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小鼠调节性树突状细胞分泌的外泌体诱导免疫耐受的实验研究 被引量：9
1
作者 刘袁媛 范华骅 +4 位作者 任亚娜 杨洁 聂晓绚 赵丽华 林俊杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期406-410,共5页
本研究探讨小鼠调节性树突状细胞(rDC)分泌的外泌体(regulatory exosomes,rDex)诱导免疫耐受的作用,并与正常未成熟树突状细胞的外泌体(immature exosomes,iDex)诱导免疫耐受的作用进行比较。取C57BL/6(H-2b)小鼠骨髓细胞诱导未成熟树... 本研究探讨小鼠调节性树突状细胞(rDC)分泌的外泌体(regulatory exosomes,rDex)诱导免疫耐受的作用,并与正常未成熟树突状细胞的外泌体(immature exosomes,iDex)诱导免疫耐受的作用进行比较。取C57BL/6(H-2b)小鼠骨髓细胞诱导未成熟树突状细胞(iDC),TGF-β1联合IL-10诱导调节性树突状细胞(rDC),流式细胞术检测两种DC的表型。采用超速离心结合膜超滤的方法分别提取rDex和iDex。建立小鼠皮肤移植模型,以C57BL/6小鼠为供者,以BALB/c(H-2d)小鼠为受者,按对受者处理的不同实验分3组,iDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的iDex,rDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的rDex,另设PBS对照组,观察移植皮肤存活情况。通过单向混合淋巴细胞反应(MLR)观察供者及非亲缘异基因供者DBA/2对同种异基因小鼠T细胞增殖情况。结果表明:TGF-β1、IL-10可下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达。移植皮片平均存活时间(MST),在对照组为7.8天,iDex组为10.7天,rDex组为18.8天;iDex组的移植皮片MST明显长于对照组(p(0.05);rDex组的移植皮片MST明显长于iDex组(p(0.01)。MLR结果证明iDex组和rDex组B/C小鼠均对C57小鼠的脾细胞产生特异性耐受,尤其是rDex组;对非亲缘异基因DBA供者的脾细胞两组仍表现出强烈的免疫应答。结论:iDex和rDex均有诱导免疫耐受的作用,且rDex作用较iDex作用好。 展开更多
关键词 调节性树突状细胞 外泌体 免疫耐受 皮肤移植
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外周血内皮祖细胞体外培养分化研究 被引量：4
2
作者 顾俊 王长谦 +4 位作者 范华骅 聂晓绚 何奔 王彬尧 黄定九 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期233-236,共4页
目的从人外周血中分离、培养和鉴定内皮祖细胞(EPCs),并观察其在体外增殖分化过程中各种细胞表型的变化。方法采用密度梯度离心方法获得外周血单个核细胞,体外进行诱导、分化和扩增,于培养第7天选择免疫荧光(DiI-acLDL/FITC-UEA-Ⅰ)鉴定... 目的从人外周血中分离、培养和鉴定内皮祖细胞(EPCs),并观察其在体外增殖分化过程中各种细胞表型的变化。方法采用密度梯度离心方法获得外周血单个核细胞,体外进行诱导、分化和扩增,于培养第7天选择免疫荧光(DiI-acLDL/FITC-UEA-Ⅰ)鉴定EPCs,并且用流式细胞仪和RT-PCR方法观察上述细胞在第0、4、10和21天的CD34、CD31、KDR和eNOS的表达变化。结果外周血单个核细胞在培养过程中出现梭形贴壁和铺路石样等形态;第7天免疫荧光染色表明,约70%的细胞呈双荧光阳性;流式细胞仪分析显示,CD31和KDR表达在体外培养过程中逐渐升高,至第21天分别达到(72.1±11.2)%和(81.0±12.5)%,而CD34在第10天达到高峰(38.0±13.4)%后,第21天下降为(28.3%±12.2)%;RT-PCR结果表明,第4、10和21天eNOS的表达逐渐增强。结论本试验成功从外周血单个核细胞中分离培养出EPCs,在其体外扩增分化为成熟内皮细胞的过程中,CD31、KDR和eNOS等内皮细胞标志表达逐渐增强,而CD34的表达在内皮祖细胞的成熟分化过程中略有下降。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 内皮细胞 血管新生 外周血 体外培养分化
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雷帕霉素联合人脐带血CD4^+ CD25^+调节性T细胞治疗胶原诱导性关节炎小鼠的初步研究 被引量：3
3
作者 杨燕 杨懿铭 +4 位作者 李振华 杨洁 任亚娜 谢如峰 范华骅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期67-72,共6页
目的:初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合人脐带血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用。方法:通过体外扩增培养获得人脐带血Tregs;建立牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型;将CIA小鼠随机分为对照组,Tregs... 目的:初步探讨雷帕霉素(Rapa)联合人脐带血CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)对胶原诱导性关节炎小鼠的治疗作用。方法:通过体外扩增培养获得人脐带血Tregs;建立牛Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)小鼠模型;将CIA小鼠随机分为对照组,Tregs治疗组,Rapa治疗组,Tregs与Rapa联合治疗组;小鼠骨关节切片进行Safranin O-fast green染色、甲苯胺蓝染色以及HE染色;ELISA法检测CIA小鼠血浆抗Ⅱ型胶原抗体浓度;流式细胞术检测CIA小鼠脾脏CD4+T细胞亚型;检测Tregs在体外对CIA小鼠Ⅱ型胶原特异性CD4+T细胞增殖的抑制功能;Transwell分隔培养法比较非接触培养与直接接触培养中Tregs对CD4+T细胞增殖抑制作用的差异。结果:Tregs与Rapa联合治疗能够延缓疾病发生,显著降低关节炎评分,减少CIA小鼠关节中软骨的破坏以及炎症细胞浸润,降低CIA小鼠血浆中抗胶原总IgG抗体水平以及脾脏中Th17细胞比例;Tregs在体外能够有效抑制CIA小鼠胶原特异性CD4+T细胞的增殖,这种抑制作用主要可能是通过直接接触抑制途径起作用。结论:雷帕霉素联合人脐带血Tregs治疗能够改善CIA小鼠关节炎症状。 展开更多
关键词 人 脐带血 雷帕霉素 CD4+CD25+调节性T细胞 胶原诱导性关节炎
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脐血CD34^+细胞向内皮细胞定向诱导分化的实验研究 被引量：1
4
作者 邵琴 王长谦 +5 位作者 范华骅 何奔 刘嬿 聂晓绚 姜萌 高跞 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期229-232,共4页
目的探讨人脐血CD34+细胞体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型。方法采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34+单个核细胞,M-199培养基中诱导分化... 目的探讨人脐血CD34+细胞体外分离、纯化、诱导扩增和分化为内皮细胞的可行性,并检测其表型。方法采集新鲜脐血经抗凝处理及无菌包装,Ficoll密度梯度离心法得单个核细胞,磁珠分选方法(MACS)分离出CD34+单个核细胞,M-199培养基中诱导分化,细胞形态学观察CD34+和CD34-细胞生长情况,流式细胞仪检测内皮细胞CD31表型,免疫组化验证蛋白水平表达。结果细胞形态学观察发现,刚分离的CD34+和CD34-单个核细胞呈圆形,形态小。CD34+细胞培养3d后有明显集落形成,7d后呈梭行细胞,出现典型线样排列结构。经诱导培养后,内皮细胞表型CD31阳性率为(70.03±10.27)%。免疫组化染色证实了内皮特异性成分ecNOS和flk-1/KDR蛋白水平的表达。而CD34-细胞单独培养,少部分细胞贴壁,呈现出不规则形态。结论MACS法分离脐血CD34+细胞,体外诱导扩增和分化后贴壁细胞具有内皮细胞形态,通过流式细胞仪和免疫组化验证了贴壁细胞中大部分细胞具有内皮系标志物表达。 展开更多
关键词 脐血 CD34^+单个核细胞 诱导分化 内皮细胞
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血小板黏附受体GPIb-IX-V介导的信号通路研究进展 被引量：2
5
作者 胡萍 谢如锋 王志成 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第3期419-422,F0003,共5页
血小板在生理性止血和病理性血栓形成中起关键作用。血小板黏附受体GPIb-IX-V复合物能与血管性血友病因子(VWF)、P-选择素、凝血酶等结合,在血小板血栓形成的起始阶段和凝血过程中起重要作用。磷脂酶C(PLC)、磷脂酶A2(PLA2)、14-3-3ζ... 血小板在生理性止血和病理性血栓形成中起关键作用。血小板黏附受体GPIb-IX-V复合物能与血管性血友病因子(VWF)、P-选择素、凝血酶等结合,在血小板血栓形成的起始阶段和凝血过程中起重要作用。磷脂酶C(PLC)、磷脂酶A2(PLA2)、14-3-3ζ蛋白、细胞骨架等参与GPIb-IX-V介导的信号通路,现就GPIb-IX-V复合物介导的信号通路作一综述。 展开更多
关键词 血小板 糖蛋白 信号通路 血栓 止血
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抗霉素A诱导血小板凋亡的分子机制研究 被引量：1
6
作者 胡萍 朱永明 +1 位作者 谢如锋 王志成 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第11期1588-1593,共6页
目的探讨抗霉素A(AMA)诱导血小板凋亡及其分子机制。方法取健康志愿者单采血小板,离心洗涤得到洗涤血小板,将洗涤血小板与不同浓度的AMA孵育后,流式细胞术检测线粒体跨膜电位(ΔΨm)去极化、磷脂酰丝氨酸(PS)暴露、细胞内活性氧(ROS)、... 目的探讨抗霉素A(AMA)诱导血小板凋亡及其分子机制。方法取健康志愿者单采血小板,离心洗涤得到洗涤血小板,将洗涤血小板与不同浓度的AMA孵育后,流式细胞术检测线粒体跨膜电位(ΔΨm)去极化、磷脂酰丝氨酸(PS)暴露、细胞内活性氧(ROS)、线粒体ROS、P-选择素表达和整合素αⅡbβ3活化;Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的活化。在抑制试验中,先将洗涤血小板与线粒体靶向的ROS拮抗剂Mito-TEMPO预孵育,然后再与AMA孵育,流式细胞术检测相关凋亡指标。结果AMA剂量依赖性诱导血小板ΔΨm去极化、PS暴露、细胞内ROS和线粒体ROS升高以及Caspase-3活化;但是AMA不能诱导血小板活化。线粒体靶向的ROS拮抗剂抑制AMA诱导的血小板ΔΨm去极化、PS暴露、Caspase-3活化以及线粒体ROS的生成。结论 AMA能够诱导血小板发生凋亡,线粒体ROS可能在AMA诱导的血小板凋亡过程中起重要作用。 展开更多
关键词 血小板 凋亡 抗霉素A 线粒体 活性氧
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六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响 被引量：3
7
作者 王钦红 谢毅 +2 位作者 范华骅 高砾 刘燕 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期480-484,共5页
六亚甲基二乙酰胺 (hexamethylenebisacetamide ,HMBA)是一种极性诱导分化剂 ,已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征 (MDS) ,但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL 60白血病细胞细胞周期及... 六亚甲基二乙酰胺 (hexamethylenebisacetamide ,HMBA)是一种极性诱导分化剂 ,已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征 (MDS) ,但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL 60白血病细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响 ,以探讨其药理机制。用流式细胞术检测HMBA对HL 60细胞细胞周期分布和细胞周期蛋白D、E及p2 7表达的影响 ,用RT PCR研究HMBA对细胞周期负性调控分子CKIp15,p16,p2 7基因mRNA表达的影响。结果表明 ,HMBA主要使HL 60细胞阻滞于G0 /G1期 ,经HMBA处理后HL 60细胞胞浆内细胞周期蛋白E蛋白表达显著降低 ,而细胞周期蛋白D和p2 7蛋白表达则显著增高 ;未经HMBA处理的HL 60细胞 p15,p16mRNA均无表达 ;3mmol/LHMBA处理 2 4小时后 p15mRNA出现弱阳性条带 ,48小时和 72小时后出现强阳性条带 ,p16mRNA则在 48小时后出现弱阳性条带 ,72小时后出现强阳性条带 ;p2 7mRNA在未经处理和处理后 2 4,48和 72小时后均出现强阳性条带 ,阳性程度无明显差异。结论 :HMBA的药理机制之一可能是通过下调细胞周期蛋白E ,上调p2 7蛋白的表达 ,同时使得 p15,p16基因mRNA重获表达 ,阻滞HL 60细胞周期于G1期 。 展开更多
关键词 六亚甲基乙酰胺 HL—60细胞 细胞周期 细胞周期调节蛋白 细胞周期蛋白
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六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60细胞分化的机制 被引量：3
8
作者 王钦红 范华骅 +4 位作者 陈勤奋 高跞 刘燕 谢彦辉 谢毅 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期1-4,共4页
目的 探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法 HL-60细胞与HMBA体外培养3d;运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原;半定量RT-PCR分析c-... 目的 探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法 HL-60细胞与HMBA体外培养3d;运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原;半定量RT-PCR分析c-myc、Rb基因mRNA的表达。结果 HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高;胞内抗原Cyclin E表达显著下降,Cyclin D、p27表达显著增高,并呈剂量依赖关系;RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调,Rb mRNA表达显著增高。结论 HMBA能体外诱导HL-60细胞分化,其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27;同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb MRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期,抑制细胞增殖,诱导细胞分化。 展开更多
关键词 六亚甲基二乙酰胺 体外 HL-60细胞株 细胞分化 急性早幼粒细胞白血病
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脐血与外周血NKT细胞的体外扩增及其表型比较 被引量：2
9
作者 刘嬿 范华骅 +5 位作者 阮鸣 高跞 聂晓绚 杨懿铭 陆华中 高峰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期128-132,共5页
为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用... 为了建立体外有效扩增脐血与外周血天然杀伤T细胞(NKT细胞)的方法并研究其表型的差异,分别采用单加IL-2及同时加IL-2和α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)的方法,从人脐血单个核细胞(UCB-MNC)和人外周血单个核细胞(PB-MNC)中扩增NKT细胞;用流式细胞检测技术测定NKT细胞(TCR Vα24+TCR Vβ11+)的比例及其它表型特征。结果显示:UCB-MNC在第7天时,其TCR Vαβ+NKT细胞的扩增量占淋巴细胞的(24.48±4·19)%,是原来的(8.74±4.37)×102倍(P<0.01),而且大多不表达NK1.1(CD161);TCR Vβ11+较TCRVα24+高表达;第14天时,PB-MNC中的TCR Vαβ+NKT细胞扩增量占淋巴细胞的(11.1±3.61)%,是原来的(3·72±2·01)×102倍(P<0.01),且NK1.1高表达,TCR Vβ11+与TCR Vα24+表达率基本一致。结论:α-Galcer对NKT细胞有特异的扩增功能,且脐血NKT的扩增效率较外周血高。以表型划分,脐血中的NKT细胞多为NK1.1-,而外周血多为NK1.1+,是一种新的NKT细胞亚型。 展开更多
关键词 脐血 外周血 NKT细胞 Α-GALCER 细胞表型
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S1P/S1PR信号通路对中性粒细胞功能的影响
10
作者 王中英 谢如锋 +3 位作者 杨洁 任亚娜 杨懿铭 范华骅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期989-994,共6页
本研究旨在检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)对fMLP活化的中性粒细胞的引发作用,检测粒细胞活化后发生呼吸爆发的产物,并探究S1P引发作用的信号通路。流式细胞术检测新鲜分离的中性粒细胞的状态;高铁细胞色素C还原法间接计算超氧阴离子(O2-)释放量... 本研究旨在检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)对fMLP活化的中性粒细胞的引发作用,检测粒细胞活化后发生呼吸爆发的产物,并探究S1P引发作用的信号通路。流式细胞术检测新鲜分离的中性粒细胞的状态;高铁细胞色素C还原法间接计算超氧阴离子(O2-)释放量;二氢罗丹明123流式细胞术检测粒细胞的呼吸爆发程度;免疫印迹法检测PI3K-Akt信号通路相关蛋白的表达。结果表明,S1P预处理后fMLP活化的粒细胞所释放的O2-量明显增高;S1P引发的fMLP活化组中,罗丹明123的平均荧光强度明显高于fMLP单独处理组;PI3K及Akt蛋白参与了粒细胞呼吸爆发的信号传递。结论:S1P是一种新的粒细胞引发试剂,较高浓度S1P(10-6μmol/L)能够引发fMLP活化的中性粒细胞发生呼吸爆发;该信号通路可能为S1P与粒细胞上的S1P受体作用,活化下游的PI3K,再通过Akt传递信号,最终活化NADPH氧化酶,发生呼吸爆发。 展开更多
关键词 中性粒细胞 呼吸爆发 1-磷酸鞘氨醇 超氧阴离子 磷酸肌醇-3-激酶
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