GFP基因转染对骨髓基质细胞体内向软骨细胞分化的示踪作用 被引量：8

1

作者 周广东 王晓云 +3 位作者 刘德莉 崔磊 刘伟 曹谊林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期27-30,共4页

目的 :实现绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)报告基因在骨髓基质细胞 (BMSC)中的高效、稳定、持久表达 ,直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化。方法 :构建重组逆转录病毒表达载体RV GFP ,通过PT6 7包装细胞克隆、G4 1... 目的 :实现绿色荧光蛋白 (greenfluorescentprotein ,GFP)报告基因在骨髓基质细胞 (BMSC)中的高效、稳定、持久表达 ,直接示踪BMSC在关节软骨缺损内的分布及分化。方法 :构建重组逆转录病毒表达载体RV GFP ,通过PT6 7包装细胞克隆、G4 18筛选及扩增 ,获得大量含GFP基因的假病毒液 ,并直接转染BMSC。将含有GFP基因转染标记的BMSC与生物可降解材料复合后 ,植入猪自体关节软骨缺损处 ,7个月后共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSC的分布及分化。结果 :经双酶切鉴定证实重组逆转录病毒表达载体RV GFP构建成功 ,转染PT6 7细胞后可在荧光激发波长下 ,发出明亮的绿色荧光 ,转染率达 2 0 %～ 5 0 % ,经G4 18筛选后可达 10 0 %。筛选、扩增后 ,PT6 7细胞的上清培养液可成功地转染BMSC ,筛选后能稳定、持久、高效表达GFP。将标记的BMSC植入关节软骨缺损 7个月后 ,修复组织仍能高效表达GFP ,激光共聚焦显微镜下显示 ,多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞。结论 :构建的重组逆转录病毒GFP载体 ,能持久标记骨髓基质细胞 ,用于细胞动态变化的研究及细胞转归的示踪 ,该方法简便、灵敏、可靠、直观。标记的BMSC可在关节软骨缺损内分化为成熟的软骨细胞 。 展开更多

关键词 重组逆转录病毒载体 绿色荧光蛋白 骨髓基质细胞 软骨形成

在线阅读 下载PDF 职称材料

扩张兔皮肤肌动蛋白、肌球蛋白和α-平滑肌肌动蛋白的变化 被引量：5

2

作者 王喜梅 范志宏 +1 位作者 刘凯 陈言汤 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期706-709,共4页

目的 :了解兔皮肤扩张后皮肤肌动蛋白 (actin)、肌球蛋白 (myosin)和α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、... 目的 :了解兔皮肤扩张后皮肤肌动蛋白 (actin)、肌球蛋白 (myosin)和α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只植入扩张器不扩张作为对照组。通过免疫组织化学和原位杂交的方法观察扩张后即时、1周、12周、2 4周皮肤中actin、myosin、α SMA的变化。结果 :扩张后兔皮肤中的actin、α SMA阳性细胞数明显增多 ,快速扩张组与常规扩张组各时段比较差异有统计学意义。myosin快速扩张与常规扩张组差异无统计学意义。免疫组化和原位杂交的结果相同。结论 :扩张刺激可使成纤维细胞转化为肌成纤维细胞 ;快速扩张组α 展开更多

关键词 组织扩张术 挛缩 Α-SMA 兔 皮肤 肌动蛋白 肌球蛋白 Α-平滑肌肌动蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组BMP7腺病毒的构建及转染骨髓基质干细胞后的表达 被引量：5

3

作者 祝联 刘伟 +4 位作者 刘德莉 吴娟娟 王丹茹 崔磊 曹谊林 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期245-253,共9页

根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得B... 根据Clonetech公司的腺病毒载体构建流程 ,原核表达载体pBlue- BMP7经一系列特定的限制性内切酶酶切 ,重组成BMP7的腺病毒载体 ,并转染 2 93细胞进行大量扩增、滴度测定。重组Adeno- BMP7经限制性内切酶PI SceⅠ和Ⅰ CeuⅠ双酶切获得BMP7基因片段 ,PCR扩增得到特异的扩增片段 ,表明重组的Adeno-BMP7载体构建成功 ,其中携带有目的基因BMP7cDNA片段。Adeno- Lac- Z的体外转染骨髓基质干细胞 (BMSCs) ,染色表明转染率可达90 %以上 ;RT- PCR、免疫组化证明Adeno -BMP7转染BMSCs后BMP7在基因和蛋白水平上均有表达 ;转染Adeno- BMP7后的BMSCs细胞悬液裸鼠肌肉内注射后 ,x光片和组织学观察都表明BMP7转染可明显促进新骨的形成 ,与没转染Adeno -BMP7的BMSCs有显著差异。 展开更多

关键词 重组腺病毒 骨髓基质干细胞 骨形成蛋白7

在线阅读 下载PDF 职称材料

供皮区创面愈合中后期应用干湿性敷料的疗效对比 被引量：8

4

作者 潘亚男 阮洪 +2 位作者 王琳琳 李萍 王海蓉 《解放军护理杂志》 2005年第12期17-18,共2页

目的观察干湿性敷料对供皮区创面中后期愈合的作用。方法对84例患者行大腿外侧取皮,将供皮区创面分为干性敷料组(即用凡士林油纱覆盖)和湿性敷料组(即用多爱肤敷料覆盖),观察采用两种不同敷料3 d后供皮区创面的愈合时间。结果创面愈合... 目的观察干湿性敷料对供皮区创面中后期愈合的作用。方法对84例患者行大腿外侧取皮,将供皮区创面分为干性敷料组(即用凡士林油纱覆盖)和湿性敷料组(即用多爱肤敷料覆盖),观察采用两种不同敷料3 d后供皮区创面的愈合时间。结果创面愈合的平均时间,干性敷料组为(13.3±2.7)d,湿性敷料组为(15.0±1.5)d。两者比较差异有显著意义(P<0.01)。结论在创面愈合中后期使用干性敷料更有利于供皮区创面的愈合,并能得到患者的认可。 展开更多

关键词 于性敷料 湿性敷料 供皮区创面 愈合过程 中后期

在线阅读 下载PDF 职称材料

扩张兔皮肤超微结构的变化 被引量：5

5

作者 王喜梅 范志宏 +1 位作者 刘凯 陈言汤 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期703-706,共4页

目的 :动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只 ,分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只... 目的 :动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只 ,分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果 :表皮扩张后经历一由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生 ,功能由静止转向活跃 ,胶原纤维碎裂成片 ,弹力纤维部分断裂 ,炎症细胞浸润 ;扩张后 1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复 ,显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后 12周、2 4周 ,成纤维细胞趋于稳定、形态狭长 ,部分胶原排列紊乱 ,部分有似瘢痕样改变。结论 :扩张刺激可致兔皮肤创伤 。 展开更多

关键词 成纤维细胞 组织扩张术 挛缩 兔 皮肤 超微结构

在线阅读 下载PDF 职称材料

兔角膜内皮、上皮及基质细胞体外培养扩增的研究 被引量：8

6

作者 傅瑶 范先群 曹谊林 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期35-38,共4页

目的 建立角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养扩增的简单稳定的方法,为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。 方法 内皮细胞与后弹力层在培养基中孵育后消化法获原代细胞,胰酶消化去除表层上皮后取角膜缘,组织块法培养角膜缘上皮细胞,基... 目的 建立角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养扩增的简单稳定的方法,为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。 方法 内皮细胞与后弹力层在培养基中孵育后消化法获原代细胞,胰酶消化去除表层上皮后取角膜缘,组织块法培养角膜缘上皮细胞,基质细胞应用胶原酶消化法获原代培养,各细胞融合后胰酶消化依次传代培养。结果 原代内皮细胞4～5 d融合成单层细胞,可连续传6～7代。上皮细胞1周左右生长融合,连续传3～4代后细胞形态改变。基质细胞接种6～7 d后近融合,传代后增殖明显,可连续传10代。结论依据角膜组织特征选择合适的方法体外分离、培养角膜3种细胞成分,可获连续传代扩增的角膜细胞。 展开更多

关键词 角膜 内皮细胞 上皮细胞 基质细胞 体外 细胞培养 扩增

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用GFP基因转染技术示踪组织工程技术构建角膜基质 被引量：4

7

作者 胡晓洁 王敏 +2 位作者 刘德莉 刘伟 曹谊林 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第3期238-241,共4页

目的　应用基因转染技术将绿色荧光蛋白 (GFP)标记角膜基质细胞 ,以此为种子细胞构建角膜基质并对构建过程进行示踪。方法　构建携带EGFP基因的重组逆转录病毒载体PLNCX2 EGFP ,转染兔角膜基质细胞 ,然后将该细胞接种于PGA ,形成细胞 ... 目的　应用基因转染技术将绿色荧光蛋白 (GFP)标记角膜基质细胞 ,以此为种子细胞构建角膜基质并对构建过程进行示踪。方法　构建携带EGFP基因的重组逆转录病毒载体PLNCX2 EGFP ,转染兔角膜基质细胞 ,然后将该细胞接种于PGA ,形成细胞 -生物材料复合物 ,移植于母兔角膜基质板层内。术后 8周 ,组织学切片 ,HE染色 ,荧光显微镜下对绿色荧光蛋白 (GFP)进行示踪观察。结果　 8周后 ,组织工程化角膜组织形成 ,组织学切片显示PGA完全降解 ,新生组织形成 ,组织排列规整 ,荧光显微镜下见新生组织呈绿色 ,提示EGFP表达。结论　组织工程角膜基质的组织学结构与角膜基质相类似。新生组织表达GFP 。 展开更多

关键词 组织工程 角膜基质 绿色荧光蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

多孔高分子聚合物在眶周缺损修复中的应用 被引量：3

8

作者 刘清 杨群 +1 位作者 范志宏 钱云良 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第1期32-33,36,共3页

目的介绍Medpor多孔聚乙烯高分子聚合物生物物理特性及临床使用方法及效果。方法应用Medpor作为骨组织充填物于15例眶周骨缺损的患者。结果15例眶周骨缺损的患者均取得良好疗效。结论Medpor有较好的生物相容性，长期植入后与周围组织无... 目的介绍Medpor多孔聚乙烯高分子聚合物生物物理特性及临床使用方法及效果。方法应用Medpor作为骨组织充填物于15例眶周骨缺损的患者。结果15例眶周骨缺损的患者均取得良好疗效。结论Medpor有较好的生物相容性，长期植入后与周围组织无明显界面，无术后吸收，术中塑形容易、固定方便。 展开更多

关键词 多孔人工材料 眶周缺损 修复术 高分子聚合物

在线阅读 下载PDF 职称材料

扩张兔皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化 被引量：1

9

作者 王喜梅 范志宏 +1 位作者 刘凯 陈言汤 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期710-711,共2页

目的 :探讨兔皮肤扩张后皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 ... 目的 :探讨兔皮肤扩张后皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只植入扩张器不扩张作为对照组。通过免疫组化的方法观察扩张后即时 ,1,12 ,2 4周真皮中胶原含量、Ⅰ、Ⅲ型胶原比例的变化。结果 :扩张后即时Ⅰ型胶原染色的基底膜连续性破坏。排列无规律 ,多呈碎片状。胶原束间隙增大、Ⅲ胶原合成增加 ,快速扩张组比常规扩张组明显 ;后期胶原纤维重叠。结论 :胶原Ⅰ。 展开更多

关键词 组织扩张术 挛缩 胶原 兔 皮肤

在线阅读 下载PDF 职称材料

扩张兔皮肤转化生长因子β1的变化 被引量：1

10

作者 王喜梅 范志宏 +1 位作者 刘凯 陈言汤 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期713-715,共3页

目的 :观察扩张兔皮肤转化生长因子 β1的变化规律。 方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,... 目的 :观察扩张兔皮肤转化生长因子 β1的变化规律。 方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只植入扩张器不扩张作为对照组。用免疫组化和原位杂交法观察扩张后即时 ,1周 ,12周 ,2 4周皮肤中转化生长因子 β1的变化。结果 :扩张后皮肤中转化生长因子 β1的表达明显增多 ,快速扩张组较常规扩张组程度严重 ,2种方法结果一致。结论 :扩张刺激造成皮肤损伤 ,快速扩张组比常规扩张组严重。转化生长因子 β1在修复过程中起重要作用。 展开更多

关键词 组织扩张术 转化生长因子Β1 兔 皮肤

在线阅读 下载PDF 职称材料

扩张兔皮肤透明质酸含量的变化 被引量：1

11

作者 王喜梅 刘凯 赵瑞芳 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2003年第5期711-713,共3页

目的 :动态观察扩张刺激后兔头部皮肤透明质酸含量的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验... 目的 :动态观察扩张刺激后兔头部皮肤透明质酸含量的变化。方法 :选用 2～ 3kg新西兰大白兔 6 4只分为 2大组 ,快速扩张组和常规扩张组 ,每组 32只 ,每大组再分为 4组 ,为扩张完成后即时、1周、12周、2 4周组 ,每组 8只 ,其中 4只为实验组 ,另 4只植入扩张器不扩张作为对照组。通过放射免疫的方法测定扩张后即时、1周、12周、2 4周真皮透明质酸的含量。结果 :扩张刺激使透明质酸含量增高 ,后渐下降。快速扩张组和常规扩张组透明质酸含量差异有统计学意义。结论 展开更多

关键词 透明质酸 组织扩张 挛缩 兔 皮肤

在线阅读 下载PDF 职称材料

佩皮劳人际关系模式应用于唇裂患儿及其家长的护理体会 被引量：2

12

作者 王琳琳 潘亚男 《解放军护理杂志》 2005年第7期91-91,共1页

关键词 护理体会 唇裂患儿 关系模式 家长 人际关系理论 1952年 医学模式 护理服务 护理理论 护理专家 护理过程 互动关系 治疗性

在线阅读 下载PDF 职称材料

改良灌肠法对尿道下裂患儿术前清洁灌肠效果的临床观察 被引量：3

13

作者 王琳琳 潘亚男 《解放军护理杂志》 2004年第12期62-63,共2页

清洁灌肠是尿道下裂患儿手术最重要的术前准备工作之一,儿童作为外科手术中一个比较特殊的群体,其清洁淞肠的效果与手术顺利开展、降低术后感染率及并发症、促进康复和功能重建密切相关。本文旨在介绍一种新的小儿灌肠法,并与传统小儿... 清洁灌肠是尿道下裂患儿手术最重要的术前准备工作之一,儿童作为外科手术中一个比较特殊的群体,其清洁淞肠的效果与手术顺利开展、降低术后感染率及并发症、促进康复和功能重建密切相关。本文旨在介绍一种新的小儿灌肠法,并与传统小儿灌肠法进行比较,结果发现改良法其更适合临床使用,有利于手术的顺利进行和患儿的早日康复。 展开更多

关键词 尿道下裂 清洁灌肠 儿童 并发症

在线阅读 下载PDF 职称材料

无水酒精注射治疗腋臭 被引量：2

14

作者 邬寿贞 杨川 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第2期190-191,共2页

我院外科采用复方无水酒精注射（注射疗法）灭活腋窝大汗腺以及采用切除腋窝大汗腺（切除疗法）的方法来治疗腋臭。为评价二者的疗效，本文随机收集二组病人各50例，进行近期和远期疗效分析比较。材料与方法临床资料从1979年开始，我院... 我院外科采用复方无水酒精注射（注射疗法）灭活腋窝大汗腺以及采用切除腋窝大汗腺（切除疗法）的方法来治疗腋臭。为评价二者的疗效，本文随机收集二组病人各50例，进行近期和远期疗效分析比较。材料与方法临床资料从1979年开始，我院采用注射疗法治疗腋臭病人上万人次。... 展开更多

关键词 腋臭 治疗 无水酒精注射

在线阅读 下载PDF 职称材料

胎鼠无瘢痕愈合的实验研究

15

作者 崔磊 汪希 +2 位作者 李伟 钱云良 关文祥 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1997年第6期401-404,共4页

对胎鼠无瘢痕愈合的形态学特征进行”观察。发现无瘢痕愈合过程中成纤维细胞微丝排列稀疏；而成年鼠伤口愈合过程中成纤维细胞表现为明显的肌成纤维细胞特征，提示不同的成纤维细胞表型参与了两种愈合过程。对胎鼠无瘢痕愈合手术操作过... 对胎鼠无瘢痕愈合的形态学特征进行”观察。发现无瘢痕愈合过程中成纤维细胞微丝排列稀疏；而成年鼠伤口愈合过程中成纤维细胞表现为明显的肌成纤维细胞特征，提示不同的成纤维细胞表型参与了两种愈合过程。对胎鼠无瘢痕愈合手术操作过程进有了讨论。 展开更多

关键词 伤口愈合 瘢痕 成纤维细胞 动物实验 皮肤创伤

在线阅读 下载PDF 职称材料

眼眶骨折眼球内陷功能性复位的实验研究

16

作者 范先群 张涤生 +2 位作者 韦敏 林明 沈勤 《眼科研究》 CSCD 2000年第4期325-328,共4页

目的研究对眼眶骨折眼球内陷施行手术治疗的方法和疗效，探讨手术对视功能的影响。方法应用眼眶三维影像测量方法和视觉电生理检查技术，对２２例眼眶骨折眼球内陷的猫施行眼眶重建眼球复位手术和视功能检测。结果早期手术的６只猫中，... 目的研究对眼眶骨折眼球内陷施行手术治疗的方法和疗效，探讨手术对视功能的影响。方法应用眼眶三维影像测量方法和视觉电生理检查技术，对２２例眼眶骨折眼球内陷的猫施行眼眶重建眼球复位手术和视功能检测。结果早期手术的６只猫中，５只猫的眼球内陷完全复位；晚期手术的１０只猫中，５只猫的眼球内陷完全复位，５只猫部分改善。手术治疗前后视网膜电图（ＥＲＧ）和视觉诱发电位（ＦＶＥＰ）无显著差异。结论眼眶骨折眼球内陷的手术治疗可获得较满意的疗效，早期手术的疗效优于晚期手术，眼眶重建眼球复位手术是安全可行的。 展开更多

关键词 眼眶骨折 眼球内陷 重建复位 视功能

在线阅读 下载PDF 职称材料

驼峰鼻顶端相交式截骨的整复术

17

作者 许礼根 穆雄铮 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1998年第1期73-74,共2页

介绍在鼻骨骨膜下局部剥离、截骨线在鼻根部相交的改良截骨方法,为19例驼峰鼻患者做了整形手术,效果满意。

关键词 驼峰鼻 整复术 相交式截骨 美容术

在线阅读 下载PDF 职称材料