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小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除
被引量：
5
1
作者
戴旭明
薛红
+3 位作者
杨桦
胡以平
傅继梁
陈竺
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第1期1-4,共4页
目的：将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因定向敲除，为建立血友病Ｂ的转基因小鼠模型奠定基础；摸索建立ＥＳ细胞基因打靶技术体系。方法：将线性化的针对小鼠ｍＦⅨ基因组的基因打靶置换型载体（ｐＭＦⅨＤＥＬ）ＤＮＡ用电...
目的：将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因定向敲除，为建立血友病Ｂ的转基因小鼠模型奠定基础；摸索建立ＥＳ细胞基因打靶技术体系。方法：将线性化的针对小鼠ｍＦⅨ基因组的基因打靶置换型载体（ｐＭＦⅨＤＥＬ）ＤＮＡ用电穿孔法转入小鼠ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，用ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交两种方法，鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况。结果：（１）从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了４个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ＥＳ细胞克隆；（２）观察到在ＥＳ细胞中，ｐＭＦⅨＤＥＬ载体ＤＮＡ与内源ｍＦⅨ基因发生同源重组的频率平均为１．６７×１０－６。结论：得到了４个ｍＦⅨ基因已被敲除的ＥＳ细胞克隆；建立了ＥＳ细胞基因打靶的技术体系。
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关键词
胚胎干细胞
基因敲除
凝血因子Ⅸ
血友病B
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题名
小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除
被引量：
5
1
作者
戴旭明
薛红
杨桦
胡以平
傅继梁
陈竺
机构
中国科学院
上海
血液学研究所
上海第二医科大学教授
出处
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第1期1-4,共4页
基金
国家自然科学基金
上海市生命科学研究中心课题
军队"九五"医药科研规划重点课题
文摘
目的：将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因定向敲除，为建立血友病Ｂ的转基因小鼠模型奠定基础；摸索建立ＥＳ细胞基因打靶技术体系。方法：将线性化的针对小鼠ｍＦⅨ基因组的基因打靶置换型载体（ｐＭＦⅨＤＥＬ）ＤＮＡ用电穿孔法转入小鼠ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，用ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交两种方法，鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况。结果：（１）从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了４个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ＥＳ细胞克隆；（２）观察到在ＥＳ细胞中，ｐＭＦⅨＤＥＬ载体ＤＮＡ与内源ｍＦⅨ基因发生同源重组的频率平均为１．６７×１０－６。结论：得到了４个ｍＦⅨ基因已被敲除的ＥＳ细胞克隆；建立了ＥＳ细胞基因打靶的技术体系。
关键词
胚胎干细胞
基因敲除
凝血因子Ⅸ
血友病B
Keywords
embryonic stem cells
gene targeting
gene knockout
coagulation factor Ⅸ
haemophilia B
分类号
R554.1 [医药卫生—血液循环系统疾病]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除
戴旭明
薛红
杨桦
胡以平
傅继梁
陈竺
《第二军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998
5
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