培养9天的组织工程化真皮低温保存的研究 被引量：4

1

作者 王欣 华泽钊 +4 位作者 杨光辉 崔磊 刘伟 曹谊林 程启康 《低温工程》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期17-22,共6页

组织工程化真皮的低温保存是皮肤组织工程的重要组成部分 ,对皮肤组织库的建立有重要意义。以培养一定时间的组织工程化真皮为试材 ,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率 ,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析 ,试验研究了低温保护剂预处... 组织工程化真皮的低温保存是皮肤组织工程的重要组成部分 ,对皮肤组织库的建立有重要意义。以培养一定时间的组织工程化真皮为试材 ,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率 ,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析 ,试验研究了低温保护剂预处理方式、降温程序及降温速率等条件对组织工程化真皮低温保存效果的影响。实验表明 :将组织工程化真皮置于 2 1mol/L的DMSO溶液中 ,在 4°C下处理 1 5min ,再只将组织工程化真皮转入低温保存袋中 ,迅速热封口 ,以 1°C/min速率降温且无恒温处理可获得较高的细胞存活率 ( 72 8%～ 78% ) 。 展开更多

关键词 组织工程化真皮 低温保存 皮肤组织工程 四唑盐比色法 细胞存活率

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组织工程化表皮膜片修复裸鼠创面的实验研究 被引量：7

2

作者 杨光辉 杨军 +4 位作者 邓辰亮 王佳鸣 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期293-295,共3页

目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观... 目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于修复裸鼠全层皮肤缺损创面。方法体外分离、培养、扩增人类表皮细胞,与壳聚糖-明胶膜构建表皮细胞膜片,用于修复裸鼠背部全层皮肤缺损创面,以单纯壳聚糖/明胶膜作为对照;术后行大体、组织学观察及免疫组织化学检测。结果 表皮细胞可以壳聚糖-明胶膜作为载体在体外培养,达到60％-70％亚融合状态时,移植人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜到裸鼠全层皮肤缺损创面,人表皮细胞可以在创面存活并继续增殖分化,形成连续的表皮覆盖创面。结论人表皮细胞/壳聚糖-明胶膜是一种理想的组织工程表皮替代物。 展开更多

关键词 组织工程 表皮细胞 创面愈合 壳聚糖 明胶膜 皮肤缺损

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组织工程的发展与主要研究方向 被引量：2

3

作者 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期229-231,共3页

该文简要回顾了组织工程的建立与发展历史,重点讨论组织工程中的种子细胞、生物材料与组织构建等研究现状,对中国组织工程的建立与研究成果作了概括性总结。

关键词 组织工程 种子细胞 生物材料 研究方向 中国

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组织工程化表皮膜片的构建及其在增殖性疤痕治疗中的应用 被引量：25

4

作者 杨军 杨光辉 +3 位作者 刘伟 崔磊 曹谊林 钱云良 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期296-298,共3页

目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于增殖性疤痕治疗。方法 利用患者少量自体正常皮肤分离、培养、扩增表皮细胞,接种于壳聚糖-明胶膜构建成表皮细胞膜片;断层削除增殖性疤痕,膜片移植于创面、适度加压,术后10、30、90 d行大体观... 目的 构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于增殖性疤痕治疗。方法 利用患者少量自体正常皮肤分离、培养、扩增表皮细胞,接种于壳聚糖-明胶膜构建成表皮细胞膜片;断层削除增殖性疤痕,膜片移植于创面、适度加压,术后10、30、90 d行大体观察、组织学检查及广谱角蛋白、包壳蛋白、层粘连蛋白免疫组织化学检测。结果 利用自体表皮细胞和壳聚糖/明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床增殖性疤痕治疗6例,经过3月随访,创面愈合时间(16.2±15)d,移植膜片存活良好,结构较完整,90 d随访无明显疤痕增生,疗效肯定。结论 表皮细胞/壳聚糖-明胶膜片对增殖性疤痕具有良好治疗效果,组织工程皮肤进入临床具有现实的可行性及广阔的应用前景。 展开更多

关键词 组织工程 表皮细胞 壳聚糖 明胶膜 增殖性疤痕 皮肤损伤 细胞培养

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灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨 被引量：5

5

作者 吕晓杰 周广东 +6 位作者 李宏 曹珲 刘霞 刘凯 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1006-1010,共5页

目的初步探讨应用灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨的可行性及其效果。方法消化、分离猪耳廓软骨细胞,接种于聚羟基乙酸支架上培养1周,形成细胞-支架复合物。实验分2组(每组8个样本):实验组放入灌流-液压式反应器连续培养3周;... 目的初步探讨应用灌流-液压式反应器体外构建组织工程化软骨的可行性及其效果。方法消化、分离猪耳廓软骨细胞,接种于聚羟基乙酸支架上培养1周,形成细胞-支架复合物。实验分2组(每组8个样本):实验组放入灌流-液压式反应器连续培养3周;反应器主要参数设置:灌流量100μL/m in,顺、逆时针方向各30 m in,灌流时间开/关各8 h/16 h,液压强度100 kPa,频率0.5 Hz,作用时间4 h/d。对照组则继续在培养皿内培养。第4周时取材,分别从大体、组织学、Ⅱ型胶原免疫组化和生物化学等方面对实验组和对照组形成的软骨组织进行检测和比较。结果大体观察见实验组和对照组均形成了软骨样组织,组织湿重检测实验组为(191.03±18.55)mg,对照组为(130.78±10.33)mg(P<0.01)。组织学观察显示,两组软骨组织内软骨细胞分布均匀,包埋于软骨陷窝内,软骨基质分泌旺盛,局部还有未降解的支架材料。免疫组化染色证实两组形成的软骨组织均有Ⅱ型胶原分布,软骨组织厚度实验组为(3.04±0.13)mm,对照组为(2.14±0.16)mm,两组间比较有显著性差异(P<0.01)。生物化学检测证实,实验组蛋白聚糖含量为(12.63±0.62)mg/g,明显高于对照组的(8.23±0.81)mg/g(P<0.01)。结论利用灌流-液压式反应器能够在体外构建组织工程化软骨,并且可以在一定程度上弥补传统构建方法的不足,提高体外构建软骨的质量。 展开更多

关键词 灌流-液压式反应器 软骨细胞 组织工程 体外构建

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应用hMSCs-脱钙骨复合物体内构建软骨组织的实验研究 被引量：2

6

作者 舒朝锋 崔磊 +1 位作者 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期242-245,共4页

目的 观察成软骨诱导后人骨髓间充质干细胞和脱钙骨复合物在裸鼠皮下组织形成情况。方法 从志愿者髂前上嵴处抽取骨髓,得到骨髓间充质干细胞,将第1代的骨髓间充质干细胞密度调整到1.5×107/mL,均匀接种于脱钙骨,培养4 h后以含有TGF-... 目的 观察成软骨诱导后人骨髓间充质干细胞和脱钙骨复合物在裸鼠皮下组织形成情况。方法 从志愿者髂前上嵴处抽取骨髓,得到骨髓间充质干细胞,将第1代的骨髓间充质干细胞密度调整到1.5×107/mL,均匀接种于脱钙骨,培养4 h后以含有TGF-β3(10 ng/mL)DMEM培养液的培养作为实验组,加10％FBS的DMEM为对照组Ⅰ,空白材料为对照组Ⅱ,体外培养6 d,嘲植到裸鼠皮下。回植前及回植后2、4、6、8、10周取材,石蜡切片进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化、Masson’s、Alician Blue’s染色鉴定。结果 回植前及回植后各时间段,实验组免疫组化测到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的表达,对照组未见Ⅱ型胶原表达;实验组Masson、Alician染色可见材料内的胶原分泌非常旺盛,有硫酸化酸性粘多糖沉积,对照组则表达量极少。结论 诱导后人骨髓间充质干细胞一脱钙骨复合物在裸鼠皮下能表达特异性软骨基质。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 脱钙骨 皮下组织 组织工程 诱导 细胞分化 胶原 软骨 种子细胞

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病毒介导的基因转染在组织工程中的应用

7

作者 刘德莉 刘方军 +5 位作者 吴娟娟 胡晓洁 祝联 刘伟 崔磊 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期311-314,共4页

目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细... 目的 构建重组病毒载体,将较多细胞因子通过病毒载体转入种子细胞,提高细胞增殖及分泌基质能力,维持表型,延缓老化。方法 应用基因工程技术,构建缺陷型逆转录病毒重组载体和缺陷性腺病毒重组载体。分别通过PT67包装细胞筛选克隆及293细胞扩增,获得假病毒上清液,经浓缩纯化后转染靶细胞。结果 成功构建胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、Fas配体(Fas-Ligand)、绿色荧光蛋白(GFP)等逆转录病毒载体以及TGFβ1、人骨形成蛋白因子-7(hBMP7)、端粒酶、Smad3、Smad7等腺病毒载体,其中GFP-逆转录病毒重组载体在软骨细胞表达至2月。结论 通过有效的含目的基因重组载体转染种子细胞,延缓体外培养细胞的老化及促进细胞的增殖与基质分泌,获得组织工程所需要的大量种子细胞,为组织工程构建奠定了基础。 展开更多

关键词 基因转染 逆转录病毒载体 腺病毒载体 组织工程 种子细胞 基因工程技术

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软骨细胞与骨髓基质细胞共培养体外构建软骨的初步研究 被引量：18

8

作者 苗春雷 周广东 +5 位作者 刘天一 王晓云 崔磊 刘伟 唐胜建 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期246-249,283,共5页

目的 探讨不同浓度软骨细胞提供的软骨微环境诱导骨髓基质干细胞(BMSC)体外构建软骨的可行性。方法 将体外分别培养扩增的猪BMSC与耳软骨细胞按不同比例混合(9:1,8:2),均以5.0×107/mL的细胞终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA... 目的 探讨不同浓度软骨细胞提供的软骨微环境诱导骨髓基质干细胞(BMSC)体外构建软骨的可行性。方法 将体外分别培养扩增的猪BMSC与耳软骨细胞按不同比例混合(9:1,8:2),均以5.0×107/mL的细胞终浓度接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架作为共培养组,以相同终浓度的单纯软骨细胞和单纯BMSC分别接种作为阳性及阴性对照,以20％上述浓度的单纯软骨细胞接种作为低软骨细胞浓度对照。各标本于体外培养4周时取材,通过大体观察、组织学以及免疫组化等方法对新生软骨进行初步评价。结果 各组细胞均与材料粘附良好。8:2共培养组及阳性对照组在体外培养4周时,外观已类似软骨组织并基本保持了材料的大小和形状,组织学显示有较连续的成熟软骨形成,免疫组化也均显示有大量Ⅱ型胶原分泌。9:1共培养组在培养过程中稍有缩小和变形,组织学上仅在培养物的边缘可见到连续的软骨样组织。阴性对照组明显皱缩变形,组织学未见成熟软骨陷窝。低软骨细胞浓度组复合物明显变薄,只在局部形成了不连续的软骨组织,新生软骨量明显少于共培养各组及阳性对照组。结论软骨细胞能够提供软骨微环境诱导BMSC成软骨分化并形成软骨,20％浓度的软骨细胞已能够达到良好的诱导效果。 展开更多

关键词 软骨细胞 骨髓基质细胞 细胞共培养 组织工程 微环境 胶原 软骨缺损 生物材料

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成纤维细胞玻璃化保存的初步实验研究 被引量：4

9

作者 程启康 王欣 +6 位作者 杨鹏飞 华泽钊 邓辰亮 杨光辉 崔磊 刘伟 曹谊林 《低温工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期23-26,44,共5页

成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞 ,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用不同组成及浓度的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化低温保存实验 ,并考虑了离心次数对细胞存活率的影响。实验结果... 成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞 ,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用不同组成及浓度的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化低温保存实验 ,并考虑了离心次数对细胞存活率的影响。实验结果表明 :玻璃化溶液的组成、浓度及复温后的离心次数等因素对细胞的存活率均有明显的影响。在实验条件下 ,采用组分配比为 5 4mol/LEG+1 4mol/LDMSO的玻璃化溶液对成纤维细胞进行玻璃化保存 ,复温后以 10 0 0r/min的转速离心 1次(5min)后 ,再以 80 0r/min的转速离心 4次 (每次 4min) ,可获得较高的细胞存活率 ,其值为87 1%。 展开更多

关键词 成纤维细胞 组织工程化真皮 玻璃化保存 低温保存技术

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血管生物反应器的研究与应用 被引量：7

10

作者 李宏 许志成 +2 位作者 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期319-321,共3页

该文根据生物力学的原理,分析了直圆筒形血管的流动状况和血管的受力特性,在此基础上设计了一套的能模拟血管体内环境的生物反应器,通过血管的培养和相关检测分析,表明生物反应器的设计是合理的,性能是可靠的。

关键词 血管生物反应器 生物力学 组织工程 平滑肌细胞 血管疾病

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脂肪干细胞原代培养及诱导成肌细胞的实验研究 被引量：3

11

作者 宋小飞 傅强 +1 位作者 徐月敏 崔磊 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期521-526,共6页

目的探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法。方法取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达。取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷... 目的探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法。方法取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达。取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷(5-aza)的诱导培养液(诱导组)和基础培养液(对照组)进行培养。诱导时间为7、14、21、28和35 d,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原desmin和myosin的表达。结果成功从大鼠脂肪组织分离、培养出ADSC,相关表面抗原表达检测证实其干细胞特性。诱导组细胞诱导28 d后呈现成肌细胞特有的"漩涡"样生长形态,单个细胞表现出多核化;免疫荧光和流式细胞仪检测显示,desmin和myosin的表达率在诱导28 d时达最高,分别为52.57%和50.04%,而诱导前和对照组细胞均呈阴性表达。结论成功从大鼠脂肪组织分离、培养ADSC,含5-aza的诱导培养液可将其诱导分化为成肌细胞,诱导28 d成肌细胞特异性抗原表达率最高。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 细胞分化 成肌细胞 压力性尿失禁 5-氮杂胞苷

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CDMP1诱导成纤维细胞向成软骨细胞表型分化的实验研究 被引量：4

12

作者 尹烁 崔磊 +2 位作者 李纲 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期254-257,共4页

目的 应用软骨形态发生蛋白-1(CDMP1)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法 取成人真皮成纤维细胞,体外扩增至第2代,以加入CDMP1生长因子(100 ng/mL)的含10％胎牛血清... 目的 应用软骨形态发生蛋白-1(CDMP1)生长因子,体外诱导真皮成纤维细胞向成软骨细胞表型分化,探讨其作为组织工程化软骨种子细胞的可行性。方法 取成人真皮成纤维细胞,体外扩增至第2代,以加入CDMP1生长因子(100 ng/mL)的含10％胎牛血清的F-12培养液诱导,每3 d换液1次,进行单层培养,对照组为不加CDMP1培养的成纤维细胞。7d后,免疫荧光检测Ⅱ型胶原分泌,RT-PCR检测Aggrecan、Ⅱ型胶原mRNA表达。结果 诱导后成纤维细胞细胞形态由梭形向软骨细胞样多角形、多边形转变。Ⅱ型胶原免疫荧光检测表达阳性,RT-PCR检测Aggrecan、Ⅱ型胶原mRNA表达阳性。结论 成纤维细胞在CDMP1生长因子诱导下能向成软骨细胞表型分化,并能分泌软骨细胞特异性基质,有可能成为软骨组织工程新的种子细胞来源。 展开更多

关键词 组织工程 软骨细胞 成纤维细胞 软骨形态发生蛋白-1 胶原 免疫荧光法 细胞诱变

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人表皮干细胞在两种培养体系中生长增殖的比较研究 被引量：6

13

作者 张杰 刘伟 +5 位作者 丛笑倩 徐展远 马东瑞 滕晓进 崔磊 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期284-287,295,共5页

目的 比较表皮干细胞(KSC)在两种体外培养体系中的生长增殖状况。方法 用差速粘附法分离出的KSC,分别置于无饲养层、无血清培养基以及有饲养层、有血清培养基的培养条件下培养。比较KSC在两种培养体系中的生长增殖、克隆形成率、生长曲... 目的 比较表皮干细胞(KSC)在两种体外培养体系中的生长增殖状况。方法 用差速粘附法分离出的KSC,分别置于无饲养层、无血清培养基以及有饲养层、有血清培养基的培养条件下培养。比较KSC在两种培养体系中的生长增殖、克隆形成率、生长曲线和KSC相关标记物的表达等指标。结果 在第二种培养条件下,KSC在生长过程中不存在明显的接触抑制,在较长的体外培养时间内始终保持较高的增殖潜能。两种培养体系间KSC的克隆形成率有显著差异(P<0.01)。流式细胞仪检测两种培养体系间整合素β1阳性率无显著差异,而强阳性率则有显著性差异(P<0.05)。结论 体外培养和扩增KSC时,使用人成纤维制备的饲养层和含胎牛血清的培养基,较无饲养层、无血清的培养基,更有利于KSC的扩增及其表型的维持。 展开更多

关键词 表皮干细胞 细胞培养 细胞增殖 差速粘附法 流式细胞仪

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成纤维细胞预处理过程及三种低温保存方法比较的实验研究

14

作者 程启康 杨鹏飞 +6 位作者 王欣 华泽钊 邓辰亮 杨光辉 崔磊 刘伟 曹谊林 《制冷学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期20-24,共5页

成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用三种不同的低温保存方法对成纤维细胞进行低温保存实验;详细介绍这三种方法的操作过程;并从细胞存活率、降温过程中... 成纤维细胞是构建组织工程化真皮的种子细胞,实现成纤维细胞的低温保存对成功保存组织工程化真皮有着重要的意义。采用三种不同的低温保存方法对成纤维细胞进行低温保存实验;详细介绍这三种方法的操作过程;并从细胞存活率、降温过程中的温度变化情况、操作时所需仪器设备及所耗时间等方面对这三种方法进行了比较。同时研究了DMSO的浓度、预处理时间及预处理温度等因素对成纤维细胞存活率的影响。 展开更多

关键词 成纤维细胞 低温保存 实验研究 组织工程化真皮 种子细胞 细胞存活率 影响 预处理温度 降温 浓度

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人体骨髓基质干细胞冷冻干燥的探索性实验 被引量：5

15

作者 杨鹏飞 程启康 +5 位作者 王欣 华泽钊 陈凡凡 舒朝峰 崔磊 曹谊林 《制冷学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期19-23,共5页

人体骨髓基质干细胞已成为组织工程、细胞移植和基因治疗等领域的重要研究对象 ,目前对它已有低温保存的研究 ,而通过冷冻干燥的方法对其进行保存国内外未见报导。实验尝试用冻干的方法来保存骨髓基质干细胞。文中选取海藻糖、PVP、HES... 人体骨髓基质干细胞已成为组织工程、细胞移植和基因治疗等领域的重要研究对象 ,目前对它已有低温保存的研究 ,而通过冷冻干燥的方法对其进行保存国内外未见报导。实验尝试用冻干的方法来保存骨髓基质干细胞。文中选取海藻糖、PVP、HES等作保护剂 ,应用差示扫描量热仪 (DSC)测量其结晶温度和玻璃化转变温度 ;随后对加入保护剂的细胞溶液进行冻干实验 ,并应用流式细胞仪对冻干样品复水后的细胞活性进行了测定 ,其中 30 %PVP +2 0 %海藻糖对细胞的保护效果较好 ,细胞成活率达到 16 .4 0 %。 展开更多

关键词 骨髓基质干细胞 人体 冻干 HES 细胞移植 细胞活性 流式细胞仪 成活率 保护剂 保存

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含黑色素细胞的表皮替代物构建及对色素脱失的疗效 被引量：3

16

作者 沈海燕 王佳鸣 +6 位作者 邓辰亮 杨光辉 张余光 钱云良 曹谊林 崔磊 杨军 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期57-60,共4页

目的联合应用黑色素细胞和表皮细胞构建组织工程化表皮替代物,并应用于色素脱失治疗。方法利用幼儿包皮分离、培养和扩增出表皮细胞和黑色素细胞,接种于壳聚糖明胶膜,构建成含黑色素细胞的表皮膜片。建立裸鼠动物模型,将含黑色素细胞的... 目的联合应用黑色素细胞和表皮细胞构建组织工程化表皮替代物,并应用于色素脱失治疗。方法利用幼儿包皮分离、培养和扩增出表皮细胞和黑色素细胞,接种于壳聚糖明胶膜,构建成含黑色素细胞的表皮膜片。建立裸鼠动物模型,将含黑色素细胞的表皮膜片移植于治疗组的受区,同时设立表皮细胞膜片为对照组。术后定期行大体观察、组织切片HE染色、抗S-100蛋白免疫组化染色,以检测黑色素细胞在创面的成活情况。结果联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜能够构建出含黑色素细胞的表皮替代物,并应用于动物实验,检测出黑色素细胞成活良好。结论联合应用人黑色素细胞和表皮细胞接种于壳聚糖/明胶膜的表皮替代物能使色素脱失的动物模型恢复色素功能,对色素脱失具有良好的治疗效果。 展开更多

关键词 表皮替代物 黑色素细胞 壳聚糖/明胶膜 色素脱失

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成人骨髓间充质干细胞的体外培养和表型鉴定 被引量：5

17

作者 柳向东 柴冈 +3 位作者 李东 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期302-306,共5页

目的 建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性。方法 采用Percoll(1.073 g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达。结果成人骨髓间... 目的 建立成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的分离培养方法,并对其表面标志进行检测,研究骨髓间质干细胞(MSC)基本生物学特性。方法 采用Percoll(1.073 g/mL)梯度离心分离hMSCs,体外扩增,流式细胞仪检测hMSCs表面抗原表达。结果成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代及传代培养显示,hMSCs具有活跃增殖的能力,每10 mL骨髓可获得(1.25±0.56)×106个原代细胞,7代可获得(5.32±1.15)×1010个细胞(n=5),随着传代次数的增加,细胞的增殖能力下降。流式细胞仪检测生长良好的第3代hMSC显示CD29、CD44、CD106、CD105、CD166、HLA-A/B/C表达阳性,CD34、CD45、CD14、CD31、CD49d、CD54、HLA-DR/DP/DQ表达为阴性。细胞周期分析显示,hMSCs中,S+G2+M期的细胞约占(16.25±3.18)％,其中s期为(4.12±2.35)％;而处于G0+G1期的细胞总数占(76.35±5.28)％,说明大部分细胞仍然处于静止期。流式细胞仪检测表明分离的hMSCs具有间充质干细胞的特征。结论 hMSCs有很强的自我更新能力,在体外传代培养可维持良好的干细胞生物学特性,为进一步深入研究hMSCs作为组织工程种子细胞的应用提供参数。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 体外培养 细胞表型 鉴定 组织工程 流式细胞仪 生物学特性

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差速粘附方法分选表皮干细胞及其评价 被引量：6

18

作者 张杰 刘伟 +5 位作者 丛笑倩 徐展远 殷德民 曹颖 崔磊 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期288-292,共5页

目的 评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法 人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细... 目的 评价细胞外基质差速粘附法在分选表皮干细胞中的作用。方法 人角质形成细胞接种在Ⅳ 型胶原涂被的培养皿上进行粘附试验。粘附细胞为实验组,未粘附细胞及未分选的细胞分别为对照组1和对照组2。三组细胞分别进行克隆形成率测定、细胞周期测定和细胞超微结构观察;应用免疫细胞化学、免疫荧光和流式细胞仪检测β1整合素、细胞角蛋白K19、外皮蛋白(Involucrin)等标记物的表达。结果 与对照组1相比,实验组细胞较小,细胞表面的微绒毛较长而密。实验组细胞克隆形成率明显高于对照组1(P<0.05)。β1整合素、K19、Involucrin在不同组别和不同代次的细胞间表达有显著差别。细胞周期分析显示,实验组细胞86.9％处于G0/G1,8.8％在S期。对照组1和对照组2的细胞处于G0/G1期分别为74％和79.5％,处于S期分别为19.2％和12.3％。结论 细胞外基质差速粘附法可用于分选表皮干细胞。但要达到较高纯度,还需辅以其它手段。 展开更多

关键词 表皮干细胞 粘附试验 细胞外基质 克隆 细胞周期 流式细胞仪

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尿道修复支架材料生物力学性质比较 被引量：2

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作者 冯超 徐月敏 +1 位作者 朱卫东 崔磊 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期370-374,共5页

目的检测并比较多种组织工程尿道修复支架材料的生物力学性质。方法制备小肠黏膜下组织(SIS)、膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)、聚羟乙酸(PGA)和尿道海绵体脱细胞基质(ACSM)支架材料,对其进行大体观察、HE染色及Masson染色观察。于单向拉... 目的检测并比较多种组织工程尿道修复支架材料的生物力学性质。方法制备小肠黏膜下组织(SIS)、膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)、聚羟乙酸(PGA)和尿道海绵体脱细胞基质(ACSM)支架材料,对其进行大体观察、HE染色及Masson染色观察。于单向拉伸实验机上检测单层SIS组、BAMG冻干保存组、BAMG液体保存组、ACSM组、PGA组、兔正常尿道标本组和4SIS组(SIS经4层叠加)的Young氏模量、最大载荷、抗拉强度和最大伸长率等生物力学参数,并进行组间比较。结果 ACSM的厚度与其他支架材料有明显差异,HE和Masson染色显示其由更为丰富的胶原构成。生物力学检测结果显示,Young氏模量:ACSM组>PGA组>4SIS组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;最大载荷:ACSM组>4SIS组>PGA组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;抗拉强度:ACSM组>4SIS组>PGA组>BAMG液体保存组>BAMG冻干保存组>兔正常尿道组>SIS组;最大伸长率:兔正常尿道组>SIS组>BAMG冻干保存组>4SIS组>BAMG液体保存组>ACSM组>PGA组。ACSM组在Young氏模量、最大载荷和抗拉强度上显著优于其他组(P<0.01)。结论异种ACSM支架具有良好的生物力学性质,较SIS、BAMG和PGA等支架更适用于尿道重建。 展开更多

关键词 支架 力学 组织工程

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体外培养人胎儿软骨细胞的生物学特性 被引量：2

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作者 张英 周广东 +2 位作者 崔磊 刘伟 曹谊林 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第4期258-261,270,共5页

目的 建立人胎儿软骨细胞分离培养、扩增技术体系,研究其体外单层培养条件下的生长特性,探讨胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法酶消化法获取胎儿软骨细胞,体外培养扩增,经测定细胞生长曲线、群体倍增时间及累计倍增数... 目的 建立人胎儿软骨细胞分离培养、扩增技术体系,研究其体外单层培养条件下的生长特性,探讨胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。方法酶消化法获取胎儿软骨细胞,体外培养扩增,经测定细胞生长曲线、群体倍增时间及累计倍增数目,观察细胞生长动力学并确定体外生长规律。通过免疫组织化学检测Ⅱ型胶原分泌,阿利辛蓝比色法测定基质糖胺多糖(GAG)含量。P1细胞接种于聚羟乙酸(PGA)纤维支架,观察两者生物相容性及细胞体外成软骨能力。结果 关节软骨细胞形态呈典型的多角形,随着传代的次数增加,逐渐变成“成纤维细胞样”的条梭形。平均倍增时间为74 h。细胞连续培养5代,累计倍增数目为7.83±0.42。P1-P5间接免疫组化Ⅱ型胶原表达阳性,P6不表达。GAG含量P1细胞低于P0细胞,随体外培养时间延长逐渐增加。P1细胞接种于PGA纤维支架,体外培养14 d,组织学观察显示有软骨组织形成。结论 胎儿软骨细胞经常规体外培养,至第6代失去分泌软骨特异性基质的功能。P1细胞接种PGA纤维展现良好的生物相容性,初步证实胎儿软骨细胞作为软骨组织工程种子细胞的可行性。 展开更多

关键词 体外培养 胎儿软骨细胞 生物学特性 组织工程 种子细胞 酶消化法

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