生物技术药物免疫原性检测中改善药物耐受研究进展 被引量：4

1

作者 陈沛卓 洛文靖 +1 位作者 程远国 任欣怡 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期72-76,共5页

随着大量生物技术药物的研发,生物技术药物的评价越来越受到重视。与传统小分子药物不同,生物技术药物在体内产生的抗药抗体(ADA)可能会中和药物的活性,造成在非临床和临床研究中观察到的效应并非药物真正的药理和毒性反应,因此需要对... 随着大量生物技术药物的研发,生物技术药物的评价越来越受到重视。与传统小分子药物不同,生物技术药物在体内产生的抗药抗体(ADA)可能会中和药物的活性,造成在非临床和临床研究中观察到的效应并非药物真正的药理和毒性反应,因此需要对药物的免疫原性进行评价。通过检测ADA可评价药物的免疫原性。检测ADA的主要干扰物质为药物本身。目前,最广泛使用的桥联ELISA无法检测药物-ADA复合物,会导致假阴性结果,影响检测的准确度。药物耐受作为免疫原性检测方法学验证中的一项重要指标,应尽可能减少游离药物的干扰,客观反映体内ADA水平。因此,恰当的样品前处理是测定结果准确性的关键。目前已报道的前处理方法有液相ELISA、酸处理、沉淀与酸解离、磁珠提取与酸解离和磁珠提取与热解离等,这些方法均有助于减少药物干扰,改善药物耐受。 展开更多

关键词 生物技术药物 免疫原性 抗药抗体 耐药性

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非临床生物技术药物免疫原性分析方法学验证的探讨 被引量：2

2

作者 任欣怡 朱晰 +4 位作者 张代超 陈探 程远国 赵小平 车津晶 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期902-906,共5页

免疫原性是影响生物技术药物安全性和有效性的重要因素。近年来,关于生物技术药物的免疫原性评价越来越受到重视,但国内仍缺乏免疫原性评价相关的指导原则,可供参考的资料较少。因此,在药物研发和评价过程中,各单位进行免疫原性评价的... 免疫原性是影响生物技术药物安全性和有效性的重要因素。近年来,关于生物技术药物的免疫原性评价越来越受到重视,但国内仍缺乏免疫原性评价相关的指导原则,可供参考的资料较少。因此,在药物研发和评价过程中,各单位进行免疫原性评价的方法和操作方式都不尽相同。本文参考了美国食品药品监督管理局和欧盟药物管理局最新的相关指导原则和国外业内的一些白皮书,结合本单位的相关经验,对非临床生物技术药物免疫原性分析的检测步骤,自然样本群的选择,对照样本的选择,临界值的计算及其他如灵敏度、特异性、选择性、精密度的确定和生物类似药免疫原性对比等进行探讨。 展开更多

关键词 免疫原性 生物技术药物 方法学验证

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应用于彗星试验的新型技术研究进展

3

作者 王敬亭 周长慧 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2020年第6期474-480,共7页

彗星试验是一种用途广泛的检测方法,可检测到由于衰老、疾病和暴露导致的各种生物体、组织和细胞类型的DNA损伤。为满足遗传毒性检测简单、快速、高通量和更好预测化合物在体内作用的需求,彗星试验正作为一种遗传毒性测试工具进一步升级... 彗星试验是一种用途广泛的检测方法,可检测到由于衰老、疾病和暴露导致的各种生物体、组织和细胞类型的DNA损伤。为满足遗传毒性检测简单、快速、高通量和更好预测化合物在体内作用的需求,彗星试验正作为一种遗传毒性测试工具进一步升级,如将彗星试验各个步骤优化并集成到一组彗星芯片平台中,开发出一种简单和快速的彗星试验方法;使用更接近人体细胞的三维(3D)组织模型(3D皮肤模型、3D肝模型、3D气道模型和3D重建眼角膜上皮模型)降低体外检测的假阳性率;开发新型的人源化动物模型,减少不同物种带来试验结果的差异,提高预测化合物对人体遗传毒性的能力。随着细胞生物学、医学和材料科学领域的发展,彗星试验技术将持续改进,使其更广泛、更有效地应用于药物、化妆品、环境和生态等领域的遗传毒性评价和研究。 展开更多

关键词 彗星试验 彗星芯片 三维组织 人肝细胞嵌合小鼠

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可溶性靶点分子对生物制品抗药抗体桥连法检测的挑战和应对策略

4

作者 邵雪 洛文靖 +3 位作者 王海学 王庆利 任欣怡 宫新江 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第11期1007-1012,共6页

生物制品进入机体后可能诱导免疫应答,产生抗药抗体(ADA)。开发灵敏度高、特异性强的ADA检测方法是免疫原性评价的基础,其中桥连法应用最广。桥连法检测易受多种因素影响,其中可溶性靶点分子对ADA检测的影响会因其存在形式、基线水平、... 生物制品进入机体后可能诱导免疫应答,产生抗药抗体(ADA)。开发灵敏度高、特异性强的ADA检测方法是免疫原性评价的基础,其中桥连法应用最广。桥连法检测易受多种因素影响,其中可溶性靶点分子对ADA检测的影响会因其存在形式、基线水平、给药导致的浓度改变或代偿性变化等而产生差异,引起假阳性或假阴性结果,进而影响药物免疫原性风险的评估。本文重点讨论ADA检测中可溶性靶点分子的潜在干扰及其应对策略,以期为ADA检测方法开发提供一定参考。 展开更多

关键词 可溶性靶点 抗药抗体 免疫原性

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基于4%中性甲醛固定肝组织的大鼠肝微核实验方法的建立与验证 被引量：1

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作者 赵田田 何伟伟 +3 位作者 周长慧 赵泽浩 杨紫轩 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第6期436-444,共9页

目的建立并验证基于4%中性甲醛固定肝组织制备肝细胞的大鼠肝微核实验(LMNT)方法(甲醛固定-LMNT法)。方法(1)SD大鼠分为雌性和雄性组,然后分别随机分为溶剂对照组和肝微核阳性化合物N-亚硝基二乙胺(DEN)12.5 mg·kg^(-1)组,每组5只... 目的建立并验证基于4%中性甲醛固定肝组织制备肝细胞的大鼠肝微核实验(LMNT)方法(甲醛固定-LMNT法)。方法(1)SD大鼠分为雌性和雄性组,然后分别随机分为溶剂对照组和肝微核阳性化合物N-亚硝基二乙胺(DEN)12.5 mg·kg^(-1)组,每组5只,分别ig给予生理盐水和DEN,每天1次,连续14 d后取肝组织,同时用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法检测微核化肝细胞数量和处于有丝分裂期肝细胞数,分别计算肝细胞微核率和有丝分裂指数,肝细胞微核率>0.07%判定为阳性结果。(2)雄性SD大鼠分为喹啉(30,60和120 mg·kg^(-1))组、N-亚硝基吡咯烷(NPYR,25,50和100 mg·kg^(-1))组、各自溶剂对照组(NPYR,去离子水;喹啉,玉米油)及阳性对照DEN(12.5 mg·kg^(-1))组,每组5~6只,连续ig 15 d。每日记录体重,实验结束取肝记录肝总重,计算肝系数。自动生化分析仪检测肝功能相关血清生化指标谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性和血清总胆红素(T-BIL)、直接胆红素(D-BIL)的水平。采用胶原酶消化-LMNT法和甲醛固定-LMNT法测定肝细胞微核率,用外周血微核实验和肝彗星实验评价喹啉和NPYR遗传毒性。结果(1)与各自溶剂对照组的肝细胞微核率(0.069%和0.030%)相比,甲醛固定-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.10%,雌性大鼠为0.82%,均显著升高(P<0.05);与各自溶剂对照组(0.060%和0.030%)相比,胶原酶消化法-LMNT法测得的DEN组雄性大鼠肝细胞微核率为1.45%,雌性大鼠为0.46%,均显著升高(P<0.05),判定为阳性。2种方法中雄性大鼠的肝细胞微核率均显著高于雌性(P<0.05)。与各自溶剂对照组相比,2种方法测得的DEN组雄性和雌性大鼠肝细胞有丝分裂指数均无明显差异。(2)与溶剂对照组相比,NPYR 50和100 mg·kg^(-1)组大鼠体重在ig第7~14天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第8~14天显著降低(P<0.01);喹啉120 mg·kg^(-1)组大鼠在ig第4~14天显著降低(P<0.01),DEN组在ig第10~14天显著降低(P<0.05)。与溶剂对照组相比,NPYR 100 mg·kg^(-1)组(P<0.01)和DEN组(P<0.05)的肝重和肝系数均显著降低;喹啉60和120 mg·kg^(-1)组肝重(P<0.01)和肝系数(P<0.05)均显著增加。与溶剂对照组相比,DEN组大鼠血清T-BIL水平显著升高(P<0.01),NPYR 100 mg·kg^(-1)组GPT、GOT活性和D-BIL、T-BIL水平均显著升高(P<0.01),NPYR 25,50 mg·kg^(-1)和喹啉各剂量组则均无显著差异。甲醛固定-LMNT法测得的NPYR组肝细胞微核率较胶原酶消化-LMNT法略高,均判定为阳性;与溶剂对照组相比,2种方法测得的NPYR组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05),喹啉组结果相当,均判定为阳性;2种方法测得的喹啉组肝细胞微核率均显著增加(P<0.05)。2种方法测得的NPYR和喹啉组肝细胞微核率相关性较好(R2分别为0.8614和0.9279)。NPYR组外周血微核实验为阴性,彗星实验结果为阳性;喹啉组外周血微核实验和彗星实验结果均为阴性。结论初步建立并验证了甲醛固定-LMNT法,且该方法检测肝致癌物的灵敏度与胶原酶-LMNT法相近。 展开更多

关键词 肝微核实验 甲醛固定 胶原酶消化

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病毒载体遗传毒性评价方法研究进展

6

作者 何伟伟 周长慧 +5 位作者 郑明岚 李嫚琪 崔文腾 方雅励 王晓炜 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第4期314-320,共7页

随着基因治疗产品逐渐进入市场,迫切需要建立病毒载体介导的遗传毒性评价方法。目前应用广泛的病毒载体主要有2种:慢病毒载体和腺相关病毒载体。慢病毒载体能够稳定整合到宿主基因组中;而腺相关病毒载体基因组在宿主细胞核中主要以附加... 随着基因治疗产品逐渐进入市场,迫切需要建立病毒载体介导的遗传毒性评价方法。目前应用广泛的病毒载体主要有2种:慢病毒载体和腺相关病毒载体。慢病毒载体能够稳定整合到宿主基因组中;而腺相关病毒载体基因组在宿主细胞核中主要以附加体形式存在,仍能以低频率随机整合到宿主细胞基因组中,其整合方式包括随机整合和靶向整合。本文对已有的病毒载体介导的遗传毒性评价方法,包括脱靶修饰的全基因组分析、整合位点分析、核型分析和评估细胞转化潜力试验等进行综述,并对建立准确快速的病毒载体介导的遗传毒性的评价体系予以展望,以期为进一步完善和研发新的病毒载体遗传毒性评价方法提供参考。 展开更多

关键词 基因治疗 病毒载体 整合 遗传毒性

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循环miR⁃124作为铅神经毒性标志物的灵敏性、稳定性和组织特异性研究

7

作者 周慧 王雁 +3 位作者 李华 汪溪洁 陈华英 马璟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2024年第2期154-161,共8页

目的:验证循环微小核糖核酸(microRNA,miRNA)⁃124的稳定性、组织特异性及其检测铅神经毒性的灵敏性,为循环miR⁃124用于铅神经毒性评价提供依据。方法:采用Zea⁃Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,采集血液样本离心、分装后立即检测... 目的:验证循环微小核糖核酸(microRNA,miRNA)⁃124的稳定性、组织特异性及其检测铅神经毒性的灵敏性,为循环miR⁃124用于铅神经毒性评价提供依据。方法:采用Zea⁃Longa线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,采集血液样本离心、分装后立即检测或在室温、2~8℃和-70~-90℃条件下储存不同时间后,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real⁃time polymerase chain reaction,RT⁃qPCR)检测miR⁃124的表达;分别使用对乙酰氨基酚(1250 mg/kg)、异丙肾上腺素(2.5 mg/kg)和庆大霉素(80 mg/kg)建立大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型,采集血液样本检测并比较造模前后循环miR⁃124的变化;使用醋酸铅(300、600 mg/kg)建立大鼠神经毒性模型,采用酶联免疫吸附测定方法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测白细胞介素(interleukin,IL)⁃10、IL⁃1β和肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factorα,TNF⁃α)的变化,比较检测到细胞因子和循环miR⁃124含量变化的时间评估其灵敏性。结果:以新鲜血液样本作为对照,血液样本室温保存6 h,2~8℃保存24 h,-70~-90℃保存36 d以及3次冻融后循环miR⁃124仍保持稳定,稳定性可以支持实验室需求;循环miR⁃124在大鼠肝毒性、心脏毒性和肾毒性模型中均无明显改变,具有良好的组织特异性;与细胞因子相比,循环miR⁃124可以更灵敏地检测铅暴露引起的神经炎症。结论:循环miR⁃124具有良好的稳定性、组织特异性和灵敏性,可作为评价铅神经毒性的潜在的生物标志物。 展开更多

关键词 循环miR⁃124 生物标志物验证 灵敏性 稳定性 组织特异性

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新药非临床安全药理学研究进展 被引量：8

8

作者 郭健敏 许彦芳 +20 位作者 马玉奎 胡晓敏 黄芳华 扈正桃 宫丽崑 姜德建 张立将 张雪峰 蔡青 汤纳平 宗英 苏筱琳 张文强 陆兢 赵斌 聂昕 蒙飞彪 杨威 王三龙 陆国才 汪巨峰 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2019年第12期1013-1025,共13页

安全药理学是新药非临床研究的重要组成部分,主要是研究药物剂量≥治疗剂量时,潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响。近年来,随着分子生物学和生物技术等的进步,安全药理学的研究内容和研究范围有了较大的拓展。本文从国际国内安全... 安全药理学是新药非临床研究的重要组成部分,主要是研究药物剂量≥治疗剂量时,潜在的不期望出现的对生理功能的不良影响。近年来,随着分子生物学和生物技术等的进步,安全药理学的研究内容和研究范围有了较大的拓展。本文从国际国内安全药理学指导原则要求和修订,到中枢神经系统、心血管系统和呼吸系统安全药理及补充安全药理(胃肠道系统、泌尿系统、血液系统和肝胆系统)等方面,全面综述了新药非临床安全药理学研究进展。 展开更多

关键词 安全药理学 指导原则 中枢神经系统 心血管系统 呼吸系统

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雷公藤甲素生殖毒性及其防治策略研究进展 被引量：8

9

作者 李英奇 王恒 +3 位作者 李嫚琪 杨紫轩 许瀚林 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第2期155-160,共6页

雷公藤甲素是传统中药雷公藤中最主要的生物活性成分,具有抗癌、抗炎和免疫抑制等功效,临床上用于治疗肿瘤,类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等自身免疫疾病。然而,雷公藤甲素具有严重的生殖毒性,会造成精子数量减少和活力下降,直接损伤... 雷公藤甲素是传统中药雷公藤中最主要的生物活性成分,具有抗癌、抗炎和免疫抑制等功效,临床上用于治疗肿瘤,类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等自身免疫疾病。然而,雷公藤甲素具有严重的生殖毒性,会造成精子数量减少和活力下降,直接损伤睾丸、卵巢和子宫等,其毒性机制主要与氧化应激、线粒体损伤,及乳腺癌耐药蛋白、过氧化物酶体增殖物激活受体和半胱氨酸蛋白酶3等蛋白表达异常及支持细胞、间质细胞、生精上皮细胞、线粒体和溶酶体等中的标志酶活力下降相关。可通过雷公藤甲素毒性缓解药物、化学结构修饰和新型递药系统等方式缓解雷公藤甲素的生殖毒性。本文主要对雷公藤甲素的生殖毒性、毒性机制及缓解措施的最新研究进展进行综述,为其临床合理应用提供依据。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 生殖毒性 作用机制 缓解措施

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背根神经节在药物神经毒性体外评价中的应用 被引量：4

10

作者 王美婷 赵琪 +2 位作者 张艺哲 邢红艳 汪溪洁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期305-311,共7页

背根神经节神经元是感觉信息的初级传入神经元,可接收周围感觉神经末梢传出的信号,整合后将其传递至脊髓。抗肿瘤药和麻醉药等可损害背根神经节神经元的胞体和轴突,导致感觉信息传导异常,从而产生神经毒性。背根神经节体外模型来源广泛... 背根神经节神经元是感觉信息的初级传入神经元,可接收周围感觉神经末梢传出的信号,整合后将其传递至脊髓。抗肿瘤药和麻醉药等可损害背根神经节神经元的胞体和轴突,导致感觉信息传导异常,从而产生神经毒性。背根神经节体外模型来源广泛,来源于人多能干细胞和成纤维细胞的背根神经节神经元是近年的研究热点,且在多种药物的神经毒性评价、高通量筛选和机制研究中具有广阔的应用前景。本文对背根神经节的体外模型来源及其在药物神经毒性体外评价中的应用予以综述。 展开更多

关键词 神经毒性 背根神经节 感觉神经元 人多能干细胞 抗肿瘤药

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青光眼动物模型在青光眼研究中的应用 被引量：5

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作者 宋硕 孟永 李华 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1850-1855,共6页

青光眼是一种常见的神经退行性疾病,发病机制复杂,严重威胁人类眼健康。青光眼动物模型的建立为该疾病的发生、发展及干预措施提供了研究基础。文章在对青光眼进行简单介绍的基础上,从自发产生和人为诱导青光眼动物模型两个角度,对当前... 青光眼是一种常见的神经退行性疾病,发病机制复杂,严重威胁人类眼健康。青光眼动物模型的建立为该疾病的发生、发展及干预措施提供了研究基础。文章在对青光眼进行简单介绍的基础上,从自发产生和人为诱导青光眼动物模型两个角度,对当前青光眼动物模型的构建方法进行了叙述。一种青光眼动物模型只能模拟某一类型青光眼或青光眼某一方面的病理改变,因此,应根据不同试验需求,选择合理的动物模型。随着生物技术、基础科学研究的进展,以及对青光眼发病机制的深入理解,将有望进一步改进现有模型或开发新的诱导机制来克服目前的局限性,使我们在未来能更好地理解和干预青光眼的发生发展。 展开更多

关键词 青光眼 动物模型 眼压

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纳米氧化铁的遗传毒性及其机制研究进展 被引量：3

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作者 赵泽浩 赵田田 +3 位作者 王敬亭 周长慧 朱海美 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第8期634-640,共7页

随着纳米材料的广泛应用,其生物安全性日益受到重视。其中,纳米氧化铁是应用较为广泛的医用纳米材料之一。研究显示,纳米氧化铁粒子会在细胞、亚细胞和分子生物学水平(如基因和蛋白水平)造成遗传损伤,其遗传毒性的潜在机制为进入细胞核... 随着纳米材料的广泛应用,其生物安全性日益受到重视。其中,纳米氧化铁是应用较为广泛的医用纳米材料之一。研究显示,纳米氧化铁粒子会在细胞、亚细胞和分子生物学水平(如基因和蛋白水平)造成遗传损伤,其遗传毒性的潜在机制为进入细胞核后直接与DNA相互作用,引起DNA损伤。此外,还可通过氧化还原反应诱导活性氧产生,通过活性氧诱发DNA氧化损伤。本文简要介绍纳米氧化铁的分类及制备方法,并以常用的纳米零价铁和超顺磁纳米氧化铁为例,介绍纳米氧化铁的遗传毒性研究进展及潜在的致毒机制。 展开更多

关键词 纳米氧化铁 纳米零价铁 超顺磁纳米氧化铁 遗传毒性 纳米材料

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细胞治疗产品非临床活体示踪方法研究进展 被引量：3

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作者 王舒哲 许波华 +2 位作者 王雁 黄芳华 邱云良 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期624-631,共8页

细胞治疗作为肿瘤学研究和临床实践中的新型疗法,通过修复受损组织或替换身体缺陷细胞,在多种疾病治疗中发挥着越来越重要的作用。但对细胞治疗产品治疗疾病的机制和细胞移植后的宿主体内的分布和迁移情况并不非常清楚。细胞治疗产品的... 细胞治疗作为肿瘤学研究和临床实践中的新型疗法,通过修复受损组织或替换身体缺陷细胞,在多种疾病治疗中发挥着越来越重要的作用。但对细胞治疗产品治疗疾病的机制和细胞移植后的宿主体内的分布和迁移情况并不非常清楚。细胞治疗产品的组织分布和存续时间是影响其有效性和安全性的重要因素,需进行动态观察。目前可选择的示踪技术包括影像学、聚合酶链反应(PCR)和免疫组织化学等技术。PCR技术和免疫组织化学技术的缺点是需要在细胞移植后处死动物,取出相应组织进行检测,存在一定的局限性。随着影像学技术的发展,正电子发射计算机断层成像、单光子发射计算机断层成像、磁共振成像和光学成像等手段为细胞移植后无创和实时评估移植细胞的分布、迁移和归巢提供了新选择。近年来,已有大量关于细胞非临床无创性示踪方法的研究。本综述主要对细胞非临床活体示踪方法的研究进展进行综述,从而为细胞治疗产品的组织分布、迁移和归巢研究提供参考。 展开更多

关键词 细胞治疗 细胞标记 活体示踪 细胞分布 细胞迁移

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放射性治疗药物的非临床安全性评价策略探讨 被引量：3

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作者 杜春燕 赵琪 +3 位作者 张艺哲 邢红艳 李华 汪溪洁 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期951-960,共10页

放射性治疗药物结构复杂,同时具有放射性、靶向性以及辐射损伤风险等,因此其非临床安全性评价应根据药物的组成结构,遵循具体问题具体分析的原则开展。本综述结合美国食品药物管理局、欧洲药品管理局颁布的放射性治疗药物相关指导原则... 放射性治疗药物结构复杂,同时具有放射性、靶向性以及辐射损伤风险等,因此其非临床安全性评价应根据药物的组成结构,遵循具体问题具体分析的原则开展。本综述结合美国食品药物管理局、欧洲药品管理局颁布的放射性治疗药物相关指导原则以及《支持药物进行临床试验和上市的非临床安全性研究指导原则》,总结放射性治疗药物非临床安全性评价中药动学-毒动学、安全药理学、单次给药毒性试验、重复给药毒性试验、遗传毒性、生殖毒性、致癌性以及迟发毒性研究中需考虑的试验要点,并结合已上市的4种放射性治疗药物已开展的非临床安全性评价试验探讨放射性治疗药物的非临床安全性评价策略,为我国开展放射性治疗药物的非临床安全性评价提供参考。 展开更多

关键词 放射性治疗药物 安全性评价 非临床 药物毒性

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纳米银颗粒及纳米二氧化钛颗粒的体外遗传毒性研究 被引量：2

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作者 朱海美 黄鹏程 +6 位作者 赵田田 周长慧 李若婉 于春荣 陈志勇 顾林峰 常艳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1192-1200,共9页

纳米物质以其独特的物理性质广泛用于化妆品、医药和食品工业,但它们的安全性和遗传毒性仍然存在争议。本研究拟采用基于人成淋巴TK6细胞的体外彗星实验整合体外PIG-A基因突变实验对纳米银颗粒(AgNPs)和纳米二氧化钛颗粒(TiO2NPs)的致DN... 纳米物质以其独特的物理性质广泛用于化妆品、医药和食品工业,但它们的安全性和遗传毒性仍然存在争议。本研究拟采用基于人成淋巴TK6细胞的体外彗星实验整合体外PIG-A基因突变实验对纳米银颗粒(AgNPs)和纳米二氧化钛颗粒(TiO2NPs)的致DNA断裂作用和致突变性进行初步研究。本研究探究了最高至200μmol/L浓度时,TK6细胞暴露于两种纳米物质4 h时的彗星实验和经过暴露24 h以及10 d基因突变表达期后的PIG-A基因突变结果。同时,本研究还检测了TK6细胞暴露于纳米颗粒4 h及24 h对纳米物质的摄取能力。在纳米物质摄取实验中,随着纳米物质浓度的升高,TK6细胞在流式细胞仪检测图中的侧向散射角(side scatter,SSC)呈现浓度与时间依赖性升高,表明TK6细胞可摄取两种纳米颗粒。在4 h彗星实验中,AgNPs可导致彗星尾DNA荧光%强度呈现浓度依赖性显著升高,为阳性结果。而TiO2NPs则不能诱导彗星尾DNA荧光%强度呈现浓度依赖性显著升高,但最高浓度组尾DNA荧光%超过本实验室阴性历史对照数据,为可疑结果。而在体外PIG-A基因突变实验结果中,AgNPs和TiO2NPs均不能诱导TK6细胞的PIG-A基因突变率出现阳性升高。AgNPs可导致TK6细胞出现DNA损伤,但不能诱导PIG-A基因突变率升高。TiO2NPs既不能诱导TK6细胞出现DNA损伤,也不能诱导PIG-A基因突变率升高,TiO2NPs的遗传毒性有待进一步验证。 展开更多

关键词 纳米银颗粒 纳米二氧化钛颗粒 彗星实验 PIG-A基因突变实验 遗传毒性

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3D肝细胞遗传毒性检测方法的建立 被引量：1

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作者 王敬亭 赵田田 +5 位作者 赵泽浩 周长慧 李嫚琪 杨紫轩 何伟伟 常艳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期949-955,共7页

目的采用人源化肝细胞HepG2细胞与3D细胞培养技术在体外建立3D肝细胞模型,用不同的模式化合物分别建立3D肝细胞微核组学试验方法(cytokinesis-block micronucleus cytome,CBMN-cyt)及3D肝细胞彗星试验方法。方法采用无支架培养方式,选... 目的采用人源化肝细胞HepG2细胞与3D细胞培养技术在体外建立3D肝细胞模型,用不同的模式化合物分别建立3D肝细胞微核组学试验方法(cytokinesis-block micronucleus cytome,CBMN-cyt)及3D肝细胞彗星试验方法。方法采用无支架培养方式,选取球体外观、球体内部细胞存活率、Ⅰ和Ⅱ相代谢酶基因表达及肝脏特异性生物标志物表达作为检测指标评估球体生长特性,确定3D肝细胞球体最佳培养条件,并探索3D肝细胞模型用于体外微核组学试验和体外彗星试验的适用性。结果3D肝细胞模型的最佳培养条件为5×10^(3)个细胞/20μL/滴接种,培养7 d。采用体内外微核阳性化合物丝裂霉素C(mitomycin C,MMC)初步建立了3D肝细胞微核组学方法,可成功检测出MMC的遗传毒性和细胞毒性;与2D肝细胞模型结果对比,3D肝细胞模型在检测微核和核芽时具有更高的灵敏度。采用已知体内外彗星试验阳性化合物甲基磺酸甲酯(methyl methanesulfonate,MMS)建立了3D肝细胞彗星试验方法,MMS在低细胞毒性下可使3D肝细胞的尾DNA%显著性增加,且3D肝细胞模型对MMS遗传毒性检测灵敏度高于2D细胞。结论建立的3D肝细胞模型操作简单,成本低廉,并在体外微核试验和彗星试验中表现出较好的灵敏度和特异性,提示3D肝细胞遗传毒性试验方法在早期药物的遗传毒性筛选和追加试验研究中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 遗传毒性 3D培养 肝细胞 彗星试验 微核细胞组学试验 HEPG2细胞

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9种不同心血管风险的临床药物对hERG钾通道的作用 被引量：1

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作者 孙红云 邢红艳 +4 位作者 赵琪 王淑颜 宋征 李华 汪溪洁 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-9,共9页

目的:在GLP实验室评估膜片钳检测临床用药物对hERG(human ether-à-go-go related gene)钾通道作用的差异性和重复性,研究9种致尖端扭转型室速(TdP)风险的临床用药物(高风险临床用药物:苄普地尔、奎尼丁、索他洛尔;中风险临床用药物... 目的:在GLP实验室评估膜片钳检测临床用药物对hERG(human ether-à-go-go related gene)钾通道作用的差异性和重复性,研究9种致尖端扭转型室速(TdP)风险的临床用药物(高风险临床用药物:苄普地尔、奎尼丁、索他洛尔;中风险临床用药物:昂丹司琼、西沙比利、特非那定;低风险临床用药物:雷诺嗪、维拉帕米和美西律)对hERG钾通道的阻断作用。方法:采用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的苄普地尔、奎尼丁、索他洛尔、昂丹司琼、西沙比利、特非那定、雷诺嗪、维拉帕米和美西律作用于外源稳定转染表达hERG钾通道的HEK293细胞(hERG-HEK293稳态细胞)后hERG电流(IKr)的变化,研究上述临床用药物对IKr作用的浓度依赖性及半数抑制浓度(IC50)。结果:9种临床用药物对hERG-HEK293细胞上IKr作用具有浓度依赖性,且高风险临床用药物苄普地尔和奎尼丁的IC50值分别为98.32 nmol/L和1.95μmol/L,索他洛尔的IC50值大于300μmol/L;中风险临床用药物昂丹司琼、西沙比利和特非那定的IC50值分别为0.94μmol/L、39.10 nmol/L和128.58 nmol/L;低风险临床用药物雷诺嗪、维拉帕米和美西律的IC50值分别为9.94μmol/L、235.49 nmol/L和65.56μmol/L。本实验所得临床用药物IC50值基本与文献相符。结论:临床用药物致TdP风险与hERG通道的阻滞作用密切相关,但hERG通道阻断不等同于TdP风险,还与心脏上表达的多种离子通道有关,某些临床用药物可以通过阻断钠通道和钙通道而降低风险。本研究结果提示本方法所得数据可靠,为国内GLP实验室进行hERG钾通道评价研究提供了参考依据,可用于药物心脏毒性评价。 展开更多

关键词 药物验证 尖端扭转型室速 HERG钾通道 全细胞膜片钳

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来曲唑对幼年动物的发育毒性及机制研究进展 被引量：1

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作者 付莉莉 魏丽萍 +3 位作者 刘楚乔 陶巧玉 张鹏 邱云良 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第12期959-965,共7页

第三代非甾体芳香化酶抑制剂来曲唑已被批准用于治疗乳腺癌。近年来,其被应用于儿童生长发育领域,如儿童矮小症、体质性青春期生长发育延迟及性早熟等疾病,但其对肝、肾功能,脂质代谢,生殖功能及骨代谢的长期影响尚不清楚。研究表明,来... 第三代非甾体芳香化酶抑制剂来曲唑已被批准用于治疗乳腺癌。近年来,其被应用于儿童生长发育领域,如儿童矮小症、体质性青春期生长发育延迟及性早熟等疾病,但其对肝、肾功能,脂质代谢,生殖功能及骨代谢的长期影响尚不清楚。研究表明,来曲唑可引起睾丸形态异常、生精小管及间质组织改变;还可降低骨密度,对骨代谢的平衡造成影响。此外,还会造成认知功能损伤和神经细胞凋亡。来曲唑的生殖系统毒性机制可能与其影响睾丸细胞的发育成熟、体内性激素和促性腺激素表达以及睾丸组织中雌激素受体的表达和分布有关;骨代谢毒性机制与其增加NF-κB受体活化因子配体诱导破骨细胞增殖和分化,及增加成骨细胞凋亡、氧化应激和NF-κB活性有关;认知功能毒性机制与其调节海马经典及非经典效应、降低星形胶质细胞对谷氨酸的吸收、减少L型钙通道阻滞胱天蛋白酶3活化有关。本文以期为临床儿科安全有效地使用来曲唑提供参考。 展开更多

关键词 来曲唑 芳香化酶抑制剂 幼年动物 发育毒性

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一种体外多终点遗传毒性检测方法

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作者 黄鹏程 王敬亭 +6 位作者 赵田田 赵泽浩 周长慧 李若婉 朱春梅 郑阳 常艳 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期201-210,共10页

目的建立一种操作简单、快速和准确的体外多终点遗传毒性检测方法。方法将组蛋白γ-H2AX、P53蛋白、磷酸化组蛋白H3(p-H3)以及活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)4个生物标志物整合到γ-H2AX灶点试验中。DNA断裂剂依托泊苷(未加S9条件下,... 目的建立一种操作简单、快速和准确的体外多终点遗传毒性检测方法。方法将组蛋白γ-H2AX、P53蛋白、磷酸化组蛋白H3(p-H3)以及活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)4个生物标志物整合到γ-H2AX灶点试验中。DNA断裂剂依托泊苷(未加S9条件下,0.2,0.4,0.8和1.6 mg·L^(-1))、环磷酰胺(S9条件下,3.75,7.5,15和30 mg·L^(-1))和非整倍体诱导剂秋水仙素(未加S9条件下,0.0063,0.0125,0.025和0.05 mg·L^(-1))处理TK6细胞24 h,收获细胞、固定,洗涤后加入抗体标记,流式细胞仪检测γ-H2AX、P53蛋白和p-H3荧光强度。选择4种不同作用机制的DNA断裂剂(有S9条件下,丝裂霉素C 0.05,0.1和0.2 mg·L^(-1),甲磺酸甲酯3,6和12 mg·L^(-1),苯并芘0.5,1和2 mg·L^(-1),顺铂2.5,5和10 mg·L^(-1);无S9条件下,分别加丝裂霉素C 0.025,0.05,0.1 mg·L^(-1),甲磺酸甲酯1.5,3和6 mg·L^(-1),苯并芘25,50和100 mg·L^(-1),顺铂1.25,2.5和5 mg·L^(-1))、2种非整倍体诱导剂(S9条件下,长春新碱0.005,0.01和0.02 mg·L^(-1),紫杉醇0.02,0.04和0.08 mg·L^(-1);未加S9条件下,长春新碱0.01,0.02和0.04 mg·L^(-1),紫杉醇0.005,0.01和0.02 mg·L^(-1))和3种不具有遗传毒性的化合物(有/无S9条件下,氯化钠125,250和500 mg·L^(-1),氨苄青霉素G 125,250和500 mg·L^(-1),盐酸普萘洛尔15,30和60 mg·L^(-1)),对该方法进行验证。结果在方法建立阶段,与溶剂对照组相比,无S9依托泊苷组和有S9的环磷酰胺组γ-H2AX和P53蛋白荧光强度增加,且依托泊苷组1.6 mg·L^(-1)和环磷酰胺30 mg·L^(-1)组组荧光强度为溶剂对照组的2倍以上,p-H3阳性细胞比例无显著升高;秋水仙素组γ-H2AX和P53蛋白荧光强度无明显变化,p-H3细胞比例为溶剂对照组2倍以上。在方法验证阶段使用多种不同作用机制的化合物验证得到的灵敏度(6/6)和特异性(3/3)均较高。结论建立了体外多终点遗传毒性检测方法,该方法具有应用于药物早期遗传毒性筛选和遗传毒性评价的潜力。 展开更多

关键词 Γ-H2AX 磷酸化组蛋白H3 P53蛋白 流式细胞术 DNA双链断裂 遗传毒性

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液相色谱-串联质谱法测定SD大鼠全血中新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001浓度

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作者 赵磊 孙丽华 +1 位作者 俞巧玲 邱云良 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期377-382,共6页

建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,... 建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相B,在0.8 mL/min流速下梯度洗脱。待测物RN-0001和内标环孢菌素A的检测采用正离子电喷雾多反应监测模式,其检测离子对分别为m/z 645.4/156.2和m/z 601.8/156.1。RN-0001在30.0 ng/mL~30.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(r 2>0.9961),定量下限为30.0 ng/mL,批内和批间的精密度小于5.2%,批内和批间准确度在-3.6%~6.7%之间。RN-0001基质样品在室温放置18 h,-80℃冰箱放置40天以及经过5次冻融循环后均稳定。SD大鼠尾静脉注射3 mg/kg的RN-0001注射液进行药代动力学研究,RN-0001的半衰期t 1/2为3.53 h,峰浓度C 0为9370 ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积AUC 0-24 h为5300 h·ng/mL。结果表明,所建方法适用于RN-0001在SD大鼠体内的药代动力学研究。 展开更多

关键词 亲环蛋白D抑制剂 急性肾损伤 液相色谱-串联质谱 方法学验证

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