期77-83,共7页
目的建立10个肺癌相关基因的多重甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法并运用于临床标本的检测。方法选取19例肺癌患者病灶组织标本,患者中男性16例,女性3例;平均年龄57.3岁。1例肺部良性病变患者组织标本为男性,年龄52岁。通过质粒... 目的建立10个肺癌相关基因的多重甲基化特异性聚合酶链反应(PCR)检测方法并运用于临床标本的检测。方法选取19例肺癌患者病灶组织标本,患者中男性16例,女性3例;平均年龄57.3岁。1例肺部良性病变患者组织标本为男性,年龄52岁。通过质粒构建及甲基化转移酶和亚硫酸盐修饰制备10个基因的甲基化和非甲基化标准品。通过选择甲基化特异性引物来识别甲基化模板,挑选10对甲基化特异性引物并平均分成2组,经最佳聚合酶及最佳退火温度的选择,建立多重甲基化特异性PCR体系,并应用于19例肺癌组织的检测,计算10个基因的甲基化率。结果在成功构建10个基因的甲基化和非甲基化标准品的基础上,建立了它们的多重甲基化特异性PCR检测方法。临床标本检测结果显示10个肺癌相关基因的甲基化率分别为p16INK4A 92%,H-cadherin 89%,E-cadherin和DAPK 76%,TIMP-3 63%,RARβ50%,MGMT 39%,RASSF1A 21%,GSTP1 11%,hMLH1 0%。2次实验结果重复性较好。结论这种分2组多重甲基化特异性PCR的方法能一次性检测10个基因甲基化状态,可以应用于临床标本的检测。 展开更多
关键词 甲基化 肺癌 多重甲基化特异性PCR
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microRNAs的定量分析技术及其应用 被引量:5
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作者 王勤熙 姚见儿 顾国浩 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期650-652,共3页
本文评述了微小RNA(microRNAs,miRNAs)定量分析技术及其应用,重点介绍了miRNAs定量检测的各种方法、各自特点及其在检测过程中可能遇到的问题,为miRNAs的定量分析和研究提供参考。
关键词 微小RNA 定量分析 检测方法 生物标志物
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Luminex高通量检测技术的应用和挑战 被引量:11
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作者 姚见儿 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期250-251,共2页
关键词 LUMINEX 高通量 芯片
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流式荧光法检测多肿瘤标志物性能评估及临床应用 被引量:4
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作者 杨恩环 周宇琼 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期960-963,共4页
目的建立检测人血清多种肿瘤标志物的流式荧光法并评估方法学性能。方法将抗AFP、CEA、CA125、CA242、NSE、free-β-hCG、cyfra 21-1、F-PSA、T-PSA、CA15-3、SCC、CA72-4、CA19-9抗体包被于Luminex荧光编码微球,用流式荧光法检测血清... 目的建立检测人血清多种肿瘤标志物的流式荧光法并评估方法学性能。方法将抗AFP、CEA、CA125、CA242、NSE、free-β-hCG、cyfra 21-1、F-PSA、T-PSA、CA15-3、SCC、CA72-4、CA19-9抗体包被于Luminex荧光编码微球,用流式荧光法检测血清中上述标志物,并进行方法学与临床应用评价。结果与ELISA试剂盒相比,建立的流式荧光法线性范围较宽,灵敏度与电化学发光法较一致。各个指标的批内变异系数(CV)为(6.10±2.35)%,批间CV为(6.61±2.41)%;平均回收率均>90%。干扰实验结果表明,200 mg/mL三酰甘油、10 mg/mL胆红素和10 mg/mL血红蛋白对各指标检测均无显著影响且不受类风湿因子(RF)、异嗜性抗体、人抗动物抗体(HAAAs)及补体等干扰;有效指示AFP高浓度样本、避免hook效应导致的假阴性;临床实验结果表明,该法与电化学发光、ELISA法相关性良好。结论流式荧光法可实现多肿瘤标志物并行测试,方法学性能良好,可以提高检测效率。 展开更多
关键词 流式荧光法 肿瘤标志物 方法学性能评价
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