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用RT-PCR方法检测烧伤愈合时生长因子的表达 被引量:17
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作者 赵涵芳 程枫 章有章 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 1995年第S1期37-42,共6页
作者采用RT-PCR方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子TGF-α,TGF-β1及PDGF表达量的变化。实验特点有二:1.烧伤愈合时渗出液细胞总RNA用(AGPC)一步法提取;2.逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系... 作者采用RT-PCR方法检测烧伤愈合过程中细胞生长因子TGF-α,TGF-β1及PDGF表达量的变化。实验特点有二:1.烧伤愈合时渗出液细胞总RNA用(AGPC)一步法提取;2.逆转录反应后用二对引物同时在一反应体系里进行PCR反应,有助于准确检测生长因子基因表达量变化。 展开更多
关键词 RNA提取 RT-PCR 生长因子基因表达 烧伤愈合
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细胞周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌细胞迁徙的关系 被引量:5
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作者 王建华 于丽莉 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期137-143,共7页
从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印... 从基因芯片筛选出差异表达的基因中一个细胞周期蛋白 (cyclin)E2基因 ,深入研究周期蛋白E2在高转移性胃腺癌细胞系RF 4 8细胞中的生物学作用 .首先通过合成硫代磷酸化修饰的反义、正义和错配寡核苷酸片段 ,使用半定量RT PCR和Western印迹方法分别检测被 3种寡核苷酸转染的RF 4 8细胞在 1~ 5d内周期蛋白E2基因及它可能调控下游靶基因之一FGFR基因和蛋白质的表达 ,检测寡核苷酸转染的RF 4 8细胞周期和凋亡细胞 ,观察寡核苷酸转染RF 4 8细胞的软琼脂集落形成、运动能力和体外侵袭能力 .结果表明 ,修饰的反义寡核苷酸在有效地抑制RF 4 8细胞中周期蛋白E2表达上调后 ,RF 4 8细胞的迁徙能力被显著降低 ,其增殖、运动能力没有变化 .周期蛋白E2基因的主要作用并不是促细胞分裂 ,也与细胞的增殖、运动能力无关 ,周期蛋白E2基因的过度表达与胃腺癌的迁徙性存在相关性 ,其触发肿瘤的侵袭性可能通过某种机制调控其下游靶基因之一成纤维细胞生长因子受体 (FGFR) 展开更多
关键词 细胞周期 周期蛋白 E2基因 基因过表达 胃腺癌细胞 细胞迁徒 基因芯片 相关性
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荧光差异显示PCR克隆参与胃腺癌转移的基因wcl1 被引量:6
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作者 王建华 陈诗书 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期134-138,共5页
使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发... 使用来源于同一个胃腺癌病人的原发灶RF 1(ATCC编号CRL 186 4 )和转移灶RF 4 8(ATCC编号CRL 186 3)作为研究肿瘤转移的模型 .通过荧光差异显示PCR(FDD PCR)技术 ,克隆了 4 5个涉及胃腺癌转移相关基因 .和原发灶CRL 186 4相比 ,发现在转移灶CRL 186 3细胞中有 38个基因被显著上调 ,7个基因被显著下调 ,包括未被发现的基因 3个 .利用生物信息学技术对其中 1个在RF 4 8中高度上调的wcl1进行克隆和鉴定 ,发现wcl1的cDNA全长为 6 6 4bp ,含有 1个 2 4 0bp的完整阅读框 .用RT PCR和Northern印迹证实 ,结果与克隆拼接的大小完全一致 (NCBI数据库收录号AF36 4 86 3) .wcl1编码肽位于胞浆内含 79个氨基酸 ,理论上的pI Mr:5 2 8 896 1 72 .氨基酸序列分析发现 ,其N端 4~ 5 5氨基酸处为未知功能区UPF0 0 16蛋白 ,5 7~ 78处有一段亮氨酸拉链结构域 ,未发现与已知的蛋白质有高度的同源性 .该基因定位于 11q14.组织分布表明 ,wcl1除在分化差的胃腺癌中的表达要高于相应的正常胃组织 ,在微血管内皮中表达也明显高于乳腺管癌、脑纤维状星形细胞瘤 ,未检测到在其它组织有分布 .研究提示 ,Wcl1可能为胃腺癌转移过程中参与核内基因转录的相关蛋白质 . 展开更多
关键词 荧光差异显示PCR 克隆 胃腺癌转移 wcl1 转移相关基因
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中国正常人及类风湿关节炎病人MHC-Ⅱ类DR_4亚型基因核苷酸序列初步分析 被引量:2
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作者 朱乃硕 王亚新 陈诗书 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1994年第2期92-97,共6页
对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.04... 对中国人群正常人及类风湿关节炎病人DR_4亚型基因决定型别特异性的第二个外显子进行体外扩增、克隆及序列分析显示,6例正常人及3例类风湿关节炎病人存在三种DR_4亚型(DRBl0402,DRBl0405,DRBl.0406),中国人这三种亚型第二个外显子核苷酸序列与白种人一致。序列分析结果为进一步应用常规PCR-SSO法及PCR-RFLP法进行中国人DR_4基因定型提供了依据。此外,还将序列分析结果与PCR-SSO杂交分析结果进行了比较,具备较全面的覆盖各亚型多态性区域的探针可以减少等位基因同源性干扰。 展开更多
关键词 DR 基因 DNA 类风湿性 关节炎
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小儿急性白血病IgH基因重排与白血病克隆性和免疫分型的关系
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作者 潘秋炉 郭淑芬 +5 位作者 徐淑芝 沈红强 洪文澜 仇一华 陈雄伟 陈诗书 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1995年第1期51-56,共6页
选用一对免疫球蛋白重链基因V区和J区的通用引物,进行PCR检测不同类型小儿急性白血病免疫球蛋重链基因重排。33例小儿急性白血病初诊未治骨髓标本检测结果呈单克隆条带的为U-ALL3/7例,C-ALL4/6例,单/B祖双标记白血病1/3例,T-ALL1/4例,AM... 选用一对免疫球蛋白重链基因V区和J区的通用引物,进行PCR检测不同类型小儿急性白血病免疫球蛋重链基因重排。33例小儿急性白血病初诊未治骨髓标本检测结果呈单克隆条带的为U-ALL3/7例,C-ALL4/6例,单/B祖双标记白血病1/3例,T-ALL1/4例,AML1/10例。B-ALL、AMoL、髓/T双标记白血病各1例均阴性。说明免疫球蛋白重链基因重排主要见于B细胞系ALL及其与B细胞相关的双标记白血病,阳性率为47%,可以作为分析白血病细胞来源的标志之一,并辅佐基因分型。另外对20例正常人外周血单个核细胞DNA检测结果均为一片模糊,无明确条带,说明可以区分淋巴细胞系克隆增殖和反应性增生。本文尚对2例PCR产物进行DNA序列分析,结果参与重排的J区分别为J_4和J_5,DNA同源性很小,有可能设计克隆特异性引物和探针作微小残留病检测。 展开更多
关键词 急性白血病 IGH基因 聚合酶链式反应 DNA序列分析
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PCR技术在急性白血病微小残留病中的应用(综述)
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作者 潘秋炉 《浙江医科大学学报》 CSCD 1994年第6期282-284,286,共4页
PCR技术在急性白血病微小残留病中的应用(综述)浙江医科大学附属儿童医院白血病研究室潘秋炉审校洪文澜,陈诗书急性白血病(AL)经过治疗后绝大部分患者取得临床缓解,骨髓白血病细胞低于5%,不能被常规形态学检测发现,但部... PCR技术在急性白血病微小残留病中的应用(综述)浙江医科大学附属儿童医院白血病研究室潘秋炉审校洪文澜,陈诗书急性白血病(AL)经过治疗后绝大部分患者取得临床缓解,骨髓白血病细胞低于5%,不能被常规形态学检测发现,但部分病人最终仍将复发,根源来自体内残... 展开更多
关键词 白血病 微小残留病 聚合酶链反应
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