肝癌和癌旁肝组织中癌基因多肽产物抗体的制备及初步应用研究 被引量：1

1

作者 杨冬华 刘为纹 +4 位作者 顾健人 万大方 马安卿 李宏年 曲淑敏 《临床肝胆病杂志》 CAS 1993年第3期128-130,共3页

采用Microgenie微机处理系统分析人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、IGF-Ⅱ受体和C-fms癌基因cDNA的核苷酸顺序亲水性及空间结构,选择不同的氨基酸之间亲水性密集片断,经多肽合成仪以固相法进行全合成。用合成的三种基因多肽片断为抗原,分... 采用Microgenie微机处理系统分析人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)、IGF-Ⅱ受体和C-fms癌基因cDNA的核苷酸顺序亲水性及空间结构,选择不同的氨基酸之间亲水性密集片断,经多肽合成仪以固相法进行全合成。用合成的三种基因多肽片断为抗原,分别免疫家兔制备成抗IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和C-fms基因多肽产物抗体。采用免疫印迹法对3例配对的肝癌及癌旁肝组织进行初步应用研究,结果提示三种基因的异常过量表达与肝癌的发生关系密切。 展开更多

关键词 受体 癌基因 免疫印迹 肝肿瘤

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利用集落形成实验和成瘤实验初步研究新基因的成瘤作用

2

作者 韩力薇 覃文新 +2 位作者 王晨 万大方 顾健人 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第4期334-336,339,共4页

目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤... 目的　探讨新基因尤其是肝癌相关新基因的功能。方法　利用集落形成实验和成瘤实验初步分析HC90和HC3898基因的功能。结果　①HC90基因的转染能增加SMMC 772 1肝癌细胞形成的集落数量 ;②注射转染了HC90基因的SMMC 772 1细胞形成的肿瘤平均瘤重大于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组 ;③HC3898全长cDNA转染SMMC 772 1细胞能显著抑制集落的形成 ;④注射转染HC3898基因的SMMC 772 1细胞组平均瘤重小于注射SMMC 772 1细胞的自身对照组的瘤重 ,抑瘤率为 5 0 % ;⑤HC3898实验组瘤块切片检查可见凋亡细胞及凋亡小体 ,瘤块的组织DNA经 1.5 %琼脂糖电泳分析 ,可发现典型的凋亡“阶梯状DNA条带”。结论　HC90可能是与肝癌恶性表型相关的新基因 ,转染SMMC 772 1肝癌细胞后能促进肝癌细胞的生长。HC3898基因可能诱导凋亡并抑制肝癌细胞的生长。集落形成实验和成瘤实验是对基因功能进行初步分析的有效方法 。 展开更多

关键词 集落形成 成瘤 凋亡 新基因 HCC 肿瘤

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肝癌、癌旁肝组织IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体及CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达 被引量：3

3

作者 杨冬华 刘为纹 +6 位作者 顾健人 刘尚廉 万大方 马安卿 蒋惠秋 李岱宗 李宏年 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1991年第6期517-524,共8页

本文采用免疫组织化学(ABC)法、Western印迹法和Northern印迹法从细胞、蛋白及转录水平观察17例肝癌及癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达。结果表明,肝癌组织中3种基因产物的表达水平显著高于正常肝组织... 本文采用免疫组织化学(ABC)法、Western印迹法和Northern印迹法从细胞、蛋白及转录水平观察17例肝癌及癌旁肝组织中IGF-Ⅱ、IGF-Ⅱ受体和CSF-1受体/c-fms癌基因产物的表达。结果表明,肝癌组织中3种基因产物的表达水平显著高于正常肝组织;癌旁肝组织中IGF-Ⅱ和IGF-Ⅱ受体的表达水平显著高于肝癌组织;肝癌及癌旁肝组织IGF-Ⅱ基因呈胚胎型表达特点。但是,肝癌组织中CSF-1受体基因表达则显著高于癌旁肝组织。由此提示3种基因产物异常的过量表达与肝癌细胞自分泌生长刺激机制有关。 展开更多

关键词 肝肿瘤 IGF CSF 受体 癌旁 肝组织

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HCAP1基因对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的作用 被引量：1

4

作者 牧启田 吴向华 +5 位作者 王嵘 杜均祥 郭列平 张海伟 万大方 顾建人 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2003年第4期1-5,共5页

目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Wester... 目的 :研究外源HCAP1基因产物对Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax/Bcl- 2的作用。方法 :用脂质体介导的基因转移方法 ,把外源HCAP1基因转染到Raji细胞中 ,用流式细胞术和Hochest 332 58荧光染色检测细胞凋亡 ;用Westernblot检测外源HCAP1基因对凋亡相关蛋白Bax和Bcl- 2蛋白表达的调节。结果 :外源HCAP1基因导入Raji细胞 2 4、4 8和 96h后 ,细胞凋亡率增加。Westernblot显示Bax/Bcl- 2蛋白表达比值明显增高。结论 :转染外源性HCAP1基因可诱导Raji细胞凋亡 ,使Bax/Bcl- 2蛋白表达比例上调可能是HCAP1诱导凋亡的机制之一。 展开更多

关键词 HCAP1基因 RAJI细胞 细胞凋亡 Bax/Bel-2蛋白

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信使RNA差异显示法比较正常结肠粘膜与结肠癌的基因表达

5

作者 王莉 陆玮 +2 位作者 陈员根 周筱梅 顾健人 《上海医科大学学报》 CSCD 1998年第6期469-469,共1页

信使ＲＮＡ差异显示技术是Ｌｉａｎｇ等［１］１９９２年首创的用于鉴别在某一细胞系、组织或某个发展阶段中特异表达的基因的新方法。其特点在于能迅速方便地获得大量候选的分子生物学信息。该技术在结肠癌研究中的应用尚未见报道。我... 信使ＲＮＡ差异显示技术是Ｌｉａｎｇ等［１］１９９２年首创的用于鉴别在某一细胞系、组织或某个发展阶段中特异表达的基因的新方法。其特点在于能迅速方便地获得大量候选的分子生物学信息。该技术在结肠癌研究中的应用尚未见报道。我们将该技术用于比较正常结肠粘膜与结... 展开更多

关键词 结肠肿瘤 结肠粘膜 信使RNA差异 基因表达

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人类染色体17p13.3位点新克隆基因HC56,HC71和HC90在白血病细胞的表达 被引量：3

6

作者 王嵘 波西雁 +5 位作者 万大方 郁志 杜均祥 牧启田 张洹 顾建人 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期419-422,共4页

为研究人类染色体 1 7p1 3 .3位点新克隆的基因HC56 ,HC71和HC90在白血病细胞中的表达 ,应用同位素标记的、以 βM 2基因作为内参的半定量RT PCR法 ,检测 35例急性白血病和 4株白血病细胞系的HC56 ,HC70和HC90基因的表达。结果显示 ,急... 为研究人类染色体 1 7p1 3 .3位点新克隆的基因HC56 ,HC71和HC90在白血病细胞中的表达 ,应用同位素标记的、以 βM 2基因作为内参的半定量RT PCR法 ,检测 35例急性白血病和 4株白血病细胞系的HC56 ,HC70和HC90基因的表达。结果显示 ,急性淋巴系白血病病人的HC90基因和T淋巴系白血病细胞系Jurkat细胞HC90基因表达水平降低。急性髓系白血病病人HC71基因表达水平降低。HC56基因表达在急性白血病和正常对照间未见显著差异。结论 :在人类白血病有HC70和HC90的基因表达异常。 展开更多

关键词 人类 染色体17p13.3位点 白血病细胞 基因表达 HC56 HC71 HC90

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传染性法氏囊病病毒VP2基因高变区序列分析 被引量：5

7

作者 王永山 周宗安 +5 位作者 高健 刁振宇 邓小昭 赵新泰 李锦军 罗函禄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第2期136-139,共4页

根据传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP2基因cDNA序列 ,在VP2基因高变区设计一对引物 ,用RT_PCR方法扩增IBDV分离株JS3和JS4。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。JS3和JS4的同源性最高达 98% ,与已发表的vvIBDV、IBDV变... 根据传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP2基因cDNA序列 ,在VP2基因高变区设计一对引物 ,用RT_PCR方法扩增IBDV分离株JS3和JS4。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。JS3和JS4的同源性最高达 98% ,与已发表的vvIBDV、IBDV变异株、IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列的同源性在 92 %～ 98%之间。根据IBDV的大ORF推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列 ,JS3和JS4的同源性最高达 97% ,与上述其它病毒的同源性在 91 %～ 97%之间 ;七肽区的氨基酸序列 ,在强毒株完全相同 ,而在弱毒株有一个丝氨酸突变成了其它氨基酸。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病 病毒 VP2基因高变区 同源性分析

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Jurkat细胞转染外源HCAP1基因后的增殖抑制 被引量：2

8

作者 吴向华 王嵘 +5 位作者 杜均样 牧启田 郭列平 郑佩娥 万大方 顾建人 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期454-457,共4页

HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试... HCAP1基因系人类染色体 17p13 .3区带克隆的新肝癌相关基因。已发现人类多种肿瘤存在此区带的杂合性缺失。本研究应用脂质体介导法将HCAP1基因转染T淋巴瘤Jurkat细胞系 ,经G418筛选 ,获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞。用台盼蓝拒染试验计数活细胞 ,绘制生长曲线 ,进行软琼脂集落形成试验。结果显示 :与转染空载体质粒 pBK/CMV的细胞比较 ,转染外源HCAP1基因的Jurkat细胞增殖速率明显减慢 ,细胞倍增时间延长 ,在软琼脂上的集落形成能力下降 (P <0 .0 1)。结论 :外源HCAP1基因产物对Jurkat细胞的增殖有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 HCAP1基因 基因转染 Jurkat细胞系 细胞增殖

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转染外源HCAP1基因对B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的作用

9

作者 郭列平 王嵘 +5 位作者 吴向华 杜均祥 牧启田 孙奋勇 万大方 顾建人 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1879-1882,共4页

目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HC... 目的:HCAP1基因定位于人类染色体17p13．3,此区域在多种肿瘤组织呈杂合性缺失,本研究旨在探 讨HCAP1外源基因产物对B淋巴瘤细胞系Raji细胞增殖的作用。方法:应用脂质体介导法,将HCAP1基因转染Raji 细胞,经G418筛选、获得稳定表达外源HCAP1基因的细胞,用台盼蓝活细胞计数、绘制生长曲线、软琼脂集落培养及 BrdU(5溴-2’脱氧尿嘧啶)标记法,观察HCAP1基因产物对Raji细胞增殖的作用。结果:与转染空载体的对照细胞 比较,稳定表达外源HCAP1基因的细胞生长速度明显减慢,倍增时间明显延长,细胞集落形成数明显减少,BrdU掺 人细胞比例降低。结论:外源HCAP1基因产物的过表达对Raji细胞的增殖有抑制作用。 展开更多

关键词 基因 HCAP1 淋巴瘤 RAJI细胞

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应用PCR方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段

10

作者 徐砺新 王凡 +2 位作者 刘彦仿 万大方 顾健人 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第4期40-40,52,共2页

应用ＰＣＲ方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段徐砺新，王凡，刘彦仿（第四军医大学病理学教研室，西京医院眼科，西安７１００３２）万大方，顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）当前，... 应用ＰＣＲ方法直接从噬菌体原液中扩增目的基因片段徐砺新，王凡，刘彦仿（第四军医大学病理学教研室，西京医院眼科，西安７１００３２）万大方，顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）当前，基因分子生物学已成为全世界研究的热... 展开更多

关键词 噬菌体 基因 扩增 片段 聚合酶链反应

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生殖细胞条件性敲除Usp16基因小鼠的建立、鉴定及表型分析

11

作者 李卫杰 梁冬丽 +3 位作者 刘永忠 王朝霞 乔中东 徐汪节 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期376-383,共8页

目的建立生殖细胞特异性敲除去泛素化酶Usp16小鼠,并分析其生殖表型,探究Usp16是否在精子发生过程发挥功能。方法首先,将Vasa-cre转基因小鼠与Usp16条件性小鼠(Usp16flox/flox)杂交获得生殖细胞特异性敲除Usp16小鼠;其次,利用qPCR、West... 目的建立生殖细胞特异性敲除去泛素化酶Usp16小鼠,并分析其生殖表型,探究Usp16是否在精子发生过程发挥功能。方法首先,将Vasa-cre转基因小鼠与Usp16条件性小鼠(Usp16flox/flox)杂交获得生殖细胞特异性敲除Usp16小鼠;其次,利用qPCR、Western Blot和免疫荧光检测睾丸中Usp16表达;并通过合笼交配、计算机辅助精子分析和HE染色法进行生殖表型分析。结果成功获得了生殖细胞特异性敲除Usp16纯合子(Usp16flox/flox/Vasa-cre+),及杂合子小鼠(Usp16flox/wt/Vasa-cre+)。与野生型相比,Usp16flox/wt/Vasa-cre+雄鼠生殖表型没有显著性变化,但与纯合子雄鼠交配的雌鼠受孕率仅为7%,精子数量减少约79%,活力下降约87%,精子畸形率高达83%,睾丸曲细精管中出现多核细胞,附睾中早熟精子数增多了约3倍。结论小鼠睾丸内生殖细胞Usp16纯合敲除会严重降低精子质量,从而降低雄性生育能力。 展开更多

关键词 精子发生 Usp16 生殖力 CRE-LOXP

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裸鼠肿瘤动物模型VEGF受体表达及其意义 被引量：5

12

作者 李钧敏 陆洪芬 +2 位作者 田培坤 姚明 顾健人 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2002年第1期1-4,共4页

目的　通过免疫组织化学染色了解flt 1与flk 1 KDR(VEGF的两个高亲和受体 )在人肿瘤细胞皮下接种肿瘤动物模型的血管内皮细胞与肿瘤细胞中的表达。方法　取荷瘤裸鼠皮下接种瘤块 ,漂洗、固定、石蜡连续切片 ,进行两种受体相应免疫组化... 目的　通过免疫组织化学染色了解flt 1与flk 1 KDR(VEGF的两个高亲和受体 )在人肿瘤细胞皮下接种肿瘤动物模型的血管内皮细胞与肿瘤细胞中的表达。方法　取荷瘤裸鼠皮下接种瘤块 ,漂洗、固定、石蜡连续切片 ,进行两种受体相应免疫组化检测。结果　在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中flt 1的阳性率大部分为强阳性或中阳性 ,而只有在荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的阳性率为弱阳性 ,在荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中flt 1的表达为阴性。相比较而言 ,在 13种荷瘤裸鼠血管内皮细胞及肿瘤细胞中KDR的阳性率大部分为中阳性或弱阳性 ,并且在荷人肝癌SMMC 772 1裸鼠 ,荷人胃腺癌SPC A1裸鼠 ,荷人高转移肝癌移植瘤裸鼠 ,荷人卵巢癌SKOv3裸鼠的肿瘤细胞中 ,荷人宫颈癌移植瘤裸鼠和荷人胃腺癌MKN 4 5裸鼠的肿瘤细胞中 ,KDR表达为阴性。结论　VEGF受体共同表达于肿瘤血管内皮细胞与肿瘤细胞 ,提示了VEGF与VEGF受体结合作用在肿瘤演化中的重要性 。 展开更多

关键词 小鼠 免疫组织化学 VEGF受体 表达 裸鼠 肿瘤 动物模型

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肿瘤中血管内皮生长因子受体的表达 被引量：4

13

作者 李钧敏 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1999年第2期145-148,共4页

血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)是肿瘤血管生长的最主要调节者.VEGF通过与VEGF受体的结合,介导其生物学功能.flt-1与flk-1/KDR是VEGF的两个高亲和的受体,不同的受体可介导VEGF不同的生物学功能.本文对... 血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)是肿瘤血管生长的最主要调节者.VEGF通过与VEGF受体的结合,介导其生物学功能.flt-1与flk-1/KDR是VEGF的两个高亲和的受体,不同的受体可介导VEGF不同的生物学功能.本文对VEGF受体的结构与特性,VEGF受体在肿瘤标本、肿瘤细胞系、内皮细胞与裸鼠皮下接种肿瘤动物模型中的表达以及VEGF受体表达的调控等方面作一综述. 展开更多

关键词 血管内皮 生长因子 受体 肿瘤 表达 血管生长

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原发性肝癌的分层筛查与监测指南(2020版) 被引量：86

14

作者 中华预防医学会肝胆胰疾病预防与控制专业委员会 中国研究型医院学会肝病专业委员会 +10 位作者 中华医学会肝病学分会 中华预防医学会肿瘤预防与控制专业委员会感染性肿瘤防控学组 丁惠国 屠红 曲春枫 曹广文 庄辉 赵平 徐小元 杨永平 卢实春 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期286-295,共10页

中国原发性肝癌(简称肝癌)年龄调整发病率呈逐年下降趋势,但肝癌发病人数占全球55%,肝癌所导致的疾病负担仍呈上升趋势,患者5年生存率无显著性提高。肝硬化和未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎是中国肝癌的主要病因。指南推荐了适合临床实践... 中国原发性肝癌(简称肝癌)年龄调整发病率呈逐年下降趋势,但肝癌发病人数占全球55%,肝癌所导致的疾病负担仍呈上升趋势,患者5年生存率无显著性提高。肝硬化和未抗病毒治疗的慢性乙型肝炎是中国肝癌的主要病因。指南推荐了适合临床实践的低危、中危、高危和极高危4个层次的肝癌风险人群辨识特征。在医院和社区人群中筛查伴肝癌风险的患者,并科学地进行分层监测。伴有肝癌风险的患者需要终生监测,指南根据风险层次推荐了不同的肝癌监测间隔和工具,对于肝癌高危人群,6个月1次腹部超声联合血清甲胎蛋白监测(常规监测);对于肝癌极高危人群,3个月1次常规监测,6~12个月增强CT或MRI检查1次,以提高早期肝癌诊断率和降低监测成本;低中危人群中,肝癌年发生率低,可延长监测间隔为1年或以上。指南部分推荐意见的成本-效益仍需要进一步评价。 展开更多

关键词 肝肿瘤 肝硬化 乙型肝炎 慢性 筛查 监测 诊疗准则(主题)

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癌症患者能否长期生存? 被引量：2

15

作者 王思颖 郑幸玲 覃文新 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期49-50,共2页

为了探讨癌症患者长期生存的可能性,从美国癌症研究现状出发,简述了在癌症防诊治技术的支持下,癌症患者总体5年生存率自20世纪70年代起有所改善,并于近几年显著提高.这表明随着癌症研究和医疗方法的进步,癌症有望脱离高死亡率疾病范畴,... 为了探讨癌症患者长期生存的可能性,从美国癌症研究现状出发,简述了在癌症防诊治技术的支持下,癌症患者总体5年生存率自20世纪70年代起有所改善,并于近几年显著提高.这表明随着癌症研究和医疗方法的进步,癌症有望脱离高死亡率疾病范畴,癌症患者有望长期生存. 展开更多

关键词 癌症 5年生存率 免疫治疗 长期生存

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功能纳米材料应用于电化学新冠病毒生物传感器的研究进展

16

作者 刘瑶 尤勋海 +2 位作者 赵冰 罗晓莹 陈星 《无机材料学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2023年第1期32-42,共11页

新冠疫情暴发对全球公共卫生构成了巨大威胁,病毒的快速、准确诊断对新冠疫情防控具有至关重要的作用。近年来,以纳米材料为基础的电化学传感技术在快速、高灵敏度/高特异性分子诊断方面显示出巨大的潜力。本文简要介绍了新型冠状病毒(S... 新冠疫情暴发对全球公共卫生构成了巨大威胁,病毒的快速、准确诊断对新冠疫情防控具有至关重要的作用。近年来,以纳米材料为基础的电化学传感技术在快速、高灵敏度/高特异性分子诊断方面显示出巨大的潜力。本文简要介绍了新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的结构特征及常规检测方法,总结了电化学生物检测相关传感特点和机制。在此基础上,详细评述了金纳米材料、氧化物纳米材料、碳基纳米材料等为基础的电化学传感器用于快速、准确检测新冠病毒的研究进展。最后,展望了基于电化学传感技术在未来生物分子诊断中的应用。 展开更多

关键词 SARS-CoV-2 电化学生物传感器 纳米材料 快速诊断 综述

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多聚阳离子对非病毒载体转移效率的影响 被引量：3

17

作者 李钧敏 田培坤 +1 位作者 蒋惠秋 顾健人 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第1期6-10,共5页

目的：了解鱼精蛋白应用于血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的可行性。方法：利用ＧＶ１，ＧＶ２靶向性非病毒载体来比较多聚赖氨酸与鱼精蛋白对靶向性基因转移复合体携带ＤＮＡ的能力及体外基因转移效率的影响。结果：在Ａ... 目的：了解鱼精蛋白应用于血管内皮生长因子受体介导的靶向性非病毒载体的可行性。方法：利用ＧＶ１，ＧＶ２靶向性非病毒载体来比较多聚赖氨酸与鱼精蛋白对靶向性基因转移复合体携带ＤＮＡ的能力及体外基因转移效率的影响。结果：在Ａ３７５细胞中，鱼精蛋白与多聚赖氨酸参与形成的复合体基因导入率都为５０％左右。在ＡＢＡＥ细胞中，鱼精蛋白参与形成的复合体基因导入率只有２０％左右，而多聚赖氨酸可达７０％左右。鱼精蛋白参与形成的复合体导入引起的基因表达在转染后第６天达到高峰，传代培养不影响基因的表达水平；多聚赖氨酸在转染后第７天达到高峰，传代培养使基因的导入率明显下降。结论：鱼精蛋白在血管内皮生长因子受体介导的基因转移系统中的应用具有一定的限制性。 展开更多

关键词 多聚赖氨酸 鱼精蛋白 肿瘤 基因治疗 基因转移

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HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达 被引量：1

18

作者 郭列平 牧启田 +2 位作者 王嵘 万大方 顾建人 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期512-514,共3页

目的:了解HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达。方法:分离18个正常个体外周血白细胞和20例急性白血病患者原代白血病细胞,用免疫细胞化学染色和Western印迹分析HCAP1蛋白表达并进行比较。结果:受检的正常入外周血自细胞... 目的:了解HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达。方法:分离18个正常个体外周血白细胞和20例急性白血病患者原代白血病细胞,用免疫细胞化学染色和Western印迹分析HCAP1蛋白表达并进行比较。结果:受检的正常入外周血自细胞和白血病患者原始细胞均表达HCAP1蛋白;在正常人外周血成熟白细胞,HCAP1主要分布于细胞核,而急性白血病患者的原始细胞在细胞核和细胞质均有分布;急性白血病患者原始细胞HCAP1蛋白的相对表达值(HCAP1／actin的灰度比值)为(0.37±0.23),正常入外周血白细胞的HCAP1蛋白相对表达值为(0.31±0.19,P>0.05)。结论:正常人外周血白细胞和白血病患者的原代白血病细胞均表达HCAP1蛋白,两者之间表达水平并无显著差异,但其在细胞内的分布有所不同。 展开更多

关键词 HCAP1蛋白 急性白血病 外周血 原始细胞 表达

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以PAC和BAC克隆为探针筛选cDNA文库 被引量：6

19

作者 韩力薇 覃文新 +4 位作者 赵新泰 黄弋 张萍萍 万大方 顾健人 《上海医科大学学报》 CSCD 2000年第6期449-452,共4页

目的　建立噬菌体P1衍生的人工染色体 (PAC)和细菌人工染色体 (BAC)筛选人正常肝cDNA文库的方法 ,并期望分离到与肝癌相关的新基因。方法　用位于 17p13.3肝癌杂合性缺失区内的PAC5 79和BAC15 2 9克隆为探针 ,以噬菌斑杂交筛选法筛选人... 目的　建立噬菌体P1衍生的人工染色体 (PAC)和细菌人工染色体 (BAC)筛选人正常肝cDNA文库的方法 ,并期望分离到与肝癌相关的新基因。方法　用位于 17p13.3肝癌杂合性缺失区内的PAC5 79和BAC15 2 9克隆为探针 ,以噬菌斑杂交筛选法筛选人正常肝cDNA文库 ,并对分离出的cDNA阳性克隆进行部分测序和计算机序列比较及Southern杂交分析 ,进一步确定可能与肝癌相关的新基因。结果　以PAC5 79为探针 ,筛选出78个阳性克隆 ,经初步分析 ,其中 18个为可能的肝癌相关新基因。以BAC15 2 9为探针 ,筛选出 8个阳性克隆 ,经初步分析 ,其中 5个为可能的肝癌相关新基因。结论　以PAC和BAC克隆为探针筛选cDNA文库是一种有效的表达序列分离法 。 展开更多

关键词 CDNA文库 杂交筛选 克隆 肝癌 PAC BAC

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两种纯化噬菌体DNA方法的比较 被引量：2

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作者 徐励新 王凡 +2 位作者 刘彦仿 万大方 顾健人 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期58-59,共2页

两种纯化噬菌体ＤＮＡ方法的比较徐励新王凡＊刘彦仿（第四军医大学病理学教研室＊西京医院眼科，西安７１００３２）万大方顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）１材料和方法噬菌体λｇｔ１１... 两种纯化噬菌体ＤＮＡ方法的比较徐励新王凡＊刘彦仿（第四军医大学病理学教研室＊西京医院眼科，西安７１００３２）万大方顾健人（上海市肿瘤研究所癌基因与相关基因国家重点实验室，上海２０００３２）１材料和方法噬菌体λｇｔ１１贮存液以合适的滴度铺平板成单一噬斑... 展开更多

关键词 噬菌体 DNA 纯化 提取

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