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靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤
被引量：
1
1
作者
郝瑞栋
田芳
+7 位作者
杨振莉
汪敏亮
张大挺
李彦涛
凡鹏程
吴国祥
朱学军
刘根桃
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期152-158,共7页
目的:探索通过嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)以治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的方法。方法:构建基于鼠源BCMA scFv的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体...
目的:探索通过嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)以治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的方法。方法:构建基于鼠源BCMA scFv的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体并感染健康人T细胞构建CAR-BCMA-T细胞;构建BCMA阳性细胞系A549-BCMA、A549-BCMAOFP和K562-BCMA作为靶细胞。将CAR-BCMA-T细胞与构建的靶细胞和人骨髓瘤细胞U266共孵育,CCK-8法和流式细胞术检测其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤能力。构建MM患者来源CAR-BCMA-T细胞并检测其杀伤靶细胞A549-BCMA的能力,并采用ELISA和流式细胞术检测CAR-BCMA-T细胞IFN-γ的释放水平。结果:健康人来源的CAR-BCMA-T经过11 d培养扩增300倍,阳性率达到43%;成功构建BCMA阳性靶细胞。在5:1效靶比下,CAR-BCMA-T对A549-BCMA、K562-BCMA和U266细胞的杀伤率分别在80%、60%和80%左右,显著高于对BCMA阴性细胞的杀伤率,且杀伤力与靶细胞的BCMA表达强度相关。在效靶比20:1时,MM患者来源CAR-BCMA-T细胞对靶细胞A549-BCMA的杀伤率达到95%以上,并且大量分泌IFN-γ。结论:本研究成功构建了健康人及MM患者来源的靶向BCMA的CAR-T细胞,其能够有效特异杀伤BCMA阳性的肿瘤细胞。
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关键词
B细胞成熟抗原
嵌合抗原受体
多发性骨髓瘤
Γ干扰素
杀伤功能
在线阅读
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职称材料
嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的体外构建、扩增及初步功能鉴定
2
作者
李剑
田芳
+8 位作者
姜鹏君
孔祥图
吴坚
殷婷婷
邢芸
金亮
郝瑞栋
刘根桃
朱学军
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期389-393,共5页
目的:探索一种特异性靶向CD19分子的嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的构建方法 ,并明确其体外杀伤靶细胞的效果。方法:运用分子克隆技术,将PCR获得的CD19-CAR片段构建到p CDH-GFP慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒转染供者CD3^+T细胞,...
目的:探索一种特异性靶向CD19分子的嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的构建方法 ,并明确其体外杀伤靶细胞的效果。方法:运用分子克隆技术,将PCR获得的CD19-CAR片段构建到p CDH-GFP慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒转染供者CD3^+T细胞,通过流式细胞术及PCR鉴定转染效率,并通过7-AAD染色鉴定扩增得到的CD19-CAR-T细胞体外杀伤CD19^+Ramos靶细胞的效果。结果:经慢病毒转染T细胞在体外培养10 d后,CD3^+T扩增达(78.8±23.2)倍,(58.3±5.4)%的CD3^+T细胞表达GFP,CD19-CAR-T体外杀伤CD19^+Ramos靶细胞在效靶比5∶1时效率为(57.4±9.3)%。结论:本实验成功建立了一种有效的体外构建及扩增CD19-CAR-T的方法,且具有明显靶向性,为CD19^+B细胞肿瘤临床治疗提供实验依据。
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关键词
CD19嵌合抗原受体
白血病
淋巴瘤
细胞杀伤
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职称材料
题名
靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤
被引量：
1
1
作者
郝瑞栋
田芳
杨振莉
汪敏亮
张大挺
李彦涛
凡鹏程
吴国祥
朱学军
刘根桃
机构
上海科医联创生物科技有限公司
南京中
医
药大学附属江苏省中
医
院血液
科
杭州市萧山区第一人民
医
院妇产
科
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期152-158,共7页
基金
江苏省社会发展-临床前沿技术项目(No.BE2016809)
南京市科技发展计划项目(No.201503011)
江苏省中医院院级课题(No.Y17014)~~
文摘
目的:探索通过嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞靶向B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)以治疗多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的方法。方法:构建基于鼠源BCMA scFv的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体并感染健康人T细胞构建CAR-BCMA-T细胞;构建BCMA阳性细胞系A549-BCMA、A549-BCMAOFP和K562-BCMA作为靶细胞。将CAR-BCMA-T细胞与构建的靶细胞和人骨髓瘤细胞U266共孵育,CCK-8法和流式细胞术检测其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤能力。构建MM患者来源CAR-BCMA-T细胞并检测其杀伤靶细胞A549-BCMA的能力,并采用ELISA和流式细胞术检测CAR-BCMA-T细胞IFN-γ的释放水平。结果:健康人来源的CAR-BCMA-T经过11 d培养扩增300倍,阳性率达到43%;成功构建BCMA阳性靶细胞。在5:1效靶比下,CAR-BCMA-T对A549-BCMA、K562-BCMA和U266细胞的杀伤率分别在80%、60%和80%左右,显著高于对BCMA阴性细胞的杀伤率,且杀伤力与靶细胞的BCMA表达强度相关。在效靶比20:1时,MM患者来源CAR-BCMA-T细胞对靶细胞A549-BCMA的杀伤率达到95%以上,并且大量分泌IFN-γ。结论:本研究成功构建了健康人及MM患者来源的靶向BCMA的CAR-T细胞,其能够有效特异杀伤BCMA阳性的肿瘤细胞。
关键词
B细胞成熟抗原
嵌合抗原受体
多发性骨髓瘤
Γ干扰素
杀伤功能
Keywords
B cell maturation antigen(BCMA)
chimeric antigen receptor
multiple myeloma
IFN-γ
cytotoxity
分类号
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
R733.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的体外构建、扩增及初步功能鉴定
2
作者
李剑
田芳
姜鹏君
孔祥图
吴坚
殷婷婷
邢芸
金亮
郝瑞栋
刘根桃
朱学军
机构
南京中
医
药大学附属江苏省中
医
院血液
科
中国药
科
大学生命
科
学与技术学院
南京中
医
药大学附属江苏省中
医
院中心实验室
上海科医联创生物科技有限公司
南京中
医
药大学附属江苏省中
医
院
出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第4期389-393,共5页
基金
江苏省社会发展-临床前沿技术资助项目(No.BE2016809)
南京市科技发展计划项目资助(No.201503011)
文摘
目的:探索一种特异性靶向CD19分子的嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的构建方法 ,并明确其体外杀伤靶细胞的效果。方法:运用分子克隆技术,将PCR获得的CD19-CAR片段构建到p CDH-GFP慢病毒载体上,利用包装的慢病毒颗粒转染供者CD3^+T细胞,通过流式细胞术及PCR鉴定转染效率,并通过7-AAD染色鉴定扩增得到的CD19-CAR-T细胞体外杀伤CD19^+Ramos靶细胞的效果。结果:经慢病毒转染T细胞在体外培养10 d后,CD3^+T扩增达(78.8±23.2)倍,(58.3±5.4)%的CD3^+T细胞表达GFP,CD19-CAR-T体外杀伤CD19^+Ramos靶细胞在效靶比5∶1时效率为(57.4±9.3)%。结论:本实验成功建立了一种有效的体外构建及扩增CD19-CAR-T的方法,且具有明显靶向性,为CD19^+B细胞肿瘤临床治疗提供实验依据。
关键词
CD19嵌合抗原受体
白血病
淋巴瘤
细胞杀伤
Keywords
CD 19 chimeric antigen receptor
leukemia
lymphoma
cytotoxicity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
R730.51 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤
郝瑞栋
田芳
杨振莉
汪敏亮
张大挺
李彦涛
凡鹏程
吴国祥
朱学军
刘根桃
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的体外构建、扩增及初步功能鉴定
李剑
田芳
姜鹏君
孔祥图
吴坚
殷婷婷
邢芸
金亮
郝瑞栋
刘根桃
朱学军
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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职称材料
已选择
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