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动物戊型肝炎病毒(HEV)RT-nPCR检测方法的建立及应用
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作者 张维谊 周锦萍 +2 位作者 王缦 刘健 鞠厚斌 《中国动物检疫》 CAS 2010年第11期34-35,共2页
根据戊型肝炎病毒(HEV)的4个基因亚型,寻找其保守序列ORF2,成功设计了一套以Ⅰ、Ⅳ型为主兼顾Ⅱ、Ⅲ型的通用简并引物,摸索条件,建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)的方法,扩增片段为507 bp。该方法检测所需时间... 根据戊型肝炎病毒(HEV)的4个基因亚型,寻找其保守序列ORF2,成功设计了一套以Ⅰ、Ⅳ型为主兼顾Ⅱ、Ⅲ型的通用简并引物,摸索条件,建立检测动物戊型肝炎病毒反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)的方法,扩增片段为507 bp。该方法检测所需时间为5 h,灵敏度可达10 pg,特异性强、重复性好;经优化研制了动物戊型肝炎病毒RT-nPCR检测试剂盒,保存期半年以上,该试剂盒可用于动物粪便、胆汁HEV RNA的检测。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 RT—nPCR 动物
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促甲状腺素化学发光免疫定量检测试剂盒的研制 被引量:5
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作者 王青 王缦 +2 位作者 魏东芝 陈寒柏 张黎明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期192-193,共2页
目的:研制人血清中促甲状腺素(TSH)的化学发光免疫检测试剂盒。方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH... 目的:研制人血清中促甲状腺素(TSH)的化学发光免疫检测试剂盒。方法:采用辣根过氧化物酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体(mAb),与固相包被的抗TSHα亚单位的另一mAb配对,以鲁米诺作为底物,采用两步法建立了双位点夹心法人血清TSH的化学发光免疫定量分析法。结果:该方法灵敏度为0.0788mIU/L,批内CV平均为4.7%,批间CV平均为8.4%,平均回收率为93.05%。该检测与LH、FSH和HCG无交叉反应。部分实验样品的测试结果显示该试剂与国外同类试剂(雅培architect i2000)的测定结果明显相关(r=0.984)。结论:该方法具有较高的灵敏度、重复性和准确度,与其他同类产品相比简便、快捷、成本低,适于临床检测和科研应用。 展开更多
关键词 促甲状腺激素(TSH) 化学发光免疫分析法 试剂盒
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乙肝表面抗原突变体的表达及其初步应用 被引量:3
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作者 祝长城 罗春贞 王缦 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1136-1139,共4页
目的:构建和表达乙肝表面抗原(HBsAg)突变体用于HBsAg抗原性的深入研究。方法:利用定点突变技术构建HBsAg突变体,然后转化毕赤酵母GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定转化子,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot分析,利用AxSYM ... 目的:构建和表达乙肝表面抗原(HBsAg)突变体用于HBsAg抗原性的深入研究。方法:利用定点突变技术构建HBsAg突变体,然后转化毕赤酵母GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定转化子,表达产物经SDS-PAGE分析和Western blot分析,利用AxSYM HBsAgV2(Abbott)酶免试剂盒检测重组表面抗原的活性。结果:通过序列分析确定突变体构建成功,SDS-PAGE显示突变体能在毕赤酵母中有效表达,在Western blot试验中HBsAg突变体被特异性多克隆抗体识别,相对分子质量(Mr)约为38000,AxSYM试剂盒检测结果表明HBsAg突变体具有一定生物活性。结论:利用毕赤酵母表达系统高效表达出具有一定免疫反应性的HBsAg突变体,对于目前市售试剂盒的质量控制和临床应用有较高的实用价值。 展开更多
关键词 乙肝表面抗原突变体 毕赤酵母 免疫反应性
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单克隆抗体组对重组乙肝表面抗原突变体的结合能力分析
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作者 祝长城 李基 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期202-203,206,共3页
世界卫生组织(WHO)报道,超过20亿的人曾经感染过HBV,其中有3.5亿是慢性持续感染,以及每年超过百万的慢性乙肝携带者死于肝硬化或肝癌。HBV是一种双链环状DNA病毒[4],DNA长度约为3 200 bp,是通过一RNA作为媒介进行复制的[5],主要是因为... 世界卫生组织(WHO)报道,超过20亿的人曾经感染过HBV,其中有3.5亿是慢性持续感染,以及每年超过百万的慢性乙肝携带者死于肝硬化或肝癌。HBV是一种双链环状DNA病毒[4],DNA长度约为3 200 bp,是通过一RNA作为媒介进行复制的[5],主要是因为DNA聚合酶具有的逆转录酶活性。正是由于逆转录复制的错误率较高,导致了乙肝病毒基因易发生变异,倘若发生在编码表面抗原的抗体结合部位(aa124~147)的基因发生变异,将导致部分突变的抗原对野生型抗原有高亲和力的单克隆抗体(mAb)的结合力降低。 展开更多
关键词 乙肝表面抗原突变体 高灵敏度
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