弓形虫的分子生物学研究 被引量：20

1

作者 夏爱娣 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1994年第1期50-51,共2页

弓形虫的分子生物学研究上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室夏爱娣综述陈诗书审校弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）是寄生于人和多种动物组织细胞内的原虫。人群弓形虫感染抗体阳性率英国２０－４０％，美国５０－... 弓形虫的分子生物学研究上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室夏爱娣综述陈诗书审校弓形虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉ）是寄生于人和多种动物组织细胞内的原虫。人群弓形虫感染抗体阳性率英国２０－４０％，美国５０－６０％，法国８０－９０％［２］，我... 展开更多

关键词 弓形体 分子生物学

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^(60)Co辐射后IL-2基因修饰肿瘤细胞生物学行为的改变 被引量：4

2

作者 徐荣婷 张腾飞 +3 位作者 胡亮 历兴君 杨红英 陈诗书 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2000年第S1期10-12,24,共4页

目的研究IL - 2基因修饰人肿瘤细胞生物学行为是否因辐射而发生变化。　方法分别从细胞形态结构、MHC分子表达、整合的基因IL - 2基因是否丢失、能否保持mRNA表达、能否分泌表达生物活性的IL - 2等方面进行了实验。结果未见整合的IL - ... 目的研究IL - 2基因修饰人肿瘤细胞生物学行为是否因辐射而发生变化。　方法分别从细胞形态结构、MHC分子表达、整合的基因IL - 2基因是否丢失、能否保持mRNA表达、能否分泌表达生物活性的IL - 2等方面进行了实验。结果未见整合的IL - 2基因丢失 ,能表达IL - 2mRNA且在一定时间内持续分泌具有生物活性的IL - 2 ;细胞膜表面MHC分子无明显改变 ;细胞形态结构无明显变化。结论经60 Co辐射修饰的肿瘤细胞致瘤性消失 ,但在一定时间内能分泌IL - 2 ,这为开展基因工程“瘤苗”的临床应用提供了依据。 展开更多

关键词 IL-2基因 瘤苗 60Co辐射 致瘤性 IL-2基因转导人肿瘤细胞

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中国人群MHC—Ⅱ类抗原DR4基因体外扩增定型分析及其与类风湿关节炎相关性的研究 被引量：6

3

作者 朱乃硕 林性玉 +5 位作者 王亚新 张来仪 陈顺乐 王元 顾懿 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期155-160,共6页

本工作拟建立一种 HLA 基因组 DNA 定型方法,采用聚合酶链反应技术对所要分析的 HLA—Ⅱ DR4基因进行体外扩增,并配合等位基因特异性寡核苷酸探针对扩增产物进行分析,以确定个体是否带有该型等位基因.我们用该方法对上海地区52例正常人... 本工作拟建立一种 HLA 基因组 DNA 定型方法,采用聚合酶链反应技术对所要分析的 HLA—Ⅱ DR4基因进行体外扩增,并配合等位基因特异性寡核苷酸探针对扩增产物进行分析,以确定个体是否带有该型等位基因.我们用该方法对上海地区52例正常人及32例类风湿关节炎病人 DR4基因进行了分析,结果显示正常人 DR4基因携带者为17.3%,而类风湿关节炎病人高达43.8%(RR=3.7,P<0.01),DR4阳性的病人多为重症活动者(X^2=11.7,P<0.005).此外,我们将该方法与血清学定型方法进行了比较. 展开更多

关键词 MHC 聚合酶链反应 类风湿关节炎

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大鼠浅Ⅱ度烧伤渗液细胞原位杂交生长因子mRNA表达 被引量：5

4

作者 程枫 赵涵芳 +3 位作者 章有章 冯世杰 密磊 史济湘 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 1997年第S1期10-12,共3页

作者采用大鼠浅Ⅱ度烧伤模型，以DIG标记3’末端寡核苷酸探针对烧伤后皮肤渗出液中的单核－巨噬细胞作mRNA表达的原位杂交，观察3种生长因子在烧伤愈合过程中mRNA表达的变化，反映其在愈合过程中的作用。结果：PDGFmRNA在第3d有一个表... 作者采用大鼠浅Ⅱ度烧伤模型，以DIG标记3’末端寡核苷酸探针对烧伤后皮肤渗出液中的单核－巨噬细胞作mRNA表达的原位杂交，观察3种生长因子在烧伤愈合过程中mRNA表达的变化，反映其在愈合过程中的作用。结果：PDGFmRNA在第3d有一个表达高峰；TGF－αmRNA从6h始表达量逐渐增加，高峰出现在第10d；TGF－βmRNA在第7d出现表达高峰。结论：DIG原位杂交法对检测单个细胞内生长因子mRNA表达是一个比较好的方法，可以定量、灵敏无损伤地观察细胞生长因子基因的激活与表达，认识生长因子在烧伤愈合中的作用。 展开更多

关键词 生长因子 烧伤愈合 原位杂交 基因表达

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HLA－DRB1基因位点多态性的PCR－RFLP分析 被引量：10

5

作者 黄啸宇 王亚新 +1 位作者 王福庆 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第6期674-680,共7页

设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法，分５组特异性扩增ＤＮＡ样品，随后进行酶切定型分析，准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性，该法采用分组扩增，不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因... 设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法，分５组特异性扩增ＤＮＡ样品，随后进行酶切定型分析，准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性，该法采用分组扩增，不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增，不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品，已报道过的ＤＲＢ１位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。 展开更多

关键词 人白细胞抗原 DRB1基因 聚合酶链反应 RFLP

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人TGFβ_1cDNA高表达重组质粒的构建 被引量：2

6

作者 赵涵芳 于丽莉 +1 位作者 刘军 章有章 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1999年第3期246-248,共3页

目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1，构建人TGFβ；cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA，经RT－PCR得到TGFβ；cDNA基因，并克隆到表达质粒pBLMVL2中，构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2－TGFβ；，使其在大肠... 目的为了得到基因工程制备的人重组TGFβ1，构建人TGFβ；cDNA高表达重组质粒。方法从人血小板中提取总RNA，经RT－PCR得到TGFβ；cDNA基因，并克隆到表达质粒pBLMVL2中，构建了在PL启动控制基因表达质粒pBLMVL2－TGFβ；，使其在大肠杆菌中进行温敏诱导表达。结果RT－PCR得到的TGFβcDNA经DNA序列分析与文献报道一致，pBLMVL2－TGFβ1在大肠杆菌中表达产物人重组TGFβ1经还原型SDS－PAGE电泳，呈一条蛋白条带，分子量12．5kd，表达产物约占全菌蛋白20％。结论构建的重组质粒pBLMVL2－TGFβ1能高表达人重组TGFβ1。 展开更多

关键词 TGFΒ1 重组质粒 基因表达 构建 CDNA

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深Ⅱ度烧伤创面细胞bFGF和PDGF对愈合的影响 被引量：1

7

作者 程枫 赵涵芳 +1 位作者 方培耀 史济湘 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2001年第2期113-115,共3页

目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。　方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF... 目的研究bFGF和PDGF在深Ⅱ度烧伤愈合中的表达特点 ,以及与创面愈合中的关系。为临床合理应用外源性的bFGF和PDGF提供实验依据。　方法采用地高辛细胞原位杂交方法检测SD大鼠深Ⅱ度烫伤模型在伤后不同时段的创面渗出液细胞的bFGF和PDGF中mRNA表达变化。　结果实验组的bFGF是在 5d开始表达 ,在 7d达到高峰 ,然后缓慢下降 ,至 14d时还有一定水平的表达 ,对照组bFGF的表达水平都较低 ,仅在 5d有低水平表达 ,14d已基本无表达。在检测PDGF时 ,实验组 1～ 3d处于较低水平表达 ,7d开始高水平表达 ,10d是表达的高峰 ,随后下降。对照组PDGF的表达在 1～ 3d处于较低水平 ,5～ 14d有一个低水平的mRNA表达延迟峰段。　结论创面渗出液细胞bFGF、PDGF的mRNA表达的启动、表达的高峰和减弱与深Ⅱ度烧伤的创面愈合状况有关 ,与相关细胞在创面聚集、诱导和分泌bFGF、PDGF有关。 展开更多

关键词 BFGF PDGF 地高辛原位杂交 烧伤愈合 MRNA表达 深Ⅱ度烧伤

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人脑胶质瘤c DNA文库的构建 被引量：1

8

作者 覃文新 王尧 +4 位作者 赵涵芳 左剑玲 杜子威 章有章 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期364-367,共4页

本室曾制备得到两株单克隆抗体,分别特异地针对两种胶质瘤相关抗原-47kD和180kD的膜糖蛋白。为了阐明这两种胶质瘤相关抗原的生物化学本质及其在正常胶质细胞向恶性转化过程中可能起的作用,我们构建了一个λgtll表达型的人脑胶质瘤cDNA... 本室曾制备得到两株单克隆抗体,分别特异地针对两种胶质瘤相关抗原-47kD和180kD的膜糖蛋白。为了阐明这两种胶质瘤相关抗原的生物化学本质及其在正常胶质细胞向恶性转化过程中可能起的作用,我们构建了一个λgtll表达型的人脑胶质瘤cDNA文库,以便用上述单克隆抗体作为探针,从该文库中筛选出与之对应的胶质瘤相关抗原的cDNA克隆。现将建库工作简述于下。 展开更多

关键词 胶质瘤 CDNA 文库 构建

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弓形虫特异DNA片段顺序分析及体外基因扩增 被引量：1

9

作者 夏爱娣 王克敏 +4 位作者 顾允中 张惠民 杨惠珍 徐克继 钱宗立 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第6期748-754,共7页

从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的... 从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的弓形虫株DNA、人工感染弓形虫的三头幼猪白细胞和胸腺DNA经过PCR扩增,均出现特异的扩增条带;而正常人、正常幼猪外围血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、溶组织内阿米巴和人巨细胞病毒DNA均不出现特异的扩增条带。对扩增产物进行了Southern印迹和限制性内切酶图谱分析,证明该PCR产物是弓形虫DNA特异的顺序。该方法可测出少至1pg的弓形虫DNA或1个弓形虫体的裂解液。本文分析的DNA顺序和设计合成的引物顺序数据,经电脑DNA数据库检索,证明无相同的顺序。本方法并具有简便、快速等优点,便于推广应用。 展开更多

关键词 弓形体 顺序分析 DNA片断

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生长因子与烧伤愈合 被引量：1

10

作者 章有章 陈诗书 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1993年第2期154-158,共5页

烧伤愈合中转化生长因子及血小板生长因子的作用临床上不同程度的烧伤并不少见,战场上烧伤就更多,深度烧伤自身植皮后在供皮部位留下的也是创伤。创伤、包括烧伤、刀割伤等的愈合是一个十分复杂的过程,嗜中性粒细胞和淋巴细胞在创面聚集。

关键词 烧伤 生长因素 愈合

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聚合酶链反应技术在医学研究中的应用 被引量：1

11

作者 陈诗书 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期347-349,353,共4页

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)又称体外基因扩增方法,是八十年代中期Mullis发明的一种新分子生物学技术,它能在一根试管内,将所研究的某个目的基因或某一DNA片段在数小时内扩增百万乃至千万倍,若配合适当的限制性内切酶... 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction PCR)又称体外基因扩增方法,是八十年代中期Mullis发明的一种新分子生物学技术,它能在一根试管内,将所研究的某个目的基因或某一DNA片段在数小时内扩增百万乃至千万倍,若配合适当的限制性内切酶,毋需放射性同位素辅助就可直接分析基因的结构。只要一根毛发、一个精子。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 分子生物学 诊治技术

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用PCR检测微小病毒B19对儿童急性白血病发病的影响

12

作者 王玉龙 张惠明 +3 位作者 顾龙君 梁辉 赵惠君 顾梅榆 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期294-296,共3页

应用1％NP-40处理骨髓涂片。套式PCR扩增技术对28例儿童急性白血病患者进行微小病毒B19DNA检测。其中ALL15例,AML13例。并对阳性者同时采用免疫表型检测,结果显示5例阳性,且均为ALL患者。FAB分类5例全是L_2。免疫表型表达B-ALL3例,T-ALL... 应用1％NP-40处理骨髓涂片。套式PCR扩增技术对28例儿童急性白血病患者进行微小病毒B19DNA检测。其中ALL15例,AML13例。并对阳性者同时采用免疫表型检测,结果显示5例阳性,且均为ALL患者。FAB分类5例全是L_2。免疫表型表达B-ALL3例,T-ALL2例。提示微小病毒B19对儿童急性淋巴细胞白血病的发病具有一定影响。本文应用套式PCR技术,在骨髓涂片直接检测B 19-DNA,方法简便、特异、灵敏、不易漏诊,为临床诊断B 19感染提供了一种简便实用的实验诊断方法。 展开更多

关键词 急性白血病 微小病毒B19 PCR 骨髓细胞涂片 儿童

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采用多聚酶链反应技术直接从人群基因组DNA筛选HLA-DR_4基因

13

作者 孙欲晓 朱乃硕 +1 位作者 陈诗书 吴雪昌 《杭州大学学报（自然科学版）》 CSCD 1995年第3期322-326,共5页

本文建立了一种简易、快速的外周血DNA抽提方法,并用于多聚酶链反应(PCR),对HLA-DR_4 基因进行定型.同时与一些经血清学定型的样品进行比较,结果证实PCR方法更为可靠.对56例上海地区随机正常人DNA样品进行PCR定型,结果显示DR.阳性率为21... 本文建立了一种简易、快速的外周血DNA抽提方法,并用于多聚酶链反应(PCR),对HLA-DR_4 基因进行定型.同时与一些经血清学定型的样品进行比较,结果证实PCR方法更为可靠.对56例上海地区随机正常人DNA样品进行PCR定型,结果显示DR.阳性率为21.4%,DR_4 基因频率为0.113。 展开更多

关键词 人类白细胞抗原 多聚酶链反应 DNA

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单纯疱疹病毒的PCR直接基因分型 被引量：1

14

作者 徐文波 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第1期98-102,共5页

本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体... 本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系，在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带，ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带，据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型，３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的ＤＮＡ不产生特异反应，敏感性可达１ｆｇ。应用该法对１５１份临床可疑ＨＳＶ感染的标本进行检测并分型，结果与免疫学方法完全一致。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 单纯疱疹病毒 基因

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多等位基因PCR-SSO反相杂交法及其在HLA-DR_4亚型结构分析中的应用

15

作者 失迺硕 王亚新 陈诗书 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第3期299-303,共5页

本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用... 本文介绍一种适合于多等位基因定型和结构分析的反相顺序特异性寡核苷酸探针杂交方法。将化学合成的多种探针分别经脱氧核苷末端转移酶(TdT)催化,于3′端加上100个以上碱基的Poly(dT)尾,然后将各探针分别以斑点固定于同一张尼龙膜上。用PCR法对该基因位点进行扩增,扩增的同时加入α-^(32)P-dCTP以直接参入放射标记,然后将PCR产物与膜固定探针杂交,以四甲基氯化铵根据探针长度统一洗涤温度。该方法克服了以往对同一份样品进行多个等位基因检测时需要进行多次探针标记和杂交的缺点。我们用该方法对中国人群MHC-Ⅱ类DR4多等位基因进行了研究。 展开更多

关键词 反相杂交法 多等位基因 检测

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