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题名Golph2蛋白质的原核表达及多克隆抗体制备
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作者
谭龙益
陈洁
王皓
叶寒清
厉倩
顾继安
孔宪涛
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机构
上海市第一人民医院宝山分院医学检验科
第二军医大学附属长征医院实验诊断科
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出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第5期443-445,449,共4页
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基金
国家自然科学基金资助(305771661)
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文摘
目的:新近发现Golph2蛋白与肝癌关系密切,制备Golph2重组蛋白质和多克隆抗体,建立Western blot检测技术,为后续研究提供基础。方法:RT-PCR从人肝癌细胞株WBF44钓取Golph2基因序列,PCR回复突变制备全长完整基因(1206bp),将其插入至原核表达载体pET-21、转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析纯化蛋白,SDS-PAGE鉴定。将纯化蛋白质免疫家兔,制备多克隆抗血清。建立Western blot鉴定重组蛋白和抗血清特异性,测定临床血清标本中Golph2蛋白水平。结果:从肝癌细胞中钓取的基因,出现2个碱基置换突变和1个碱基缺失突变,经回复突变,获得与NM177937完全一致序列。SDS-PAGE和Western blot证实,重组Golph2蛋白质与预期结果一致。抗血清能够特异地识别52kD重组蛋白质和73kD血清蛋白质。结论:Golph2蛋白质表达和抗血清制备完全成功。
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关键词
Golph2蛋白质
多克隆抗体
蛋白质表达
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Keywords
Golph2
Polyclonal antibody
Expression of protein
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分类号
R562
[医药卫生—呼吸系统]
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