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荧光RNA及其生物传感技术研究进展 被引量:1
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作者 左方婷 张雅强 +2 位作者 杨慧敏 杨弋 陈显军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期92-108,共17页
荧光RNA技术是一种新兴的RNA标记技术,可用于活细胞RNA的原位实时标记与成像,对于人们理解RNA的功能和调控机制发挥着至关重要的作用。基于荧光RNA的生物传感技术可用于活细胞内小分子代谢物以及蛋白质等靶标的实时动态检测,为生命科学... 荧光RNA技术是一种新兴的RNA标记技术,可用于活细胞RNA的原位实时标记与成像,对于人们理解RNA的功能和调控机制发挥着至关重要的作用。基于荧光RNA的生物传感技术可用于活细胞内小分子代谢物以及蛋白质等靶标的实时动态检测,为生命科学基础研究以及生物医学传感技术开发提供极具价值的工具。本文对遗传编码的荧光RNA的发展历程、荧光RNA技术在活细胞RNA成像,以及基于荧光RNA的生物传感技术在活细胞代谢物检测等方面的应用进行了介绍和总结,并对该领域的发展现状和未来发展方向展开讨论和展望,以期为该技术的进一步发展和在相关领域的应用提供参考。 展开更多
关键词 荧光RNA 荧光标记 RNA成像 生物传感
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手性单壁碳纳米管与牛血红蛋白复合物氧化还原过程的光谱学研究
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作者 谭惠心 陈静 +4 位作者 董开翔 刘岩 章弘扬 胡坪 张敏 《华东理工大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期307-315,共9页
探讨了未分离的单壁碳纳米管(SWCNTs),以及两种具有特定手性的单壁碳纳米管((6,5)-SWCNTs和(8,3)-SWCNTs)分别与牛血红蛋白(BHb)结合的相互作用,考察了3种SWCNTs对SWCNTs/BHb复合物氧化还原状态的光谱特性的影响。结果表明,SWCNTs与BHb... 探讨了未分离的单壁碳纳米管(SWCNTs),以及两种具有特定手性的单壁碳纳米管((6,5)-SWCNTs和(8,3)-SWCNTs)分别与牛血红蛋白(BHb)结合的相互作用,考察了3种SWCNTs对SWCNTs/BHb复合物氧化还原状态的光谱特性的影响。结果表明,SWCNTs与BHb的结合引起了BHb二级结构的显著变化,尤其是未分离的SWCNTs对BHb产生了最显著的影响,表现为BHb荧光强度的显著降低和α-螺旋结构的明显减少。在氧化过程中,BHb和SWCNTs在各自的最大发射波长处的荧光强度均有所增加;而在还原过程中,BHb和SWCNTs的荧光强度则逐渐恢复至原始状态。本文的研究结果可为血红蛋白氧化还原过程的监测提供一种新思路。 展开更多
关键词 单壁碳纳米管 牛血红蛋白 相互作用 荧光光谱 氧化还原
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RNA转录后代谢时空精密控制技术 被引量:1
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作者 刘韧玫 李乐诗 +2 位作者 杨小燕 陈显军 杨弋 《合成生物学》 CSCD 2023年第1期141-164,共24页
RNA种类繁多且功能多样,是细胞活动的核心分子之一。RNA代谢调控对于基因和RNA功能研究、细胞生命活动解析以及疾病治疗手段的开发都是至关重要的。为了深入研究RNA时间、空间分布以及功能机制,科学家们一直在追求可以在活细胞内对RNA... RNA种类繁多且功能多样,是细胞活动的核心分子之一。RNA代谢调控对于基因和RNA功能研究、细胞生命活动解析以及疾病治疗手段的开发都是至关重要的。为了深入研究RNA时间、空间分布以及功能机制,科学家们一直在追求可以在活细胞内对RNA分子活动进行精密控制的技术,这也是近些年生命科学领域的研究热点之一。目前基于基因编辑、转录调控等可以控制RNA转录生成的技术已较为成熟,但对于RNA转录后代谢的控制技术尚在发展与突破阶段。此前,RNA转录后代谢调控工具是通过调节RNA或基于RNA结合蛋白的RNA效应因子来实现的,但它们的时空分辨率较低,很难对RNA转录后代谢进行定时、定量和定位精密调控。光遗传学凭借其独特的高时空分辨率、非侵入性等优势已经被逐步用于发展活细胞RNA代谢时空精确控制技术。目前,基于核苷酸光化学修饰、遗传编码光响应因子的光遗传学工具已经可实现在转录或转录后水平对RNA多种代谢活动的时空精密控制,包括生成、运输、翻译、降解等。本文将介绍RNA代谢调控系统的研究进展,并聚焦于RNA转录后代谢的光遗传学调控技术,同时对其未来发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 光遗传学 RNA代谢 RNA功能 时空精密控制 光控RNA结合蛋白
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荧光光谱法研究单壁碳纳米管与牛血红蛋白的相互作用 被引量:1
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作者 杨兴 谭惠心 +2 位作者 章弘扬 胡坪 张敏 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期12-18,共7页
选取了单壁碳纳米管(SWCNTs)及两种分离后的单一手性单壁碳纳米管(6,5)-SWCNTs、(8,3)-SWCNTs分别与牛血红蛋白(BHb)结合,通过荧光光谱法分析SWCNTs与BHb的相互作用。结果表明,SWCNTs对BHb的荧光猝灭为动态猝灭与静态猝灭结合的机制,(6,... 选取了单壁碳纳米管(SWCNTs)及两种分离后的单一手性单壁碳纳米管(6,5)-SWCNTs、(8,3)-SWCNTs分别与牛血红蛋白(BHb)结合,通过荧光光谱法分析SWCNTs与BHb的相互作用。结果表明,SWCNTs对BHb的荧光猝灭为动态猝灭与静态猝灭结合的机制,(6,5)-SWCNTs和(8,3)-SWCNTs对BHb的荧光猝灭属于静态猝灭的机制;298 K下BHb与3种SWCNTs的结合常数大小顺序如下:SWCNTs>(6,5)-SWCNTs>(8,3)-SWCNTs;范德华力、氢键和疏水作用是相互作用中的主要作用力。 展开更多
关键词 单壁碳纳米管 牛血红蛋白 相互作用 荧光光谱 猝灭
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不同单克隆抗体聚集与断裂行为的多维分析 被引量:1
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作者 陆治锦 文玺凯 +5 位作者 刘鲁杰 王宜冰 沈春雷 伍维 沈智勇 赵黎明 《华东理工大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期42-49,共8页
采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关... 采用尺寸排阻色谱法和分析型超速离心法对ZG154和ZG187抗体的分子大小变异体进行正交分析,系统解析了造成聚集和断裂的因素。结果表明,40℃时ZG154样品在天冬酰胺329位点发生脱酰胺修饰的比例增加了30.7%,通过增加分子间相互作用,相关修饰加速了聚集,并导致断裂的发生;40℃时ZG187样品在蛋氨酸430位点发生氧化修饰的比例增加了36.9%,相关修饰降低了蛋白的稳定性,导致了断裂的发生。研究结果为上述药物研发和生产过程中的聚集与断裂问题提供了检测和分析方法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 聚集 断裂 脱酰胺 氧化
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荧光核酸适配体:核酸酶学分析新机遇 被引量:3
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作者 高子珩 邹譞 +3 位作者 周宜 薛婷婷 陈显军 杨弋 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1042-1068,共27页
DNA和RNA的合成与降解等核酸代谢过程是维持生命体生长发育、新陈代谢、遗传变异、个体衰老等生命过程的基础代谢单元,广泛参与机体生命活动的全过程。核酸代谢相关酶活性对于维持细胞内环境的稳定性至关重要,其活性的改变可能会引起多... DNA和RNA的合成与降解等核酸代谢过程是维持生命体生长发育、新陈代谢、遗传变异、个体衰老等生命过程的基础代谢单元,广泛参与机体生命活动的全过程。核酸代谢相关酶活性对于维持细胞内环境的稳定性至关重要,其活性的改变可能会引起多种疾病的发生与发展。核酸代谢相关酶已成为多种疾病研究的重要靶点,也是生物技术和生物工程领域中不可或缺的重要工具,如聚合酶链反应、定点诱变、分子克隆和DNA测序等。因此,核酸代谢是所有核酸研究和相关生命科学领域研究的基础。本文将介绍核酸代谢的酶学分析常用方法,并聚焦于操作简单、实时快速的荧光法,按照荧光法的检测原理、发展历史和应用进行分类阐述与比较,并对核酸酶学分析工具未来研究与发展方向进行展望。 展开更多
关键词 核酸代谢 酶活性检测 荧光法 荧光核酸适配体
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蛋白质稳定性计算设计与定向进化前沿工具 被引量:5
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作者 阮青云 黄莘 +1 位作者 孟子钧 全舒 《合成生物学》 CSCD 2023年第1期5-29,共25页
天然蛋白质具有临界稳定性的特征,这种较低的稳定性使蛋白质结构具有足够的灵活性,从而支持其发挥生物学功能。然而,临界稳定性使得蛋白质遭受胁迫压力后极易发生错误折叠并失去功能,导致天然蛋白质往往无法满足科学研究与工业应用的需... 天然蛋白质具有临界稳定性的特征,这种较低的稳定性使蛋白质结构具有足够的灵活性,从而支持其发挥生物学功能。然而,临界稳定性使得蛋白质遭受胁迫压力后极易发生错误折叠并失去功能,导致天然蛋白质往往无法满足科学研究与工业应用的需求。此外,体内蛋白质在错误折叠后产生的聚集沉淀被认为是多种疾病发生发展的原因,包括阿尔兹海默病、帕金森综合征等。因此,优化蛋白质的稳定性是科学研究与工程应用领域亟待解决的关键问题。本文从蛋白质的折叠与稳定性机制出发,聚焦于序列优化与折叠环境优化两种改善蛋白质稳定性的手段,综述了基于理性设计、计算机辅助设计改善蛋白质稳定性的研究方法,介绍了用于高通量筛选蛋白质稳定化突变体或折叠相关因子的定向进化技术。通过多项蛋白质序列改良、折叠环境优化的案例介绍,展示了蛋白质稳定化技术在蛋白质工程与生物医药领域的广阔应用,包括酶的稳定化设计、疫苗蛋白质的构象控制、分子伴侣与蛋白质聚集抑制剂的筛选、蛋白质稳态药物的开发等。最后,展望了蛋白质稳定化技术未来的研究方向与前景,定制化的蛋白质稳定性检测技术将会迎来蓬勃发展。 展开更多
关键词 蛋白质折叠 蛋白质稳定性 蛋白质稳定化工程 理性设计 计算机辅助设计 定向进化
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基于超高效液相色谱-电雾式检测的槐糖脂指纹图谱 被引量:2
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作者 曹沁玲 赵小丹 +4 位作者 沈国滨 汪竹琴 章弘扬 张敏 胡坪 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期722-729,共8页
槐糖脂具有良好的抗菌、抗病毒等生物学活性以及温和、低毒、环境友好的特点,是目前最具有市场前景的生物表面活性剂之一。但其组成成分复杂,尚缺乏有效的质量评价方法。针对槐糖脂无紫外吸收的特点,该研究选择了灵敏度高、重现性好、... 槐糖脂具有良好的抗菌、抗病毒等生物学活性以及温和、低毒、环境友好的特点,是目前最具有市场前景的生物表面活性剂之一。但其组成成分复杂,尚缺乏有效的质量评价方法。针对槐糖脂无紫外吸收的特点,该研究选择了灵敏度高、重现性好、适用于无紫外吸收或弱紫外吸收物质检测的电雾式检测器(CAD),建立了槐糖脂的超高效液相色谱(UHPLC)指纹图谱。槐糖脂样品采用80%乙醇水溶液为提取溶剂,在液固比10∶1(mL/g)条件下超声提取10 min,利用Thermo Fisher Scientific Hypersil Gold色谱柱(150 mm×2.1 mm, 1.9μm)进行分离,以乙腈-0.01%(v/v)甲酸水溶液作为流动相梯度洗脱,流速0.2 mL/min,柱温40℃,电雾式检测器检测,检测器参数设置为幂律函数1.0,采集频率5 Hz,过滤常数3.6,雾化温度45℃。此外,利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS)对槐糖脂指纹图谱中的色谱峰进行鉴定,共鉴定出16个化合物,包括8个酸型槐糖脂、6个内酯型槐糖脂和2个脂肪酸类化合物。方法精密度、重复性和24 h稳定性试验结果显示,15个特征峰相对于对照峰(油酸)的相对保留时间和相对峰面积的相对标准偏差(RSD)均小于3.0%(n=6)。采用上述方法对17批槐糖脂样品进行测定,相似度评价结果显示,17批样品的相似度数值均在0.965及以上,不同批次的槐糖脂样品之间化学成分差异较小,内在质量较为一致。该研究建立的方法稳定可靠,可用于槐糖脂的质量评价,为槐糖脂的生产工艺研究与开发利用奠定了基础。 展开更多
关键词 超高效液相色谱 电雾式检测器 指纹图谱 槐糖脂
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