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传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立
被引量：
2
1
作者
贺文斌
徐黎明
+4 位作者
赵景壮
刘淼
任广明
卢彤岩
尹家胜
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期662-667,共6页
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PC...
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。
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关键词
传染性胰脏坏死病毒
VP2
酵母表面展示
细胞免疫荧光
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职称材料
传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用
被引量：
1
2
作者
陈桂花
贺文斌
+5 位作者
徐黎明
赵景壮
任广明
邵轶智
段凯越
卢彤岩
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期573-579,共7页
为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利...
为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32000;间接免疫荧光抗体法分析显示,制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的GenogroupⅠ和GenogroupⅤIPNV分离株,且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应,具备较好的特异性。研究表明,本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株。
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关键词
传染性胰脏坏死病毒
蛋白表达
VP3蛋白
免疫原性
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职称材料
题名
传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立
被引量：
2
1
作者
贺文斌
徐黎明
赵景壮
刘淼
任广明
卢彤岩
尹家胜
机构
上海
海洋大学
水产科学国家级实验教学示范中心
中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
上海海洋大学农业农村部渔业动植物病原库
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期662-667,共6页
基金
中央公益性事业单位基本科研业务费专项(2016HY-ZD0504)
中国博士后科学基金资助项目(198920)
国家自然科学基金资助项目(31802345)
文摘
为了将传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virous,IPNV)的主要保护性抗原及IPNV检测和疫苗开发的主要靶基因——VP2蛋白展示于酵母细胞表面,本研究中基于IPNV VP 2基因序列设计引物,以IPNV ChRtm213的RNA为模板进行PCR扩增,然后将扩增产物连接到酵母表面展示载体pYD1上构建了重组质粒pYD1-VP 2,将重组质粒转化至酵母EBY100感受态细胞中,得到含有重组质粒的酵母菌EBY100/pYD1-VP2,再向EBY100/pYD1-VP2中加入半乳糖进行VP2蛋白的诱导表达,并采用蛋白免疫印迹和细胞免疫荧光技术对VP2蛋白的酵母表面展示情况进行了分析。结果表明:经半乳糖诱导后VP2蛋白在酵母细胞表面获得了成功表达;细胞免疫荧光分析显示,重组酵母诱导表达后出现特异性绿色荧光,并且在一定时间内荧光强度与诱导时间成正相关,诱导24、36、48 h组及对照组(48 h)各组之间荧光酵母比例有显著性差异(P<0.05)。研究表明,IPNV VP2蛋白已经被酵母细胞高效表达并且成功展示于酵母细胞表面,本研究结果可为IPNV口服活载体疫苗的研制奠定基础。
关键词
传染性胰脏坏死病毒
VP2
酵母表面展示
细胞免疫荧光
Keywords
infectious pancreatic necrosis virus(IPNV)
VP2
yeast surface display
cell immunofluorescence assay
分类号
S941.41 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用
被引量：
1
2
作者
陈桂花
贺文斌
徐黎明
赵景壮
任广明
邵轶智
段凯越
卢彤岩
机构
上海
海洋大学
水产科学国家级实验教学示范中心
中国水产科学研究院黑龙江水产研究所
上海海洋大学农业农村部渔业动植物病原库
中国水产科学研究院长江水产研究所
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期573-579,共7页
基金
国家重点研究发展计划“蓝色粮仓科技创新”项目(2019YFD0900105)
中央公益性事业单位基本科研业务费专项(2020GH05,HSY2019M)
+1 种基金
国家自然科学基金(31802345)
中国博士后科学基金(2018M630893,2019T12027)。
文摘
为丰富传染性胰脏坏死病毒(infectious pancreas necrosis virus,IPNV)的检测方法,以GenogroupⅠ型的IPNV ChRtm213分离株基因组RNA为模板,利用一步法RT-PCR扩增获得了编码IPNV VP3基因序列(711 bp),将其克隆至pET-32a原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta进行VP3蛋白表达,以纯化的VP3蛋白为免疫原制备鼠抗血清,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对抗血清效价进行测定,并利用间接免疫荧光抗体法(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)和中国不同地区的IPNV分离株,对抗血清识别中国现行IPNV分离株的能力进行免疫学鉴定。结果表明:SDS-PAGE分析显示,表达纯化的VP3蛋白条带单一,相对分子质量约为45000,与理论值相符;抗血清效价分析显示,所制备的鼠抗IPNV VP3血清与IPNV的反应效价为16000,与纯化的IPNV VP3蛋白的反应效价为32000;间接免疫荧光抗体法分析显示,制备的鼠抗血清能够特异性识别中国不同地区的GenogroupⅠ和GenogroupⅤIPNV分离株,且该血清不与传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)发生交叉反应,具备较好的特异性。研究表明,本研究中利用原核表达系统表达的IPNV VP3蛋白具有良好的免疫原性,所制备的IPNV VP3抗血清能够特异性识别中国不同地区的IPNV分离株。
关键词
传染性胰脏坏死病毒
蛋白表达
VP3蛋白
免疫原性
Keywords
infectious pancreatic necrosis virus(IPNV)
protein expression
VP3 protein
antigenicity
分类号
S917 [农业科学—水产科学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
传染性胰脏坏死病毒VP2蛋白酵母表面展示系统的建立
贺文斌
徐黎明
赵景壮
刘淼
任广明
卢彤岩
尹家胜
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
2
在线阅读
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职称材料
2
传染性胰脏坏死病毒VP3抗血清的制备及应用
陈桂花
贺文斌
徐黎明
赵景壮
任广明
邵轶智
段凯越
卢彤岩
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
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