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人牙本质涎蛋白在COS-7细胞中的表达
1
作者
张莹
史俊南
+3 位作者
汪平
顾淑萍
范继红
费俭
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期415-417,共3页
目的 :构建人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将hDSP全长基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3 ,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,脂质体转染法转染COS 7细胞 ,48～ 72h收集细...
目的 :构建人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将hDSP全长基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3 ,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,脂质体转染法转染COS 7细胞 ,48～ 72h收集细胞及培养上清 ,Westernblot和免疫组化检测表达产物。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;Westernblot检测显示在 60 0 0 0处出现一条清晰的特异性免疫阳性条带 ;免疫组化染色显示细胞胞质内有大量棕黄色颗粒 ,进一步证明该转染方法可行 ,转染效率较高。结论 :hDSP全长基因可以在COS 7细胞获得瞬时高效表达。
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关键词
人牙本质涎蛋白
COS-7细胞
表达
脂质体转染法
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职称材料
从人软骨提取总RNA和CDMP-1成熟肽片段的克隆
被引量：
2
2
作者
马秦
邱蔚六
+3 位作者
费俭
李文刚
陈富林
徐蓬
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2000年第6期509-511,共3页
目的克隆人软骨来源形态发生蛋白 - 1(CDMP - 1)成熟肽编码区的基因片段。 方法用异硫氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA ,利用RT -PCR方法扩增出人CDMP -1成熟区的基因片段 (约 1.0kbp) ,将所得...
目的克隆人软骨来源形态发生蛋白 - 1(CDMP - 1)成熟肽编码区的基因片段。 方法用异硫氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA ,利用RT -PCR方法扩增出人CDMP -1成熟区的基因片段 (约 1.0kbp) ,将所得基因片段插入 pBluescript质粒载体 ,重组质粒DNA ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。 结果从软骨组织直接抽取到总RNA ,其质量与从等重量软骨组织中的原代软骨细胞所抽取的基本一致 ,人CDMP - 1酶切图谱正确 ,测序得到的部分序列与基因库公布序列一致。 结论从软骨组织可以直接抽取总RNA ,克隆到人CDMP - 1成熟肽编码区的基因片段。
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关键词
软骨来源形态发生蛋白-1
软骨组织
RT-PCR
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职称材料
题名
人牙本质涎蛋白在COS-7细胞中的表达
1
作者
张莹
史俊南
汪平
顾淑萍
范继红
费俭
机构
西安第四军医大学口腔医学院
上海细胞生物学研究所基因工程组
出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期415-417,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目 (3980 0 1 55)
文摘
目的 :构建人牙本质涎蛋白 (humandentinsialoprotein ,hDSP)真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将hDSP全长基因定向克隆入真核表达质粒载体pcDNA3 ,构建pcDNA3 hDSP重组质粒 ,脂质体转染法转染COS 7细胞 ,48～ 72h收集细胞及培养上清 ,Westernblot和免疫组化检测表达产物。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;Westernblot检测显示在 60 0 0 0处出现一条清晰的特异性免疫阳性条带 ;免疫组化染色显示细胞胞质内有大量棕黄色颗粒 ,进一步证明该转染方法可行 ,转染效率较高。结论 :hDSP全长基因可以在COS 7细胞获得瞬时高效表达。
关键词
人牙本质涎蛋白
COS-7细胞
表达
脂质体转染法
Keywords
Sialoglycoproteins
COS-7 cell
Transient expression
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
从人软骨提取总RNA和CDMP-1成熟肽片段的克隆
被引量：
2
2
作者
马秦
邱蔚六
费俭
李文刚
陈富林
徐蓬
机构
上海
第二医科大学第九人民医院口腔颌面外科
中国科学院
上海细胞生物学研究所基因工程组
第四军医大学口腔医院口腔颌面外科
出处
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2000年第6期509-511,共3页
文摘
目的克隆人软骨来源形态发生蛋白 - 1(CDMP - 1)成熟肽编码区的基因片段。 方法用异硫氰酸胍一步法从人软骨组织和酶消化法原代培养的软骨细胞中分别抽提总RNA ,利用RT -PCR方法扩增出人CDMP -1成熟区的基因片段 (约 1.0kbp) ,将所得基因片段插入 pBluescript质粒载体 ,重组质粒DNA ,通过酶切分析和核苷酸序列分析鉴定阳性克隆。 结果从软骨组织直接抽取到总RNA ,其质量与从等重量软骨组织中的原代软骨细胞所抽取的基本一致 ,人CDMP - 1酶切图谱正确 ,测序得到的部分序列与基因库公布序列一致。 结论从软骨组织可以直接抽取总RNA ,克隆到人CDMP - 1成熟肽编码区的基因片段。
关键词
软骨来源形态发生蛋白-1
软骨组织
RT-PCR
Keywords
cartilage-derived protein-1 RT-PCR cartilage
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人牙本质涎蛋白在COS-7细胞中的表达
张莹
史俊南
汪平
顾淑萍
范继红
费俭
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
0
在线阅读
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职称材料
2
从人软骨提取总RNA和CDMP-1成熟肽片段的克隆
马秦
邱蔚六
费俭
李文刚
陈富林
徐蓬
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2000
2
在线阅读
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职称材料
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参考文献
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