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小鼠样本的不同储存条件对流式细胞术检测抗体荧光值和阳性细胞百分比的影响
1
作者
魏冬梅
郭夏宁
+5 位作者
郭娜
徐浩
吕明华
贠丹丹
朱震宇
栾晶
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第10期2064-2072,共9页
目的:评估短期储存条件(新鲜、−80℃冻存7 d及4℃保存7 d)对小鼠外周血单个核细胞(periph⁃eral blood mononuclear cells,PBMCs)和脾细胞流式细胞术检测抗体中位数荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)及免疫细胞亚群百分比的...
目的:评估短期储存条件(新鲜、−80℃冻存7 d及4℃保存7 d)对小鼠外周血单个核细胞(periph⁃eral blood mononuclear cells,PBMCs)和脾细胞流式细胞术检测抗体中位数荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)及免疫细胞亚群百分比的影响。方法:取6只雄性昆明小鼠PBMCs和脾细胞悬液,均分成3组,在不同处理条件下检测,比较抗体MFI及单核细胞亚群(Ly-6c^(low)/Ly-6c^(medium)/Ly-6c^(high))、巨噬细胞(M1/M2)和树突状细胞等百分比的差异。结果:抗体MFI值变化具有抗体特异性和组织特异性。部分抗体(如PBMCs中的CD45和F4/80,脾脏中的CD115、Ly-6c、F4/80、CD80和MHC-II)在−80℃冻存后MFI与新鲜组接近,反之(如PBMCs中的7-AAD、CD115、Ly-6c和MHC-II,脾脏中的CD11b、CD206和CD11c)则在4℃保存后更接近新鲜组。多数检测抗体在储存后MFI显著改变。两种储存条件均导致PBMCs和脾脏活细胞百分比显著下降(PBMCs中−80℃组最低;脾脏中两储存组均下降约50%)。PBMCs中总单核细胞、Ly-6c^(medium)/Ly-6c^(high)单核细胞、总巨噬细胞和树突状细胞百分比在4℃保存组最接近新鲜组。M1巨噬细胞和树突状细胞的百分比在两种储存条件组均显著低于新鲜组(P<0.05)。脾脏中总单核细胞、Ly-6c^(medium)单核细胞、Ly-6c^(high)单核细胞、总巨噬细胞、M1/M2型巨噬细胞和树突状细胞的百分比在三组间均无显著差异(P>0.05),Ly-6c^(low)单核细胞的百分比在新鲜样本组与−80℃冻存7 d组间无显著差异(P>0.05),但4℃保存7 d组相较于新鲜样本组则显著下降(P<0.05)。结论:样本储存条件显著影响PBMCs和脾细胞的流式检测结果(MFI及细胞亚群百分比),且存在组织特异性。PBMCs中若重点关注免疫细胞亚群百分比(尤其是单核/巨噬/树突状细胞),4℃保存7 d更优;若需检测特定抗体(如CD45和F4/80)的MFI,−80℃冻存可能更佳。脾细胞中若需使多数抗体MFI值或关键亚群(如总单核/Ly-6c^(high)/总巨噬/树突状细胞)百分比接近新鲜样本,4℃保存7 d效果较好;若需检测特定抗体(如CD115和Ly-6c等)的MFI,−80℃冻存更优。
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关键词
流式细胞术
外周血单个核细胞
脾细胞
储存条件
中位数荧光强度
免疫细胞亚群
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职称材料
题名
小鼠样本的不同储存条件对流式细胞术检测抗体荧光值和阳性细胞百分比的影响
1
作者
魏冬梅
郭夏宁
郭娜
徐浩
吕明华
贠丹丹
朱震宇
栾晶
机构
陕西
科
技大学化学与化工学院天然产物稳定同位素组学实验室
陈志南院士工作站
西安医学院基础医学部
上海市浦东医院风湿免疫科
出处
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025年第10期2064-2072,共9页
基金
国家自然科学基金青年项目(No.82302032)
陕西省科技厅创新能力支撑计划科技资源开放共享平台资助项目(No.2023-CX-PT-03)
+1 种基金
西安医学院科技创新团队资助项目(No.2021TD05)
西安医学院博士启动资助项目(No.2020DOC22)。
文摘
目的:评估短期储存条件(新鲜、−80℃冻存7 d及4℃保存7 d)对小鼠外周血单个核细胞(periph⁃eral blood mononuclear cells,PBMCs)和脾细胞流式细胞术检测抗体中位数荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)及免疫细胞亚群百分比的影响。方法:取6只雄性昆明小鼠PBMCs和脾细胞悬液,均分成3组,在不同处理条件下检测,比较抗体MFI及单核细胞亚群(Ly-6c^(low)/Ly-6c^(medium)/Ly-6c^(high))、巨噬细胞(M1/M2)和树突状细胞等百分比的差异。结果:抗体MFI值变化具有抗体特异性和组织特异性。部分抗体(如PBMCs中的CD45和F4/80,脾脏中的CD115、Ly-6c、F4/80、CD80和MHC-II)在−80℃冻存后MFI与新鲜组接近,反之(如PBMCs中的7-AAD、CD115、Ly-6c和MHC-II,脾脏中的CD11b、CD206和CD11c)则在4℃保存后更接近新鲜组。多数检测抗体在储存后MFI显著改变。两种储存条件均导致PBMCs和脾脏活细胞百分比显著下降(PBMCs中−80℃组最低;脾脏中两储存组均下降约50%)。PBMCs中总单核细胞、Ly-6c^(medium)/Ly-6c^(high)单核细胞、总巨噬细胞和树突状细胞百分比在4℃保存组最接近新鲜组。M1巨噬细胞和树突状细胞的百分比在两种储存条件组均显著低于新鲜组(P<0.05)。脾脏中总单核细胞、Ly-6c^(medium)单核细胞、Ly-6c^(high)单核细胞、总巨噬细胞、M1/M2型巨噬细胞和树突状细胞的百分比在三组间均无显著差异(P>0.05),Ly-6c^(low)单核细胞的百分比在新鲜样本组与−80℃冻存7 d组间无显著差异(P>0.05),但4℃保存7 d组相较于新鲜样本组则显著下降(P<0.05)。结论:样本储存条件显著影响PBMCs和脾细胞的流式检测结果(MFI及细胞亚群百分比),且存在组织特异性。PBMCs中若重点关注免疫细胞亚群百分比(尤其是单核/巨噬/树突状细胞),4℃保存7 d更优;若需检测特定抗体(如CD45和F4/80)的MFI,−80℃冻存可能更佳。脾细胞中若需使多数抗体MFI值或关键亚群(如总单核/Ly-6c^(high)/总巨噬/树突状细胞)百分比接近新鲜样本,4℃保存7 d效果较好;若需检测特定抗体(如CD115和Ly-6c等)的MFI,−80℃冻存更优。
关键词
流式细胞术
外周血单个核细胞
脾细胞
储存条件
中位数荧光强度
免疫细胞亚群
Keywords
flow cytometry
peripheral blood mononuclear cells
splenic cells
storage conditions
median fluorescence intensity
immune cell subsets
分类号
Q95-336 [生物学—动物学]
R392.12 [医药卫生—免疫学]
Q2-33 [生物学—细胞生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠样本的不同储存条件对流式细胞术检测抗体荧光值和阳性细胞百分比的影响
魏冬梅
郭夏宁
郭娜
徐浩
吕明华
贠丹丹
朱震宇
栾晶
《中国病理生理杂志》
北大核心
2025
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