人胚胎干细胞向神经前体细胞分化的转录组与染色质可及性变化分析研究

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作者 李林颖 蔡晓东 +7 位作者 童冉 杨晨 王志明 贺潇宇 马子越 张丰 李令杰 周君梅 《上海交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期387-403,共17页

目的·利用人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化模型和高通量多组学测序技术研究hESC分化成神经前体细胞(neural progenitor cell,NPC)过程中转录组和染色质可及性的变化情况。方法·首先在体外利用拟胚体形... 目的·利用人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化模型和高通量多组学测序技术研究hESC分化成神经前体细胞(neural progenitor cell,NPC)过程中转录组和染色质可及性的变化情况。方法·首先在体外利用拟胚体形成法诱导hESC分化成NPC,并收集这2个阶段的细胞;通过反转录-实时荧光定量PCR(reverse transcriptionquantitative real-time PCR,RT-qPCR)和免疫荧光染色(immunofluorescence,IF)鉴定细胞表型。应用转录组测序(transcriptome sequencing,RNA-seq)检测并分析hESC和NPC的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)。应用染色质可及性测序(assay for transposase-accessible chromatin with high throughput sequencing,ATAC-seq)技术获取hESC和NPC的染色质可及性变化情况,并对差异的染色质开放区域进行基序富集分析以发现具有潜在调控作用的转录因子。最后对RNA-seq和ATAC-seq多组学数据进行联合分析,并构建蛋白质互作(protein-protein interaction,PPI)网络,寻找体外神经早期分化过程中的关键基因和调控通路。结果·RT-qPCR与IF均显示多能性标志物(NANOG、POU5F1)在hESC阶段表达量高而在NPC阶段表达量明显降低;同时神经早期分化标志物(PAX6、SOX1、NES)在hESC阶段基本不表达而在NPC阶段表达量显著升高。RNA-seq分析结果显示,与hESC阶段相比,NPC阶段中有5597个基因的表达水平呈现上调,而3654个基因的表达水平下降,基因功能富集分析显示NPC阶段上调的基因富集至神经发育相关的功能。ATAC-seq分析结果显示,共27491个基因组区域在hESC向NPC分化过程中染色质可及性发生了显著改变,其中有12381个区域染色质可及性增强,15110个区域染色质可及性减弱;基序富集分析揭示DLX1、LHX2等转录因子基因可能在hESC向NPC分化过程中发挥重要作用。RNA-seq和ATAC-seq的多组学数据联合分析结果显示,在NPC阶段高表达的重叠基因主要富集在轴突导向、前脑发育、神经元迁移等。神经分化后CTNND2、LHX2基因表达水平升高,且相关基因区域染色质可及性也增加。PPI网络分析发现,PRKACA、CDH2、ERBB4等是下游候选基因。结论·利用hESC体外分化模型结合高通量多组学测序技术可用于揭示hESC向NPC分化过程中的转录组及染色质可及性的变化规律;该过程中轴突导向、前脑发育、神经元迁移等通路的相关基因表达水平升高,染色质可及性增强。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 神经前体细胞 染色质可及性测序 转录组测序

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梗阻性无精子症显微外科重建策略分析 被引量：5

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作者 李朋 谭广兴 +3 位作者 黄煜华 陈慧兴 夏术阶 李铮 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期420-422,共3页

目的·探讨梗阻性无精子症显微外科重建策略。方法·以182例梗阻性无精子症手术患者为研究对象。首先行输精管道探查,根据术中探查情况行输精管道显微重建术。结果·术中探查证实附睾梗阻86例,输精管梗阻30例,先天性双侧输... 目的·探讨梗阻性无精子症显微外科重建策略。方法·以182例梗阻性无精子症手术患者为研究对象。首先行输精管道探查,根据术中探查情况行输精管道显微重建术。结果·术中探查证实附睾梗阻86例,输精管梗阻30例,先天性双侧输精管精囊缺如48例,睾丸网梗阻1例,射精管梗阻17例;探查后行显微重建吻合术114例。术后患者共随访92例,平均随访时间9个月(3~16个月)。术后复通率为71.7%(66/92),自然受孕率为32.6%(29/89),其中3例未婚。结论·梗阻性无精子症梗阻原因复杂,梗阻部位多变,可根据术前严格评估和术中探查行显微复通手术,进而获得自然妊娠的机会。 展开更多

关键词 梗阻性无精子症 显微重建 自然妊娠

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加德纳菌感染对大鼠睾丸生精小管的影响 被引量：4

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作者 刘春萌 赵文珍 +5 位作者 徐晨 王金妹 王旻 胡燕琴 秦石晓 冯京生 《实用医学杂志》 CAS 2008年第19期3311-3313,共3页

目的:观察加德纳菌感染对大鼠睾丸生精小管的影响。方法:18只雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组膀胱内注射1mL加德纳菌液,对照组膀胱内注射相应的无菌液体培养基1mL,感染21d后,光镜和电镜观察睾丸生精小管的结构变化,流式细胞术... 目的:观察加德纳菌感染对大鼠睾丸生精小管的影响。方法:18只雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组膀胱内注射1mL加德纳菌液,对照组膀胱内注射相应的无菌液体培养基1mL,感染21d后,光镜和电镜观察睾丸生精小管的结构变化,流式细胞术检测生精细胞凋亡情况。结果:在实验组检测到大量凋亡的生精细胞及形态改变的支持细胞,部分生精小管出现生精细胞脱落。结论:加德纳菌感染可引起生精细胞大量凋亡、脱落,支持细胞形态改变,这些变化可能是加德纳菌感染影响睾丸结构和功能的机制之一。 展开更多

关键词 加德那菌.阴道 睾丸 生精细胞 凋亡

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“阻滞型”精子发生障碍的遗传学及其诊疗研究进展 被引量：3

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作者 李铮 许俊伟 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期869-875,共7页

精子发生障碍(生精障碍)是男性不育中的疑难重症,临床发病率高,已成为严重影响我国人口生殖健康和人口安全的重大疾病。但由于生精障碍存在显著临床异质性和遗传异质性,目前尚无统一规范的临床诊疗策略与体系。本团队创新性地将生精障... 精子发生障碍(生精障碍)是男性不育中的疑难重症,临床发病率高,已成为严重影响我国人口生殖健康和人口安全的重大疾病。但由于生精障碍存在显著临床异质性和遗传异质性,目前尚无统一规范的临床诊疗策略与体系。本团队创新性地将生精障碍分为3种亚型:“局灶型”“阻滞型”以及“衰竭型”。其中“阻滞型”生精障碍主要由染色体异常、拷贝数变异、单核苷酸突变等遗传因素导致。本文着重评述“阻滞型”生精障碍的临床分型及遗传病因学研究现状,并结合全外显子测序等技术筛选“阻滞型”生精障碍患者,对“阻滞型”生精障碍的内分泌新辅助治疗、靶向治疗等前沿治疗方案以及结合人工智能的多元精准诊疗体系的建立进行探讨。 展开更多

关键词 精子发生障碍 阻滞型 临床表型 遗传病因学 诊疗体系

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慢病毒负载GFP转染兔脂肪干细胞的效率及毒性评价 被引量：5

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作者 李宏松 徐晨 邹俊 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期439-444,共6页

目的探讨慢病毒负载绿色荧光蛋白(GFP)对兔脂肪干细胞(rADSCs)转染的可行性及稳定性,为rADSCs组织工程化角膜上皮的研究提供可靠的体内外示踪方法。方法以慢病毒作为载体,采用不同感染复数(MOI)慢病毒将GFP基因导入rADSCs,荧光倒置显微... 目的探讨慢病毒负载绿色荧光蛋白(GFP)对兔脂肪干细胞(rADSCs)转染的可行性及稳定性,为rADSCs组织工程化角膜上皮的研究提供可靠的体内外示踪方法。方法以慢病毒作为载体,采用不同感染复数(MOI)慢病毒将GFP基因导入rADSCs,荧光倒置显微镜下观察细胞转染情况,应用MTT法检测慢病毒转染对rADSCs细胞生长的影响,评价细胞毒性。结果当MOI值为50、100、500时,rADSCs均可被成功转染,120 h后转染效率均可达50%以上。当MOI值为50、100时,GFP-慢病毒对rADSCs的生长无明显影响,而MOI值为500时,细胞生长受到明显抑制。结论慢病毒负载GFP可成功导入rADSCs,为进一步对ADSCs组织工程化角膜上皮的研究奠定了良好的实验基础。 展开更多

关键词 脂肪干细胞 毒性评价 绿色荧光蛋白 转染 兔

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EDA基因新剪切突变导致X连锁少汗性外胚层发育不良 被引量：3

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作者 顾本宏 朱晓斌 +10 位作者 朱子珏 田汝辉 李朋 智二磊 姚晨成 王洪 陈慧兴 万众 黄煜华 何祖平 李铮 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期288-292,共5页

目的·检测一X连锁少汗性外胚层发育不良家系EDA基因突变位点。方法·提取先证者及其家系共13位成员外周血基因组DNA,PCR扩增EDA基因编码区的8个外显子及其2端侧翼序列并测序,明确突变位点。结果·先证者及其患病哥哥EDA基... 目的·检测一X连锁少汗性外胚层发育不良家系EDA基因突变位点。方法·提取先证者及其家系共13位成员外周血基因组DNA,PCR扩增EDA基因编码区的8个外显子及其2端侧翼序列并测序,明确突变位点。结果·先证者及其患病哥哥EDA基因6号内含子剪切供体发生T>A突变,而家系无其他外胚层发育不良临床表现成员,均无该位点突变。结论·该家系中IVS 6+2T>A(g.69250372,Xq22.3)突变为剪切致病突变,属国内外首报,是X连锁少汗性外胚层发育不良的新致病突变。该突变可用于遗传咨询和产前诊断,减少出生缺陷。 展开更多

关键词 X连锁少汗性外胚层发育不良 基因突变 EDA基因

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基于单细胞RNA测序解析人与小鼠睾丸中SARS-CoV-2相关受体的时空表达特征 被引量：1

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作者 罗嘉强 赵亮宇 +7 位作者 姚晨成 朱子珏 邢晓宇 李朋 田汝辉 陈慧兴 孙杰 李铮 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期421-426,共6页

目的·基于单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-Seq),分析严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)... 目的·基于单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-Seq),分析严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)受体血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)在人和小鼠睾丸中的时空表达特征。方法·收集生理性各发育阶段的人睾丸组织10例和C57BL/6小鼠睾丸组织9例,用酶消化成单细胞悬液后经scRNA-Seq标准处理程序得到细胞-基因表达矩阵。经过质量控制、数据标准化、批次效应处理和聚类降维后,利用已知的睾丸细胞标志物注释各群细胞,以明确在发育的不同阶段中人和小鼠睾丸中ACE2表达模式和差异。结果·鉴定出人和小鼠均有的睾丸细胞亚群9个,包括3群生殖细胞(精原细胞、精母细胞和精子细胞/精子)和6群体细胞(Sertoli细胞、巨噬细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、Leydig细胞和管周肌样细胞)。从空间分布来看,在成人睾丸中,ACE2主要表达于Sertoli细胞,在Leydig细胞、管周肌样细胞和生殖细胞也有表达。从时间尺度上看,人Sertoli细胞的ACE2转录丰度随着睾丸的发育而增加,青春期后Sertoli细胞中ACE2表达显著高于幼儿期和儿童期(P=0.000)。从小鼠睾丸发育各阶段来看,Ace2表达模式与人体均有显著不同。在5周龄成年C57BL/6小鼠睾丸中,Ace2的转录水平低且主要表达于血管平滑肌细胞(P=0.000),而Sertoli细胞中Ace2阳性细胞数则极少。结论·SARS-CoV-2可能主要通过Sertoli细胞感染人类睾丸,常规C57BL/6小鼠模型不适用于模拟SARS-CoV-2感染对人类睾丸的功能影响。 展开更多

关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2 单细胞RNA测序 血管紧张素转化酶2 病毒性睾丸炎 SERTOLI细胞

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逝者精子冻存的现状与伦理挑战 被引量：3

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作者 马赫 孙红芳 +1 位作者 张建雄 李铮 《医学与哲学》 2019年第24期33-36,共4页

随着辅助生殖技术的发展,逝者精子冻存在技术上可行,然而这类问题却对传统伦理和法律提出了挑战。为逝者手术取精并冻存的最终目的是利用辅助生殖技术让逝者配偶生育子代。但实施逝者精子辅助生殖,逝者的知情同意权便很难得到保障。此外... 随着辅助生殖技术的发展,逝者精子冻存在技术上可行,然而这类问题却对传统伦理和法律提出了挑战。为逝者手术取精并冻存的最终目的是利用辅助生殖技术让逝者配偶生育子代。但实施逝者精子辅助生殖,逝者的知情同意权便很难得到保障。此外,逝者精子冷冻还需综合考虑配偶的生育权和子女利益,不予冷冻逝者精子是否侵犯了配偶生育权,而予以冷冻并行人工授精,是否保护了子女的权益。尚需在争论中提出合理的立法建议,以更好地保障逝者与家属权益。 展开更多

关键词 精子 冷冻保存 辅助生殖技术 死后生殖 伦理困境

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外胚层发育不良分子机制及子代出生缺陷的研究进展 被引量：2

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作者 顾本宏 田汝辉 李铮 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期240-244,共5页

外胚层发育不良(ED)是一组具有一系列外胚层起源器官发育异常的遗传异质性疾病,通常侵犯皮肤、汗腺、毛发、指趾甲和牙齿。此外,外胚层还发育形成中枢神经系统、外周神经系统、眼、耳、鼻以及外分泌腺、乳腺和垂体。ED可导致不同程度的... 外胚层发育不良(ED)是一组具有一系列外胚层起源器官发育异常的遗传异质性疾病,通常侵犯皮肤、汗腺、毛发、指趾甲和牙齿。此外,外胚层还发育形成中枢神经系统、外周神经系统、眼、耳、鼻以及外分泌腺、乳腺和垂体。ED可导致不同程度的出生缺陷,影响子代健康。该文就近年来对ED的分子研究及临床治疗进展作一综述。 展开更多

关键词 外胚层发育不良 出生缺陷 核因子ΚB

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小鼠杀菌性或通透性增强蛋白片段BPI_(889-1497)在大肠杆菌的表达及其抗血清的制备

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作者 李堃 刘悦 徐晨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期964-967,共4页

英国科学家Weiss等1978年首次发现并描述了杀菌性或通透性增强蛋白（bactericidal/permeability increasing protein,BPI）。成熟的BPI蛋白由456个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）大约56 000。BPI蛋白最早在人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒... 英国科学家Weiss等1978年首次发现并描述了杀菌性或通透性增强蛋白（bactericidal/permeability increasing protein,BPI）。成熟的BPI蛋白由456个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）大约56 000。BPI蛋白最早在人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中分离得到。研究表明,BPI在人中性粒细胞中占较大比重,其含量可以达到细胞总蛋白的0.15%～1.00%, 展开更多

关键词 小鼠BPI889-1497蛋白 E.coli BL21(DE3) 多克隆 抗血清

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伐地那非预处理对精子冷冻效果的影响

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作者 卢克敏 邹沙沙 +1 位作者 陈向锋 刘强 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1269-1271,共3页

目的·探索伐地那非预处理对精子冷冻复苏后活力的影响。方法·在上海市人类精子库随机收集30例捐献者的精液标本,并将收集的每例精液平均分成6份,1份用于冷冻前指标测定,其余5份分别用0、0.4、4.0、40.0、400.0μg/mL的伐地那... 目的·探索伐地那非预处理对精子冷冻复苏后活力的影响。方法·在上海市人类精子库随机收集30例捐献者的精液标本,并将收集的每例精液平均分成6份,1份用于冷冻前指标测定,其余5份分别用0、0.4、4.0、40.0、400.0μg/mL的伐地那非孵育5 min。按精液与保护剂2:1的比例添加保护剂,采用一步熏蒸法进行冷冻,冷冻复苏后分别检测每份标本的前向运动精子、精子活力及正常精子形态等参数。结果·复苏后,0、0.4、4.0、40.0、400.0μg/mL伐地那非处理后的前向运动精子百分率分别为(41.47±9.80)%、(42.57±9.60)%、(47.77±8.55)%、(37.27±8.47)%、(26.37±6.99)%。与对照组(0μg/mL伐地那非组)比较,4.0μg/mL伐地那非处理后的精子复苏后活力有显著改善,差异有统计学意义(P=0.034)。结论·适当浓度的伐地那非预处理精液能提高精子冷冻复苏后的活力;然而伐地那非浓度过大,可能对精子有毒害作用。 展开更多

关键词 伐地那非 冷冻保存 精子活力

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小鼠输卵管上皮类器官的构建及表型验证 被引量：2

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作者 吴其谦 胡燕琴 +3 位作者 陈迦勒 李牧辰 赵有淦 伍静文 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期848-859,共12页

目的·构建野生型(wild type,WT)小鼠和miR-34b/c^(−/−)且miR-449^(−/−)双敲除(double knockout,dKO)小鼠输卵管上皮类器官的培养体系,并进行表型验证。方法·利用酶消化法和差速贴壁法分离纯化WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮细胞,... 目的·构建野生型(wild type,WT)小鼠和miR-34b/c^(−/−)且miR-449^(−/−)双敲除(double knockout,dKO)小鼠输卵管上皮类器官的培养体系,并进行表型验证。方法·利用酶消化法和差速贴壁法分离纯化WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮细胞,并利用免疫荧光法鉴定得到的输卵管上皮细胞的纯度;通过计数和直径测量比较WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮类器官数量、生长速度和生长大小;利用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,H-E)染色和透射电子显微镜(透射电镜)对输卵管上皮类器官进行形态和结构观察;采用免疫荧光法观察并统计纤毛细胞和分泌细胞在WT小鼠和dKO小鼠输卵管上皮类器官中的比例;采用免疫组织化学法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting检测分泌细胞、纤毛细胞相关基因在输卵管上皮类器官中的表达。结果·分离纯化得到的输卵管上皮细胞纯度较高。与WT小鼠相比,dKO小鼠输卵管上皮类器官生长更快,体积更大,数量也更多;但dKO小鼠输卵管上皮类器官发育较慢,于培养28 d时才出现上皮内陷,而WT小鼠的类器官于培养16 d时已经出现。H-E染色和透射电镜结果显示输卵管上皮类器官呈现出与在体输卵管类似的结构。免疫荧光检测显示dKO小鼠输卵管上皮类器官的纤毛细胞显著减少而分泌细胞显著增多(均P<0.05)。免疫组织化学法检测结果显示,dKO小鼠输卵管上皮类器官的分子表达模式与在体输卵管组织基本一致,即纤毛细胞标志物乙酰化微管蛋白α(Ac-α-tubulin)、叉头框J1(forkhead box J1,FOXJ1)表达减少,分泌细胞标志物配对盒8(paired box 8,PAX8)表达增加;RT-qPCR结果显示dKO小鼠输卵管上皮类器官中Foxj1和微管蛋白β4A(tubulinβclassⅣa,Tubb4a)的mRNA水平均降低(均P<0.05),而Pax8 mRNA水平升高(P<0.05);Western blotting结果显示,dKO小鼠类器官中FOXJ1的蛋白表达水平显著降低,PAX8表达显著升高(均P<0.05)。结论·研究成功构建WT小鼠和dKO小鼠的输卵管上皮类器官培养体系,该体系可模拟小鼠在体输卵管的表型。 展开更多

关键词 类器官 输卵管 上皮细胞 miR-34 miR-449 基因敲除

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基于CRISPR/Cas9n技术建立携带mT-F2A-EGFP报告系统的小鼠胚胎干细胞系

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作者 王靖怡 王琼 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期417-427,共11页

目的·通过CRISPR/Cas9n(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 nickase)介导的同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)技术在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell... 目的·通过CRISPR/Cas9n(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9 nickase)介导的同源定向修复(homologous-directed repair,HDR)技术在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cell,mESC)的中内胚层关键调控分子T-box转录因子Brachyury(即T基因)末端依次敲入手足口病毒2A(foot-and-mouth disease virus 2A,F2A)和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)以建立T荧光报告细胞系(mTF2A-EGFP)。方法·首先,针对T基因构建特异性单链导向RNA(single guide RNA,sgRNA)质粒和包含F2A-EGFP的供体质粒。利用电穿孔将这2种质粒递送到mESC E14Tg2a(E14)内,通过HDR在T基因末端插入F2A-EGFP。然后,通过药物筛选和基因测序验证所获得的单克隆细胞,并将其诱导形成类胚体(embryonic body,EB)进行分化。通过荧光显微镜和流式细胞技术分别监测mT-F2A-EGFP细胞克隆在分化前后的荧光信号变化,并进行实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)来检测多能性标志基因、中内胚层以及外胚层标志基因的转录水平变化。同时,检测克隆细胞的周期、生长曲线,并利用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)染色检测候选克隆干细胞特性。最后,挑选克隆细胞系T1进行了EB分化。利用流式细胞技术分选出分化细胞群中EGFP荧光表达细胞(EGFP+)和无荧光表达的细胞(EGFP-),并检测各谱系基因的表达情况。结果·EGFP被正确插入到E14细胞的T基因,其荧光强度能正确反映T基因表达水平且未产生明显的不良反应。当T1报告克隆分化时,通过流式细胞技术分选出的包含mT-F2A-EGFP的荧光细胞主要高表达中内胚层标志基因。结论·成功构建携带mT-F2A-EGFP的mESC,可实现对T基因调控程度的快速监测,并实时追踪分化过程中表达T基因标记EGFP的中内胚层细胞。 展开更多

关键词 小鼠胚胎干细胞 CRISPR/Cas9n 中内胚层分化 增强绿色荧光蛋白 报告基因 BRACHYURY 手足口病毒2A

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卡格列净通过RAS和TGF-β1/Smad途径减轻高血压诱导的心肌肥厚和纤维化 被引量：2

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作者 李爱花 王青青 +2 位作者 秦迎春 谢亦璘 严志强 《海南医学院学报》 CAS 2022年第13期966-975,共10页

目的:研究卡格列净通过肾素血管紧张素系统(RAS)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对自发性高血压大鼠(SHR)心室重构的影响。方法:本实验分为正常血压大鼠(WKY)组、SHR组、卡格列净低剂量[SHR-CANA(30 mg/kg)]组及卡格列净高剂量[SHR-CANA(60... 目的:研究卡格列净通过肾素血管紧张素系统(RAS)和转化生长因子-β1(TGF-β1)对自发性高血压大鼠(SHR)心室重构的影响。方法:本实验分为正常血压大鼠(WKY)组、SHR组、卡格列净低剂量[SHR-CANA(30 mg/kg)]组及卡格列净高剂量[SHR-CANA(60 mg/kg)]组,每组8例,采用灌胃法给药,1次/d,连续8周。测定血压(BP)、血糖水平,采用超声心动图评价动物心功能,采用组织形态学评价动物左心室细胞面积。实时定量聚合酶链反应和蛋白印记杂交法检测Ⅰ型胶原(Col1a)、Ⅲ型胶原(Col3a)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、TGF-β1、Smad4、肾素、血管紧张素Ⅱ受体1(AGTR1)和血管紧张素Ⅱ受体2(AGTR2)的表达。结果:给药8周后,SHR-CANA(30 mg/kg)组及SHR-CANA(60 mg/kg)组的心脏体重/体重比(HW/BW)、左心室重量/心脏重量比(LVW/HW)、心肌细胞面积与SHR组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与SHR组相比,SHR-CANA(30 mg/kg)组及SHR-CANA(60 mg/kg)组的血压、血糖和体重明显降低。与SHR组相比,SHR-CANA(30 mg/kg)组及SHR-CANA(60 mg/kg)组Col1a、Col3a、MMP2、TGF-β1、Smad4、Renin、AGTR1表达显著下调,AGTR2表达上调。结论:卡格列净可通过调节RAS和TGF-β1/Smad信号通路改善高血压诱导的心脏重构。 展开更多

关键词 卡格列净 心肌肥厚 心肌纤维化 自发性高血压大鼠

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SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞分化过程中的不同调控作用

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作者 赵冰楠 马双羽 +1 位作者 胥春龙 王琼 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期443-454,共12页

目的·探究转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)家族下游的关键转录因子SMAD蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein)——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化... 目的·探究转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)家族下游的关键转录因子SMAD蛋白(drosophila mothers against decapentaplegic protein)——SMAD2和SMAD3在人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)体外分化过程中的不同作用。方法·在hESC中,通过蛋白质印迹法(Western blotting)检测SMAD2和SMAD3在分化过程中的蛋白表达水平。通过CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)技术构建SMAD2敲除(SMAD2 knockout,SMAD2KO)和SMAD3敲除(SMAD3 knockout,SMAD3KO)的细胞系。利用免疫荧光染色检测SMAD蛋白丢失对多能性因子八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和性别决定区Y框蛋白2(sex determining region Y-box 2,SOX2),神经外胚层(neuroectoderm,NE)标志因子配对盒因子6(paired box 6,PAX6)和性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box 1,SOX1)以及中内胚层(mesendoderm,ME)标志因子SOX17的表达影响;同时使用流式细胞术鉴定SMAD2敲除或SMAD3敲除对NE标志因子PAX6以及ME标志因子SOX17、脱中胚蛋白(eomesodermin,EOMES)和C-X-C模体趋化因子受体4(C-X-C motif chemokine receptor 4,CXCR4)表达的影响。在SMAD2KO和SMAD3KO细胞中分别过表达SMAD2和SMAD3质粒,通过Western blotting检测SMAD2和SMAD3蛋白回补的效果,并利用实时定量PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测SMAD蛋白回补后对分化过程中的ME关键因子EOMES、叉头框转录因子A2(forkhead box A2,FOXA2)和GSC同源盒(goosecoid homeobox,GSC)表达的影响。结果·虽然SMAD2和SMAD3的蛋白序列较为相似,但是SMAD2才是hESC中主要表达的蛋白因子。免疫荧光染色结果表明,SMAD2敲除和SMAD3敲除并不会影响hESC多能性因子OCT4和SOX2的表达;同时流式细胞术发现,SMAD蛋白的缺失也不会影响NE标志因子PAX6和SOX1的表达。SMAD3敲除对hESC向ME分化没有显著的影响,而SMAD2敲除严重阻碍了hESC表达ME标志因子SOX17、EOMES和CXCR4。通过qRT-PCR检测显示在SMAD2KO细胞中过表达外源性SMAD2可以有效地恢复ME基因EOMES、FOXA2和GSC的表达,而在SMAD3KO细胞中回补SMAD3对这些ME基因的表达无影响。结论·SMAD2和SMAD3在hESC向ME分化过程中的调控作用不同。SMAD2而非SMAD3是决定hESC表达ME基因的关键。 展开更多

关键词 人胚胎干细胞 中内胚层分化 SMAD2 SMAD3

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基于基因及调控区进化保守性评估细胞和组织发育潜能的定量分析

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作者 王志明 童冉 +6 位作者 杨晨 焦慧媛 王一好 李林颖 王烨欣 张丰 李令杰 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1384-1395,共12页

目的在DNA序列的保守度层面探讨物种进化与发育之间的关系及其内在规律。方法分析编码基因的氨基酸序列在100个物种中的保守程度,并建立保守率(conservation rate,CR)这一量化基因进化保守程度的指标,进一步使用胚胎干细胞通路特征基因... 目的在DNA序列的保守度层面探讨物种进化与发育之间的关系及其内在规律。方法分析编码基因的氨基酸序列在100个物种中的保守程度,并建立保守率(conservation rate,CR)这一量化基因进化保守程度的指标,进一步使用胚胎干细胞通路特征基因验证保守率与发育潜能的关系。分析早期三胚层(内胚层、中胚层、外胚层)及其对应的成熟器官(肝脏、心脏和大脑等)的转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)数据,寻找差异表达基因,研究其保守性特点。收集人类早期胚层和成熟器官H3组蛋白第27位赖氨酸乙酰化(histone H3 acetylated at lysine 27,H3K27ac)这一增强子表观遗传标志物的染色质免疫共沉淀测序(chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-seq)数据,寻找增强子位点,使用ROSE程序鉴定各种细胞和组织中的超级增强子(super enhancer,SE)。使用基因通路富集分析研究超级增强子调控的基因与对应的细胞特征的身份相关性,以明确所鉴定的超级增强子是否符合已有研究报道的特点。使用PhastCons程序计算非编码调控区的DNA保守性评分(conservation score,CS),研究其与发育潜能的关系。结果在基因编码区,成功建立保守率这一对基因保守程度进行量化的指标。早期三胚层和成熟器官的基因表达数据分析显示:保守率越高的基因与干性和早期发育过程相关性越大,基因保守率指标能区分出发育前后的组织差异。在基因非编码区,发现调控区的保守性也与发育具有相关性:发育早期三胚层的超级增强子序列的保守性评分显著高于对应的成熟器官的超级增强子序列;但细胞特异的普通增强子(typical enhancer,TE)没有呈现出这样的趋势。结论随着发育进行,在基因编码区特异表达的基因在进化中的保守率下降,非编码调控区的超级增强子DNA保守性评分下降。 展开更多

关键词 胚胎发育 物种进化 超级增强子 发育遗传学 DNA保守性

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