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南极中山站伯氏肩孔南极鱼体液和肠道微生物的分离鉴定及功能分析
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作者 邵琪 翟万营 +2 位作者 蔡爽 孙凤宇 陈良标 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期429-436,共8页
为研究南极鱼体微生物的功能,对采自南极中山站附近海域的伯氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii)体液和肠道内容物中的微生物进行筛选培养,挑选代表性菌株进行生理生化特性测定和次级代谢产物功能验证,并在活体上进行功能初探,观察在... 为研究南极鱼体微生物的功能,对采自南极中山站附近海域的伯氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii)体液和肠道内容物中的微生物进行筛选培养,挑选代表性菌株进行生理生化特性测定和次级代谢产物功能验证,并在活体上进行功能初探,观察在低温环境下其对宿主的影响。结果表明:分离获得的菌株主要分布在变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes),通过16S rDNA基因序列比对发现,菌株Ignatzschineria sp.LJ11可能是一株潜在新种;伊格纳茨氏菌属(Ignatzschineria)和芽孢杆菌属(Bacillus)菌的菌液粗提物对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila ATCC 35654)及金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有明显的抑制作用;用菌株Ignatzschineria sp.LJ11和Bacillus sp.hb117饲喂的斑马鱼在低温下存活的时间较对照组更长;肠道微生物多样性分析显示,投喂Bacillus sp.hb117的斑马鱼肠道微生物中气单胞菌属(Aeromonas)细菌占比最高(超过60%),而投喂Ignatzschineria sp.LJ11的斑马鱼肠道微生物中弧菌属(Vibrio)为优势属。研究表明,在低温(18℃)条件下使用不同类型培养基从伯氏肩孔南极鱼体液和肠道内容物中分离出的多为变形菌门和厚壁菌门,这些菌株具有新型抗生素潜力,同时还有增强宿主耐寒的潜质,该发现为进一步探究极地细菌功能提供了新的思路。 展开更多
关键词 南极 伯氏肩孔南极鱼 细菌分离 抑菌作用 低温
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斑马鱼hoxb7a基因在hox基因簇中的作用研究 被引量:2
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作者 孟祥丽 白金尊 +2 位作者 张绪帅 李伟明 祖尧 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期11-15,共5页
斑马鱼hoxb7a基因是hox基因家族在进化过程中第7旁系同源组中仅存的基因。为了研究hoxb7a基因在整个hox基因簇中的作用,利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼hoxb7a基因进行编辑,T7E1结果显示F0敲除效率平均为43%,并在F2成功获得缺失8个碱基(Δ8... 斑马鱼hoxb7a基因是hox基因家族在进化过程中第7旁系同源组中仅存的基因。为了研究hoxb7a基因在整个hox基因簇中的作用,利用CRISPR/Cas9技术对斑马鱼hoxb7a基因进行编辑,T7E1结果显示F0敲除效率平均为43%,并在F2成功获得缺失8个碱基(Δ8bp)和缺失23个碱基(Δ23bp)的hoxb7a纯合突变体。进而利用实时荧光定量PCR技术检测48hpf野生型和hoxb7a突变体中旁系同源hox基因的表达量变化,QPCR结果显示,hoxb7a缺失后hox基因簇中相邻的hox基因表达量显著性升高(P<0.001),而基因组上距离hoxb7a较远的hox基因表达量未出现明显变化(P>0.05)。研究表明hoxb7a基因在整个hox基因簇中发挥重要调控作用,通过阐述hoxb7a的作用加深了对hox基因簇加倍后基因功能分化的认识。同时斑马鱼hoxb7a突变体的成功构建,为其基因功能机制的研究奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 斑马鱼 CRISPR/Cas9系统 hoxb7a基因 hox基因簇 旁系同源基因
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缢蛏ABC转运蛋白基因家族成员全基因组鉴定及表达模式分析
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作者 杨凡 李治平 +1 位作者 董迎辉 任建峰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2024年第1期172-184,共13页
腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP binding cassette transporter,ABC transporter)家族是最古老的膜蛋白家族之一,广泛存在于原核生物和真核生物体内,利用ATP水解释放的能量对氨基酸、脂质、抗生素等物质进行跨膜运输,参与生物体内多种生... 腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP binding cassette transporter,ABC transporter)家族是最古老的膜蛋白家族之一,广泛存在于原核生物和真核生物体内,利用ATP水解释放的能量对氨基酸、脂质、抗生素等物质进行跨膜运输,参与生物体内多种生理活动。目前,对软体动物ABC转运蛋白家族的鉴定,仅在虾夷扇贝(Patinopecten yessoensis)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)和长牡蛎(Crassostrea gigas)3种双壳类中有系统研究,对缢蛏(Sinonovacula constricta)ABC转运蛋白家族的鉴定和表达模式分析尚未见报道。利用缢蛏基因组和转录组数据,运用本地及NCBI在线BLAST程序、FGENESH+、SMART、Ex PASy、MEGA X、Mev 4.90和MapInspect等生物信息学分析工具,在全基因组水平系统地鉴定出52个缢蛏ABC转运蛋白,并对转运蛋白基因外显子数目、染色体定位等信息进行分析;通过系统进化分析,将缢蛏ABC转运蛋白家族分为8个亚家族,即ABCA~ABCH;通过比较分析不同物种ABC转运蛋白家族,推测基因串联复制事件对软体动物ABC转运蛋白家族成员数目的增加有影响。ABC转运蛋白基因在缢蛏不同发育时期和组织的表达分析显示,ABCC和ABCG亚家族多个基因在缢蛏稚贝时期表达量达到最高值,ABC转运蛋白基因在鳃、肝胰腺和性腺中表达种类较多。软体动物作为第二大动物类群,目前仅有3个物种的ABC转运蛋白得到了系统分类,缢蛏ABC转运蛋白基因家族的系统鉴定与表达模式分析为研究软体动物ABC转运蛋白基因的进化和缢蛏ABC转运蛋白功能提供了基础资料。 展开更多
关键词 缢蛏 ABC转运蛋白 序列分析 表达模式
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糖原贮积症0型斑马鱼疾病模型的构建及表型分析 被引量:1
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作者 黄姣 霍锦倩 +4 位作者 刘姣 陈洁 祖尧 张庆华 任建峰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期43-52,共10页
目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建糖原贮积症0(GSD0)型斑马鱼疾病模型,研究该病的发病进程和机制。方法针对gys1和gys2基因各设计一个靶点,进行基因编辑和突变体筛选;利用qPCR技术检测早期发育阶段和成鱼不同组织基因表达情况,通过... 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建糖原贮积症0(GSD0)型斑马鱼疾病模型,研究该病的发病进程和机制。方法针对gys1和gys2基因各设计一个靶点,进行基因编辑和突变体筛选;利用qPCR技术检测早期发育阶段和成鱼不同组织基因表达情况,通过PAS染色技术检测糖原累积情况。结果获得了gys1和gys2基因各两种有效突变类型的F2纯合突变体,成功构建了GSD0型斑马鱼疾病模型。gys^(1-/-)纯合子F3早期胚胎发育迟缓,48 hpf内全部死亡,而gys^(2-/-)纯合子发育正常。基因表达分析显示,野生型斑马鱼早期发育阶段(0~125 hpf),gys1和gys2的表达先下降后上升,受精卵时期表达最高;成鱼阶段,gys1在心脏和肌肉组织中高表达,gys2在肝中高表达。PAS糖原染色显示,与野生型相比,gys^(1-/-)心脏和肌肉没有明显的糖原积累,gys^(^(2-/-))肝没有明显的糖原积累。结论gys1和gys2基因敲除斑马鱼模型的表型与小鼠模型相似,但也存在差异;Gys1敲除小鼠模型中F2大部分纯合子死亡,斑马鱼gys^(^(1-/-))纯合子F2正常生长发育,而自交产生的F3不能存活。斑马鱼gys1和gys2敲除突变体的制备,为进一步研究人类糖原储存障碍GSD0的发病进程和机制提供了材料。 展开更多
关键词 糖原贮积症GSD0 疾病模型 斑马鱼 基因敲除 gys1 gys2
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缢蛏Toll样受体家族基因全基因组水平鉴定及其在弧菌刺激下的表达分析 被引量:1
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作者 杜博博 姚璐 +2 位作者 李治平 董迎辉 任建峰 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2023年第4期155-166,共12页
缢蛏(Sinonovacula constricta)是我国传统的四大海水养殖贝类之一,养殖过程中易受病原菌感染而造成大量死亡和经济损失。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是目前研究最多的模式识别受体,在无脊椎动物的先天性免疫中发挥着重要作用... 缢蛏(Sinonovacula constricta)是我国传统的四大海水养殖贝类之一,养殖过程中易受病原菌感染而造成大量死亡和经济损失。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是目前研究最多的模式识别受体,在无脊椎动物的先天性免疫中发挥着重要作用。研究缢蛏TLR分子特征及其免疫功能对预防和控制病原菌感染至关重要。本研究从缢蛏基因组序列中鉴定出42个TLR基因(ScTLR),其中,33个编码典型的TLR蛋白,其他9个为TLR样蛋白。根据蛋白结构域特点,将典型的TLR蛋白分为2大类4个亚类,一类为多半胱氨酸簇TLR(mccTLR),包括1个P型TLR和7个s PP型TLR;另一类为单半胱氨酸簇TLR(sccTLR),包括16个sP型TLR和9个Ls型TLR。与其他9种软体动物TLR基因的类型和数目比较结果显示,缢蛏基因组中未发现其他软体动物中存在的V型和Twin-TIR型TLR,起源古老的mccTLR类群在软体动物中没有大规模的扩张,而起源较晚的sccTLR类群却发生了大规模的扩张。荧光定量PCR分析显示,6种ScTLR在检测的7种组织中普遍表达,且在血细胞、鳃和肝胰腺组织中高表达。最后,副溶血弧菌(Vibrio parahemolyticus)胁迫12 h和48 h的缢蛏鳃和肝胰腺转录组数据分析显示,副溶血弧菌感染前后9个TLR基因在鳃或肝胰腺中的表达量发生显著变化,6个基因(ctg118.25、ctg118.26、ctg356.25、ctg774.6、ctg681.6和ctg1513.5)在感染12 h或48 h后的鳃组织中表达差异显著,前5个基因表达量上调,仅ctg1513.5表达量下调;3个基因(ctg467.9、ctg2496.3和ctg903.17)在感染12 h或48 h后的肝胰腺中表达差异显著,其中,ctg467.9和ctg2496.3表达量下调,ctg903.17表达量上调。综上所述,本研究结果将为深入探讨不同TLR基因在缢蛏天然免疫中发挥的作用提供研究基础。 展开更多
关键词 缢蛏 TOLL样受体 弧菌刺激 表达分析
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斑马鱼hoxb3a基因在早期心脏发育中的功能分析
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作者 王冰琦 何宏阳 +1 位作者 王婕 祖尧 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期956-963,共8页
为探究hoxb3a基因在斑马鱼(Danio rerio)心脏早期发育中的调控作用,利用基因沉默技术(Morpholino)对斑马鱼胚胎进行hoxb3a基因敲降,并结合显微镜观察分析、实时荧光定量PCR、原位杂交技术分析hoxb3a基因对斑马鱼心脏发育的影响。结果表... 为探究hoxb3a基因在斑马鱼(Danio rerio)心脏早期发育中的调控作用,利用基因沉默技术(Morpholino)对斑马鱼胚胎进行hoxb3a基因敲降,并结合显微镜观察分析、实时荧光定量PCR、原位杂交技术分析hoxb3a基因对斑马鱼心脏发育的影响。结果表明:hoxb3a基因敲降组(hoxb3a morphant)出现心包腔肿大、心脏环化角度异常和心房心室形态改变等现象;原位杂交试验确定了hoxb3a基因在不同时空的表达区域,其表达位置的变化与神经嵴细胞参与心脏发育的形成有关;在受精后3 d,与对照组相比,hoxb3a基因敲降组胚胎一些心脏关键基因的表达量发生变化,其中心脏祖细胞相关基因nkx2.5、gata4及房室形成关键基因nppa的表达量均具有显著升高的趋势,同时与神经嵴发育相关的fgf8a基因表达量也明显升高。研究表明,hoxb3a基因在斑马鱼胚胎的早期心脏发育中,通过调控nkx2.5、gata4、nppa与fgf8a等相关转录因子的表达,参与斑马鱼早期心脏发育的过程,本研究结果为早期心脏发育研究提供了新思路。 展开更多
关键词 斑马鱼 hoxb3a 心脏发育
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