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中华绒螯蟹两种微卫星DNA分型方法的应用比较
被引量:
6
1
作者
刘皓
刘青
+3 位作者
吴旭干
何杰
董鹏生
成永旭
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第1期90-94,共5页
为对比荧光标记毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳在微卫星等位基因分型上的效果,试验选择6对微卫星引物,对60个中华绒螯蟹个体基因组DNA进行PCR扩增,荧光标记法共检测出等位基因129个,平均每个位点21.5个等位变异,聚丙烯酰胺凝胶电泳共...
为对比荧光标记毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳在微卫星等位基因分型上的效果,试验选择6对微卫星引物,对60个中华绒螯蟹个体基因组DNA进行PCR扩增,荧光标记法共检测出等位基因129个,平均每个位点21.5个等位变异,聚丙烯酰胺凝胶电泳共检测出等位基因174个,平均每个位点29个等位变异。对位点Esin67的PCR产物分别进行重复检测,发现荧光标记法的重复率为100%,而聚丙烯酰胺凝电泳法两次结果存在较大差异,证实了荧光标记法检测的可靠性显著高于聚丙烯酰胺凝胶电泳。对两种方法的检测效率和经济成本的分析表明,荧光标记法虽然成本较高,但效率高于聚丙烯酰胺凝胶电泳法。建立单重PCR的多重毛细管电泳技术是提高效率、降低成本的有效途径。
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关键词
中华绒螯蟹
微卫星
PAGE
荧光标记
等位基因
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职称材料
不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究
被引量:
4
2
作者
刘皓
刘青
+4 位作者
吴旭干
何杰
董鹏生
李彤
成永旭
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第24期147-150,共4页
为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取...
为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。
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关键词
中华绒螯蟹
DNA提取
酚-氯仿法
试剂盒法
不同组织
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职称材料
CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht_1和5-ht_2受体基因片段及序列分析
被引量:
3
3
作者
徐泽文
杨筱珍
+4 位作者
黄坚
李彤
杨志刚
王春
成永旭
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第1期1-5,共5页
根据已报道的中华绒螯蟹近缘物种的5-ht1r和5-ht2r氨基酸序列保守区,利用CODEHOP设计了两对简并引物,采用RT-PCR法扩增得到了中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r部分片段并克隆到p MD-19T载体。测序结果表明扩增到的中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r片...
根据已报道的中华绒螯蟹近缘物种的5-ht1r和5-ht2r氨基酸序列保守区,利用CODEHOP设计了两对简并引物,采用RT-PCR法扩增得到了中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r部分片段并克隆到p MD-19T载体。测序结果表明扩增到的中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r片段长分别为366 bp和177 bp,编码121和58个氨基酸。经BLASTp分析显示,中华绒螯蟹5-ht1r与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的5-ht1r同源性高达98%,而中华绒螯蟹5-HT2R与断沟龙虾(Panulirus interruptus)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)5-ht2r同源性高达95%。
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关键词
CODEHOP
中华绒螯蟹
5-ht1r
5-ht2r
克隆
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职称材料
酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响
被引量:
3
4
作者
怀向军
王武刚
+2 位作者
黄旭雄
刘泉
苏明
《水产科技情报》
北大核心
2013年第5期240-244,共5页
为探明使用经氨基酸平衡后的酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响,分别用酵母提取物替代饲料中15%(B)、30%(C)、45%(D)、60%(E)和100%(F)的鱼粉,配制6种等氮、等能的试验饲料投喂凡纳滨对虾(6.328±0...
为探明使用经氨基酸平衡后的酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响,分别用酵母提取物替代饲料中15%(B)、30%(C)、45%(D)、60%(E)和100%(F)的鱼粉,配制6种等氮、等能的试验饲料投喂凡纳滨对虾(6.328±0.630g),以鱼粉含量为25%的饲料为对照组(A)。饲养7d后开始收集粪便,测定凡纳滨对虾对饲料的表观消化率。养殖试验结束后,研究酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化酶的影响。试验结果:凡纳滨对虾对各组饲料均具有较高的干物质表观消化率(77.96%-81.21%)和粗蛋白表观消化率(87.19%-92.82%);各替代组饲料的表观消化率均高于对照组,其中C、E和F组的干物质表观消化率显著高于对照组(P〈0.05),粗蛋白表观消化率随酵母提取物用量的增加而显著增加(P〈0.05);凡纳滨对虾肝胰腺中类胰蛋白酶的活性随饲料中酵母提取物用量的增加而显著升高(P〈0.05),脂肪酶的活性随饲料中酵母提取物用量的增加而显著降低(P〈0.05);肝胰腺中淀粉酶活性最高的为C组;各替代组凡纳滨对虾的肠胰蛋白酶活性均高于对照组。结果表明,以氨基酸平衡酵母提取物替代饲料中的鱼粉可以提高凡纳滨对虾对饲料的消化机能。
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关键词
凡纳滨对虾
酵母提取物
鱼粉
替代
消化率
消化酶
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职称材料
题名
中华绒螯蟹两种微卫星DNA分型方法的应用比较
被引量:
6
1
作者
刘皓
刘青
吴旭干
何杰
董鹏生
成永旭
机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室
上海
海洋大学
上海
高校知识服务平台
水产
动物遗传育种中心
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第1期90-94,共5页
基金
国家863高技术研究发展计划项目(2012AA10A409-5)
上海市科委科技崇明专项(13231203504)
+1 种基金
上海高校水产学一流学科建设项目(沪教科2012-62)
上海高校创新团队(第二期)项目(沪教科2009-26)
文摘
为对比荧光标记毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳在微卫星等位基因分型上的效果,试验选择6对微卫星引物,对60个中华绒螯蟹个体基因组DNA进行PCR扩增,荧光标记法共检测出等位基因129个,平均每个位点21.5个等位变异,聚丙烯酰胺凝胶电泳共检测出等位基因174个,平均每个位点29个等位变异。对位点Esin67的PCR产物分别进行重复检测,发现荧光标记法的重复率为100%,而聚丙烯酰胺凝电泳法两次结果存在较大差异,证实了荧光标记法检测的可靠性显著高于聚丙烯酰胺凝胶电泳。对两种方法的检测效率和经济成本的分析表明,荧光标记法虽然成本较高,但效率高于聚丙烯酰胺凝胶电泳法。建立单重PCR的多重毛细管电泳技术是提高效率、降低成本的有效途径。
关键词
中华绒螯蟹
微卫星
PAGE
荧光标记
等位基因
Keywords
Chinese mitten crabs(Eriocheir sinensis)
SSR
PAGE
fluorescent-labeled
allele
分类号
Q959.1 [生物学—动物学]
Q343.12 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究
被引量:
4
2
作者
刘皓
刘青
吴旭干
何杰
董鹏生
李彤
成永旭
机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室
上海
海洋大学
上海
高校知识服务平台
水产
动物遗传育种中心
出处
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第24期147-150,共4页
基金
国家"863"计划项目(2012AA10A409-5)
科技部科技型中小企业技术创新项目(14C26213201214)
+2 种基金
上海市科学技术委员会项目(13231203504
13DZ2280500)
上海高校水产学一流学科建设项目(沪教科2012-62)
文摘
为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量。结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求。综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用。
关键词
中华绒螯蟹
DNA提取
酚-氯仿法
试剂盒法
不同组织
Keywords
Chinese mitten crabs(Eriocheir sinensis)
DNA extraction
phenol-chloroform method
DNA extraction kit
different tissues
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht_1和5-ht_2受体基因片段及序列分析
被引量:
3
3
作者
徐泽文
杨筱珍
黄坚
李彤
杨志刚
王春
成永旭
机构
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015年第1期1-5,共5页
基金
国家自然科学基金(31272677)
国家农业科技成果转化项目(2012GB2C000147)
+1 种基金
上海市科委科技合作专项(13231203504)
上海市学术带头人计划(12XD1402700)
文摘
根据已报道的中华绒螯蟹近缘物种的5-ht1r和5-ht2r氨基酸序列保守区,利用CODEHOP设计了两对简并引物,采用RT-PCR法扩增得到了中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r部分片段并克隆到p MD-19T载体。测序结果表明扩增到的中华绒螯蟹5-ht1r和5-ht2r片段长分别为366 bp和177 bp,编码121和58个氨基酸。经BLASTp分析显示,中华绒螯蟹5-ht1r与罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的5-ht1r同源性高达98%,而中华绒螯蟹5-HT2R与断沟龙虾(Panulirus interruptus)和克氏原螯虾(Procambarus clarkii)5-ht2r同源性高达95%。
关键词
CODEHOP
中华绒螯蟹
5-ht1r
5-ht2r
克隆
Keywords
CODEHOP
Eriocheir sinensis
5-ht1r
5-ht2r
cloning
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响
被引量:
3
4
作者
怀向军
王武刚
黄旭雄
刘泉
苏明
机构
上海
市青浦区
水产
技术推广站
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点试验室
出处
《水产科技情报》
北大核心
2013年第5期240-244,共5页
基金
上海市科委项目(08DZ1981000)
文摘
为探明使用经氨基酸平衡后的酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响,分别用酵母提取物替代饲料中15%(B)、30%(C)、45%(D)、60%(E)和100%(F)的鱼粉,配制6种等氮、等能的试验饲料投喂凡纳滨对虾(6.328±0.630g),以鱼粉含量为25%的饲料为对照组(A)。饲养7d后开始收集粪便,测定凡纳滨对虾对饲料的表观消化率。养殖试验结束后,研究酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化酶的影响。试验结果:凡纳滨对虾对各组饲料均具有较高的干物质表观消化率(77.96%-81.21%)和粗蛋白表观消化率(87.19%-92.82%);各替代组饲料的表观消化率均高于对照组,其中C、E和F组的干物质表观消化率显著高于对照组(P〈0.05),粗蛋白表观消化率随酵母提取物用量的增加而显著增加(P〈0.05);凡纳滨对虾肝胰腺中类胰蛋白酶的活性随饲料中酵母提取物用量的增加而显著升高(P〈0.05),脂肪酶的活性随饲料中酵母提取物用量的增加而显著降低(P〈0.05);肝胰腺中淀粉酶活性最高的为C组;各替代组凡纳滨对虾的肠胰蛋白酶活性均高于对照组。结果表明,以氨基酸平衡酵母提取物替代饲料中的鱼粉可以提高凡纳滨对虾对饲料的消化机能。
关键词
凡纳滨对虾
酵母提取物
鱼粉
替代
消化率
消化酶
分类号
S963 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中华绒螯蟹两种微卫星DNA分型方法的应用比较
刘皓
刘青
吴旭干
何杰
董鹏生
成永旭
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015
6
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职称材料
2
不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹DNA提取效果的比较研究
刘皓
刘青
吴旭干
何杰
董鹏生
李彤
成永旭
《广东农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2014
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
CODEHOP法设计引物克隆中华绒螯蟹5-ht_1和5-ht_2受体基因片段及序列分析
徐泽文
杨筱珍
黄坚
李彤
杨志刚
王春
成永旭
《生物学杂志》
CAS
CSCD
2015
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾消化机能的影响
怀向军
王武刚
黄旭雄
刘泉
苏明
《水产科技情报》
北大核心
2013
3
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职称材料
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参考文献
引证文献
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