期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
1
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
表达工程化剪接因子腺病毒的构建及其在调控乳鼠心肌细胞中的YAP1可变剪接中的应用
被引量：
1
1
作者
李阳
赵倩
+1 位作者
宋晓伟
宋金超
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期1013-1018,共6页
目的构建人工剪接因子,实现调控心肌细胞YAP1的可变剪接。方法本研究根据Pumilio1的序列特异性,针对YAP1的Exon6构建不同序列的剪接因子。实验分为3组:野生型PUF-SR作为阴性对照组、人工化的PUF-SR腺病毒转染组、质粒转染组。实验流程:...
目的构建人工剪接因子,实现调控心肌细胞YAP1的可变剪接。方法本研究根据Pumilio1的序列特异性,针对YAP1的Exon6构建不同序列的剪接因子。实验分为3组:野生型PUF-SR作为阴性对照组、人工化的PUF-SR腺病毒转染组、质粒转染组。实验流程:使用同源重组的方法构建腺病毒,将人工化的PUF-SR的PCR片段克隆到pAd-Track质粒中,再将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中进行质粒扩增。扩增后的质粒经PacⅠ酶切后,转染到293A细胞,进行腺病毒包装。将得到的腺病毒载体转染到培育的乳鼠心肌细胞中。选用Ad-Track质粒用于对照转染组,通过载体转染法将其转染到乳鼠心肌细胞中。定量和半定量PCR法检测YAP1的可变剪接,Westernblot法检测融合蛋白Flag的信号,并使用GAPDH抗体检测GAPDH作为加载对照。结果腺病毒转染组对心肌细胞的转染效率接近100%,质粒转染组中并没有发现荧光蛋白。在Westernblot实验中,阴性对照和靶向YAPExon6XULIE序列的Flag-SR-NLS-PUF都能够检测到融合Flag的蛋白的表达。在反转录PCR和PCR检测YAP1的可变剪接实验中,结果都显示YAP1的第4个target序列所构建的人工剪接因子能够有效调控YAP1 Exon 6的剪入(P<0.05)。结论本实验成功构建出能够调控YAP1可变剪接的腺病毒,并且在SD大鼠的心肌细胞中得到了验证。
展开更多
关键词
工程化剪接因子
腺病毒
YAP1
可变剪接
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
表达工程化剪接因子腺病毒的构建及其在调控乳鼠心肌细胞中的YAP1可变剪接中的应用
被引量：
1
1
作者
李阳
赵倩
宋晓伟
宋金超
机构
上海理工大学
健康
科
学与工程学院
上海理工大学附属市东医院麻醉科
海军军医
大学
第一
附属
医院
心血管内
科
出处
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第7期1013-1018,共6页
基金
上海市杨浦区科委/卫健委科研面上项目(YPM202105)。
文摘
目的构建人工剪接因子,实现调控心肌细胞YAP1的可变剪接。方法本研究根据Pumilio1的序列特异性,针对YAP1的Exon6构建不同序列的剪接因子。实验分为3组:野生型PUF-SR作为阴性对照组、人工化的PUF-SR腺病毒转染组、质粒转染组。实验流程:使用同源重组的方法构建腺病毒,将人工化的PUF-SR的PCR片段克隆到pAd-Track质粒中,再将重组质粒转化到大肠杆菌DH5α中进行质粒扩增。扩增后的质粒经PacⅠ酶切后,转染到293A细胞,进行腺病毒包装。将得到的腺病毒载体转染到培育的乳鼠心肌细胞中。选用Ad-Track质粒用于对照转染组,通过载体转染法将其转染到乳鼠心肌细胞中。定量和半定量PCR法检测YAP1的可变剪接,Westernblot法检测融合蛋白Flag的信号,并使用GAPDH抗体检测GAPDH作为加载对照。结果腺病毒转染组对心肌细胞的转染效率接近100%,质粒转染组中并没有发现荧光蛋白。在Westernblot实验中,阴性对照和靶向YAPExon6XULIE序列的Flag-SR-NLS-PUF都能够检测到融合Flag的蛋白的表达。在反转录PCR和PCR检测YAP1的可变剪接实验中,结果都显示YAP1的第4个target序列所构建的人工剪接因子能够有效调控YAP1 Exon 6的剪入(P<0.05)。结论本实验成功构建出能够调控YAP1可变剪接的腺病毒,并且在SD大鼠的心肌细胞中得到了验证。
关键词
工程化剪接因子
腺病毒
YAP1
可变剪接
Keywords
engineered splicing factor
adenovirus
YAP1
alternative splicing
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
表达工程化剪接因子腺病毒的构建及其在调控乳鼠心肌细胞中的YAP1可变剪接中的应用
李阳
赵倩
宋晓伟
宋金超
《南方医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
