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以钩端螺旋体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA检测试剂盒的研制与性能评测
1
作者
钱杰
杨坚
+3 位作者
张玥
张蓉
张湘燕
郭晓奎
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期459-466,共8页
目的·研制适用于检测钩端螺旋体(钩体)特异性抗体的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒,并对其性能进行评估。方法·选择我国主要致病性钩体流行株中高度保守的外膜蛋白进行原核表达,...
目的·研制适用于检测钩端螺旋体(钩体)特异性抗体的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒,并对其性能进行评估。方法·选择我国主要致病性钩体流行株中高度保守的外膜蛋白进行原核表达,将获得的重组蛋白纯化后作为包被抗原行质谱鉴定,并对其抗原性进行检测。选用40例经确诊的钩体病患者血清、50例其他感染类疾病患者血清和391例健康对照者的血清样本作为检测样本,用钩体病确诊患者血清制备试剂盒内控阳性对照品和参考品、高效价混合阳性血清,用健康对照者血清制备试剂盒内控阴性对照品和参考品,用高效价混合阳性血清制备试剂盒内控弱阳性对照品(临界参考品)及灵敏度参考品,从钩体病确诊患者血清中选择强阳性、弱阳性血清(各1份)分别作为试剂盒内控强阳性、弱阳性精密度参考品。建立间接ELISA试剂盒检测体系,优化其制备工艺及反应条件,并对该试剂盒的精密度、敏感性、特异性和稳定性等性能进行评估。结果·钩体重组外膜蛋白纯化后经质谱鉴定为目标蛋白,其作为包被抗原具有较强的抗原性。经性能评估显示,间接ELISA试剂盒的批内精密度<15%、批间精密度<20%,其敏感性为95.0%、特异性为95.0%,且在2~8℃下储存12个月后性能仍然稳定。结论·以钩体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA钩体抗体检测试剂盒的特异性、敏感性及其他性能指标均符合体外检测试剂盒性能要求,适用于临床辅助诊断、钩体病哨点监测及流行病学调查。
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关键词
钩端螺旋体
重组蛋白
间接酶联免疫吸附测定
IGG抗体
敏感度/特异度
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职称材料
题名
以钩端螺旋体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA检测试剂盒的研制与性能评测
1
作者
钱杰
杨坚
张玥
张蓉
张湘燕
郭晓奎
机构
上海
交通大学医学院免疫学与微
生物
学系
上海科新生物技术股份有限公司
上海
交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期459-466,共8页
基金
美国中华医学基金会基金(20-365)
上海交通大学科技创新专项资金融合集成创新基金(2020JCPT01)。
文摘
目的·研制适用于检测钩端螺旋体(钩体)特异性抗体的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测试剂盒,并对其性能进行评估。方法·选择我国主要致病性钩体流行株中高度保守的外膜蛋白进行原核表达,将获得的重组蛋白纯化后作为包被抗原行质谱鉴定,并对其抗原性进行检测。选用40例经确诊的钩体病患者血清、50例其他感染类疾病患者血清和391例健康对照者的血清样本作为检测样本,用钩体病确诊患者血清制备试剂盒内控阳性对照品和参考品、高效价混合阳性血清,用健康对照者血清制备试剂盒内控阴性对照品和参考品,用高效价混合阳性血清制备试剂盒内控弱阳性对照品(临界参考品)及灵敏度参考品,从钩体病确诊患者血清中选择强阳性、弱阳性血清(各1份)分别作为试剂盒内控强阳性、弱阳性精密度参考品。建立间接ELISA试剂盒检测体系,优化其制备工艺及反应条件,并对该试剂盒的精密度、敏感性、特异性和稳定性等性能进行评估。结果·钩体重组外膜蛋白纯化后经质谱鉴定为目标蛋白,其作为包被抗原具有较强的抗原性。经性能评估显示,间接ELISA试剂盒的批内精密度<15%、批间精密度<20%,其敏感性为95.0%、特异性为95.0%,且在2~8℃下储存12个月后性能仍然稳定。结论·以钩体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA钩体抗体检测试剂盒的特异性、敏感性及其他性能指标均符合体外检测试剂盒性能要求,适用于临床辅助诊断、钩体病哨点监测及流行病学调查。
关键词
钩端螺旋体
重组蛋白
间接酶联免疫吸附测定
IGG抗体
敏感度/特异度
Keywords
leptospira
recombinant protein
indirect enzyme-linked immunosorbent assay
IgG antibody
sensitivity/specificity
分类号
R3775 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
以钩端螺旋体重组蛋白为包被抗原的间接ELISA检测试剂盒的研制与性能评测
钱杰
杨坚
张玥
张蓉
张湘燕
郭晓奎
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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