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米非司酮调控的单链鼠白介素12真核表达载体的构建及鉴定 被引量：1
1
作者 陈坚 薛绪潮 +2 位作者 方国恩 苏长青 钱其军 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第6期17-21,共5页
构建含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,在体外鉴定其调控表达效果。用PCR技术从GCp35Ep40PN质粒上获取白细胞介素12的p40和p35亚基的基因,通过2次PCR技术引入linker后得到单链白细胞介素12基因,将... 构建含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,在体外鉴定其调控表达效果。用PCR技术从GCp35Ep40PN质粒上获取白细胞介素12的p40和p35亚基的基因,通过2次PCR技术引入linker后得到单链白细胞介素12基因,将其与米非司酮诱导调控系统克隆入pDC312质粒,构建成真核表达载体pDC-RUmIL-12,通过限制性内切酶和PCR鉴定其正确性。在体外用脂质体转染法将pDC-RUmIL-12载体转染HEK293细胞株,以不同的剂量米非司酮诱导载体表达,然后用ELISA法检测培养液上清中mIL-12蛋白的含量。测序结果表明所得鼠白细胞介素-12融合单链基因序列与设计相一致。酶切分析和PCR证实载体pDC-RUmIL-12构建正确。将pDC-RUmIL-12转染HEK293细胞并经米非司酮诱导表达后,ELISA检测结果表明该载体有良好的调控能力。没有诱导剂米非司酮时,只有极少量的mIL-12蛋白表达,而加入诱导剂米非司酮后,mIL-12表达量明显增加,并在一定范围内与米非司酮剂量呈正比。成功构建了含有单链鼠白细胞介素12(mIL-12)基因,并可经米非司酮调控表达的真核载体,可用于肿瘤的基因治疗研究。 展开更多
关键词 白细胞介素-12 米非司酮 诱导表达 融合基因
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