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抗rhNDPK-A单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:8
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作者 李雪玲 王一飞 +6 位作者 熊盛 张美英 李冰 李久香 王红 郑佐娅 王从朱 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期86-88,共3页
目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb... 目的 :研制抗rhNDPK A (recombinanthumannucleosidediphosphatekinase A)单克隆抗体 (mAb) ,并鉴定其特性。 方法 :以纯化的rhNDPK A免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗rhNDPK AmAb ;用免疫双扩散鉴定Ig亚类 ;West ernblot鉴定mAb的特异性 ;间接ELISA检测mAb的腹水效价、亲和常数 ,并进行表位分析。结果 :获得 6株可分泌特异性mAb的抗rhNDPK A的杂交瘤细胞系 2D9、8C7、13E2、15D9、15E3和 2 0D9,Ig亚类均为IgG1;其效价为 1× 10 -4~5× 10 -6;亲和常数为 4 .5× 10 -9~ 2 .8× 10 -10 mol/L ;共有3个抗原表位。结论 :获得抗rhNDPK A的mAb 。 展开更多
关键词 rhNDPK-A 单克隆抗体 特性鉴定
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纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:1
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作者 李建新 王红 +4 位作者 杭勤 郑佐娅 罗伟 李稻 王鸿利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期372-375,共4页
目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ... 目的 :制备纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (PAP)的单克隆抗体(mAb)。方法 :以从血浆中纯化的PAP免疫BALB/c小鼠。按常规方法融合 ,以固相等分子浓度的纤溶酶原、α2 抗纤溶酶(α2 AP)及PAP为抗原 ,建立间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清 ,并对杂交瘤细胞分泌的mAb的特异性和亲和力进行鉴定。结果 :共获得 2 4株可稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞。其中 ,针对PAP分子中纤溶酶结构的mAb 16株 ,针对α2 AP结构的mAb 1株 ,针对新抗原 (PAP分子中新出现的不同于前体分子纤溶酶原及α2 AP的抗原决定簇 )结构的mAb 7株。这些腹水中抗PAPmAb的滴度为 2× 10 -4~ 1× 10 -8,其中 4株mAb的亲和常数为 5 .6 2× 10 -9~ 3.5 8× 10 -11mol/L之间。结论 :成功地制备针对PAP新抗原的具有高亲和力的mAb ,为建立不受其前体分子干扰的PAP特异性检测方法 ,研究纤溶系统的激活状态提供了工具。 展开更多
关键词 PAP 单克隆抗体 新抗原
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凝血酶调节蛋白植物凝集素样片段的原核表达及抗体制备
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作者 钱高潮 王红 +7 位作者 郑佐娅 王从珠 杭勤 李卫鹏 盛慧明 高丰厚 李稻 王鸿利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期700-703,共4页
目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量... 目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量表达形成包涵体 ,将表达蛋白纯化并复性后免疫小鼠 ,3次免疫后得抗体效价为 1∶4 0 0 0 ,经加强免疫后抗体效价达到1∶80 0 0 ;特异性较好。结论 :在天然TM提取纯化困难的情况下 。 展开更多
关键词 凝血酶调节蛋白 原核表达 抗体制备 免疫小鼠 免疫后 加强免疫 抗体特异性 植物凝集素 复性 提取纯化
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分步洗脱亲和层析法快速纯化纤溶酶-α_2抗纤溶酶复合物
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作者 李建新 周芸 +3 位作者 王红 郑佐娅 李稻 王鸿利 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期355-358,共4页
为快速地获取高度纯化的纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (plasmin α2 antiplasmincomplex ,PAP) ,对其纯化方法进行了改进。将尿激酶激活的新鲜乏血小板血浆上Lysine Sepharose 4B亲和层析柱后 ,以不同成分的洗脱液分步洗脱。结果表明 ,每... 为快速地获取高度纯化的纤溶酶 α2 抗纤溶酶复合物 (plasmin α2 antiplasmincomplex ,PAP) ,对其纯化方法进行了改进。将尿激酶激活的新鲜乏血小板血浆上Lysine Sepharose 4B亲和层析柱后 ,以不同成分的洗脱液分步洗脱。结果表明 ,每 10 0ml新鲜血浆能获取纯化PAP 3.0mg ,整个纯化过程可在数小时内完成。结论 :本方法简单、快速、经济以及得率高。 展开更多
关键词 纤溶酶-a2 抗纤溶酶复合物 亲和层析 纯化 分步洗脱
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人血浆谷氨酸型纤溶酶原的检测及其临床意义
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作者 李稻 陈权 +2 位作者 王红 李建新 王鸿利 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1197-1201,共5页
目的 :探讨机体凝血和纤溶系统激活时 ,血浆中Glu -Plg(Pln)含量变化和其临床意义。方法 :利用自备的特异性针对Glu -Plg(Pln)抗原表位结构 (NH2 末端 1- 6 5aa)的单克隆抗体和针对Plg (Pln)重链区抗原表位的单克隆抗体 ,分别构建人血浆... 目的 :探讨机体凝血和纤溶系统激活时 ,血浆中Glu -Plg(Pln)含量变化和其临床意义。方法 :利用自备的特异性针对Glu -Plg(Pln)抗原表位结构 (NH2 末端 1- 6 5aa)的单克隆抗体和针对Plg (Pln)重链区抗原表位的单克隆抗体 ,分别构建人血浆Glu -Plg(Pln)和Plg(Pln)二种双抗体夹心ELISA检测方法。应用 2种检测试剂分别对2 2 0例健康者、4 0例心外科手术后患者的血浆样品进行检测。结果 :实验结果表明 :2 2 0例健康者的Plg(Pln)含量为( 2 31 8± 6 2 1)mg/L ;Glu -Plg含量为 ( 2 13 9± 4 5 8)mg/L ;G/P比值为X =0 91。而 4 0例心外科手术后患者血浆中Glu -Plg(Pln)含量 ( 15 2 4± 6 8 1)mg/L与Plg(Pln)含量 ( 2 6 8 9± 73 3)mg/L比值显著为低 (P <0 0 1) ,其中 38例G/P比值也下降到X =0 5 4。结论 :血浆Glu -Plg(Pln)含量变化可能与血浆中Pln增加正反馈地促进Lys-Plg生成有关 ,增加的Lys -Plg能加速纤维蛋白水解。本实验建立的人血浆Glu -Plg(Pln)和Plg(Pln) 展开更多
关键词 外科手术 纤溶蛋白溶酶原 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定
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睫状神经营养因子单克隆抗体制备
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作者 邓小华 周芸 +2 位作者 曾瑞云 蒋春雷 路长林 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期560-562,共3页
目的:制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor, C N T F)单克隆抗体。方法:将 C N T F免疫的 B A L B/c 小鼠脾细胞和 S P2/0 骨髓瘤细胞融合,经 3 次克隆化培养,获得... 目的:制备睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor, C N T F)单克隆抗体。方法:将 C N T F免疫的 B A L B/c 小鼠脾细胞和 S P2/0 骨髓瘤细胞融合,经 3 次克隆化培养,获得分泌 C N T F单克隆抗体的杂交瘤细胞株;然后进行体内诱生获取含大量 C N T F单克隆抗体的腹水和血清;再进行 C N T F单克隆抗体鉴定和效价测定。结果:获得5 株分泌 C N T F单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为 Ig G2a;腹水和血清中该抗体效价分别为 1∶107 ~1∶108 和 1∶106;该抗体能特异性地显示 S D大鼠脑内表达 C N T F的神经元,其中1 株单克隆抗体能抑制 C N T F促进体外培养新生 S D 大鼠骨骼肌细胞增殖的功能。结论:制备成功高效且特异的 C N T F单克隆抗体,为 C N T F结构、功能和机制的研究提供了有效工具。 展开更多
关键词 神经营养因子 单克隆抗体 CNTF
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性联无丙种球蛋白血症的Btk蛋白表达的研究 被引量:1
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作者 黄海 黄冬生 +3 位作者 洪建 沈蕾 应大明 顾友梅 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期170-172,共3页
通过对8例性联低丙球血症 (XLA)患儿Btk蛋白表达的研究 ,了解Btk蛋白表达缺陷与XLA的相关性。应用蛋白印迹技术 ,观察患儿及对照组儿童Btk蛋白表达条带分布情况 ,结果发现正常儿Btk蛋白表达正常 ,而XLA者则有Btk蛋白表达缺陷。
关键词 性联无丙种球蛋白血症 Btk蛋白血症 儿童
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