实验动物质量监督抽查运作管理 被引量：1

1

作者 高诚 刘雄伟 +2 位作者 阵鸿书 沈志敏 王胜昌 《中国实验动物学杂志》 2001年第4期252-252,共1页

关键词 运作管理 监督抽查 上海市质量技术监督局 销售 扩大 专项监督 科学技术委员会 实验动物 联合 物质量

在线阅读 下载PDF 职称材料

两种方法对上海及周边地区实验大小鼠螺杆菌携带情况的调查 被引量：3

2

作者 丁聪 冯洁 +2 位作者 谢建云 高诚 胡建华 《中国比较医学杂志》 CAS 2011年第12期66-69,78,共5页

目的了解上海及周边地区实验小鼠、大鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物等级及监测标准的制定提供参考和依据。方法 PCR法共检测了352只小鼠(清洁级101只,SPF级251只),101只大鼠(清洁级69只,SPF级32只);ELISA法共检测了88只小鼠(清洁级26... 目的了解上海及周边地区实验小鼠、大鼠螺杆菌携带情况,为我国实验动物等级及监测标准的制定提供参考和依据。方法 PCR法共检测了352只小鼠(清洁级101只,SPF级251只),101只大鼠(清洁级69只,SPF级32只);ELISA法共检测了88只小鼠(清洁级26只,SPF级62只),165只大鼠(清洁级84只,SPF级81只);并对其中88只小鼠、101只大鼠的PCR和ELISA法阳性检测率进行比较。结果 PCR法检测小鼠平均阳性率为35.8%(126/352),清洁级阳性率为51.5%(52/101),SPF级阳性率为29.5%(74/251);大鼠平均阳性率为70.3%(71/101),清洁级阳性率为69.6%(48/69),SPF级阳性率为71.9%(23/32);ELISA法检测小鼠平均阳性率为15.9%(14/88),清洁级阳性率为19.2%(5/26),SPF级阳性率为14.5%(9/62);大鼠平均阳性率为52.7%(87/165),清洁级53.6%(45/84),SPF级51.9%(42/81);88只小鼠PCR法阳性检测率为72.7%(64/88),ELISA法阳性检测率为15.9%(14/88);101只大鼠PCR法阳性检测率为70.3%(71/101),ELISA法阳性检测率为49.5%(50/101)。结论上海及周边地区实验大鼠、小鼠中皆存在着不同程度的螺杆菌感染,两种方法阳性检出率比较结果表明回盲部内容物PCR法较检测血清中抗螺杆菌抗体ELISA法更为敏感。 展开更多

关键词 螺杆菌 PCR ELISA 流行病学调查

在线阅读 下载PDF 职称材料

实验大鼠和小鼠多种细菌PCR检测与分析 被引量：6

3

作者 冯洁 谢建云 +3 位作者 魏晓锋 冯丽萍 张泉 高诚 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期89-93,116,共6页

目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848... 目的调查上海市实验动物生产设施大鼠、小鼠细菌携带状况。方法比较国内外实验动物细菌监测方案,选取螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌和肺炎克雷伯杆菌作为检测项目,分别于2014年和2016年收集样品共计848份,采用PCR方法对上述6种病原体进行检测。结果 SPF级设施均无金黄色葡萄球菌污染,清洁级设施2014年无肺炎克雷伯杆菌污染,其它病原体在不同级别设施内均有不同程度的污染,所有清洁级设施均存在螺杆菌和牛棒状杆菌污染。螺杆菌、啮齿柠檬酸杆菌和牛棒状杆菌在不同级别动物上均检出阳性。螺杆菌、绿脓杆菌阳性率呈下降趋势,而啮齿柠檬酸杆菌、牛棒状杆菌、肺炎克雷伯杆菌阳性率则呈上升趋势。结论本研究全面、系统地分析了上海地区实验大鼠、小鼠细菌携带状况,为提高实验动物质量和饲养管理水平起促进作用,为我国实验动物国家标准的修订和完善提供依据和参考。 展开更多

关键词 大鼠 小鼠 细菌 PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

啮齿动物螺杆菌多重PCR检测方法的建立 被引量：4

4

作者 李瑞娇 冯洁 +2 位作者 谢建云 胡建华 高诚 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第12期35-40,共6页

目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp... 目的建立一种可同时检测肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌的多重PCR方法。方法根据已公布的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌16SrRNA基因序列设计三对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化。结果三对引物能分别扩增出特异性的417 bp、364 bp、324 bp目的条带。最佳退火温度为52℃,镁离子浓度为2.0mmol/L,dNTP浓度为200μmol/L,引物浓度为0.625μmol/L。在此条件下多重PCR同时检测的肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌敏感度均为10 fg。结论本实验建立的多重PCR是一种敏感、特异、高效的方法,为同时检测啮齿动物中肝、胆汁、啮齿类三种螺杆菌奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 肝螺杆菌 胆汁螺杆菌 啮齿类螺杆菌 多重PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

实验大鼠、实验小鼠肠道鞭毛虫种类和检索 被引量：3

5

作者 高诚 符杰 王胜昌 《中国兽医寄生虫病》 2000年第2期9-11,共3页

对普通级 SD大鼠和 KM小鼠肠道内鞭毛虫分别作了观察 ,从大鼠检出 1 0种肠道鞭毛虫 :鼠唇鞭毛虫 ( Chilomastix bettencourti)、人肠滴虫 ( Enteromonas hominis)、西蒙氏贾第虫( Giardia simoni)、鼠六鞭虫 ( H examita muris)、似单... 对普通级 SD大鼠和 KM小鼠肠道内鞭毛虫分别作了观察 ,从大鼠检出 1 0种肠道鞭毛虫 :鼠唇鞭毛虫 ( Chilomastix bettencourti)、人肠滴虫 ( Enteromonas hominis)、西蒙氏贾第虫( Giardia simoni)、鼠六鞭虫 ( H examita muris)、似单尾滴虫 ( Monocercomonoidies sp)、人五毛滴虫( Pentatrichomonas hominis)、曲滴虫 ( Retortamonas sp)、田鼠四毛滴虫 ( Tetratrichomonas microti)、微小三毛滴虫 ( Tritrichomonasminuta)和鼠三毛滴虫 ( Tritrichomonasmuris)。从小鼠检出 8种肠道鞭毛虫 :鼠唇鞭毛虫 ( Chilomastix bettencourti)、鼠贾第虫 ( Giardia muris)、鼠六鞭毛虫 ( H examitamuris)、鼠八鞭毛虫 ( Octomitus pulcher)、人五毛滴虫 ( Pentatrichomonas hominis)、田鼠四毛滴虫( Tetratrichomonas microti)、微小三毛滴虫 ( Tritrichomonas minuta)、鼠三毛滴虫 ( Tritrichomonasmuris)。 展开更多

关键词 大鼠肠道鞭毛虫 小鼠肠道鞭毛虫 种类 检索

在线阅读 下载PDF 职称材料

培养法和 PCR法用于实验大、小鼠细菌检测的比较分析 被引量：9

6

作者 冯洁 谢建云 +2 位作者 冯丽萍 魏晓锋 高诚 《中国比较医学杂志》 北大核心 2015年第8期23-26,共4页

目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422... 目的比较培养法和PCR法对实验大、小鼠的细菌检测效果。方法分别采用传统细菌分离培养结合生化鉴定方法和PCR方法,对78只SPF级大鼠和422只SPF级小鼠进行检测,对两种方法的检测结果进行比较分析。结果 78只SPF级大鼠均未检测出阳性。422只SPF级小鼠,培养法检测阳性率7.11%(30/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌22只,肺炎克雷伯杆菌2只。PCR法检测阳性率7.58%(32/422),其中金黄色葡萄球菌10只,绿脓杆菌25只,肺炎克雷伯杆菌2只。结论 PCR法的敏感性高于培养法,操作简便、快捷,适用于实验动物细菌的快速诊断和大规模的质量筛查。 展开更多

关键词 培养法 PCR法 实验动物 细菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点 被引量：3

7

作者 倪丽菊 潘漪清 +1 位作者 谢建云 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第3期186-192,共7页

目的观察四类东方田鼠在10个同工酶与异构蛋白生化基因位点上的基因分布特征，以研究它们间的遗传关系。方法应用乙酸纤维素膜电泳对四类东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点进行测定分析。结果与结论黑龙江小体型东方田鼠与其他三... 目的观察四类东方田鼠在10个同工酶与异构蛋白生化基因位点上的基因分布特征，以研究它们间的遗传关系。方法应用乙酸纤维素膜电泳对四类东方田鼠的同工酶与异构蛋白生化基因位点进行测定分析。结果与结论黑龙江小体型东方田鼠与其他三类东方田鼠的电泳结果差异较大，在6个位点上都存在其所特有的等位基因，并且在其中的3个位点上它的基因型与其他三类鼠完全不同；湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠三者间的遗传距离在0．0633-0．2107之间，而黑龙江小体型东方田鼠与其他三类鼠的遗传距离在0．7068～0．8953之间；UPGMA聚类分析显示，湖南、宁夏和黑龙江大体型东方田鼠聚为一类，亲缘关系较近，而黑龙江小体型东方田鼠单独为一类，与其他三种鼠的亲缘关系均相对较远。 展开更多

关键词 东方田鼠 电泳 醋酸纤维素 基因 遗传特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

肝螺杆菌LAMP快速检测方法的建立及初步应用 被引量：5

8

作者 冯洁 张泉 +4 位作者 钱淼 谢建云 胡建华 高诚 高崧 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期50-55,共6页

根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86... 根据肝螺杆菌fla B基因保守区域设计一组特异性引物,经过条件优化、特异性和敏感性分析,成功建立了肝螺杆菌LAMP快速检测方法。结果显示,建立的LAMP扩增方法仅能检测出肝螺杆菌,其他常见细菌未见特异性扩增。检出肝螺杆菌最低模板量为86.9fg/L,是普通PCR所需模板量的1/10。本研究建立的LAMP快速检测方法具备操作简单、特异性好、灵敏度高的优点,结果易于观察,对仪器设备要求低,适宜推广应用。 展开更多

关键词 肝螺杆菌 环介导等温扩增 检测

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ⅰ型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立 被引量：4

9

作者 孙凤萍 高骏 +2 位作者 胡建华 王胜昌 高诚 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期70-73,共4页

采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异... 采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒感染提供了一条方便的途径。 展开更多

关键词 鸭病毒性肝炎 间接ELISA 蔗糖密度梯度离心

在线阅读 下载PDF 职称材料

啮齿柠檬酸杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：2

10

作者 冯洁 谢建云 +3 位作者 张泉 魏晓锋 胡建华 高诚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期393-397,共5页

为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的C.rodentium esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度... 为建立快速检测啮齿柠檬酸杆菌(C.rodentium)esp B基因的方法,本研究根据Gen Bank中登录的C.rodentium esp B基因序列设计1对特异性引物,建立了C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法。结果显示,在102拷贝/μL^108拷贝/μL浓度范围内标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系。该方法仅对C.rodentium进行特异性扩增,而对牛棒状杆菌、鼠伤寒沙门菌、嗜肺巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯杆菌扩增结果均为阴性,具有良好的特异性。其检测灵敏度可达24拷贝/μL。组内和组间试验变异系数均小于1%,重复性良好。临床样品初步应用结果显示,荧光定量PCR阳性检出率为56.36%(31/55),常规PCR阳性检出率为30.91%(17/55),二者符合率为74.55%。本研究建立的C.rodentium SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法为实验动物C.rodentium的检测和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多

关键词 啮齿柠檬酸杆菌 SYBR Green I 荧光定量PCR

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠肝炎病毒N基因的原核表达和免疫活性初步分析 被引量：1

11

作者 周艳 胡建华 +1 位作者 高诚 王宗耀 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期265-269,共5页

目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目... 目的对小鼠肝炎病毒(mouse hapetitis virus)A59毒株核蛋白(N)基因进行了克隆、表达和重组蛋白的免疫活性分析。方法根据GenBank公布的MHV-A59 N基因序列(AY700211),设计了一对特异性引物,通过RT-PCR扩增出N基因的主要抗原片段NS,将目的片段纯化后与pGEM-T-easy载体连接得到重组质粒pTN,双酶切回收目的基因片段克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组质粒pGEX-NS,转化大肠杆菌BL21,用IPTG进行了诱导表达。对表达裂解物进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表达产物相对分子质量约56×103与预期相符;能与MHV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的NP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测小鼠肝炎病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠肝炎病毒 N基因 克隆 原核表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

东方田鼠非酒精性脂肪肝模型的建立 被引量：8

12

作者 杨玉琴 冯洁 +6 位作者 柏熊 沈志敏 刘雄伟 高捷 谢建云 胡建华 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第2期34-38,F0002,共6页

目的建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型,并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只,随机分为2组,模型组饲喂高脂肪料,对照组饲喂高纤维料,分别于第2、4、6、8、12周处死,称量体重... 目的建立东方田鼠非酒精性脂肪肝模型,并观察测定其肝指数、病理、血清生化指标的动态变化。方法选取6周龄湖南洞庭湖种群雄性东方田鼠70只,随机分为2组,模型组饲喂高脂肪料,对照组饲喂高纤维料,分别于第2、4、6、8、12周处死,称量体重及肝重,计算肝指数,采血检测东方田鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、r-谷氨酰转移酶(r-GT)、胆碱酯酶(CHE)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、葡萄糖(GLU)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL),并取肝脏HE染色后做病理学观察。结果与对照组相比,模型组6周时肝脏出现了典型的脂肪肝特征,肝重和肝指数都明显升高(P<0.05),血清ALT、AST、r-GT、CHE、TC、FFA、GLU和LDL都明显升高(P<0.05),HDL和TG均明显降低(P<0.05)。镜检观察到模型组田鼠肝细胞逐渐呈现弥漫性脂肪变性,6周时大范围出现脂滴,8周时肝内出现弥漫性大脂肪滴,12周后出现炎细胞的浸润。结论采用高脂饲料成功诱发东方田鼠非酒精性脂肪肝,可为研究非酒精性脂肪肝的发病机制和药物干预提供新的模型。 展开更多

关键词 东方田鼠 非酒精性脂肪肝 模型

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立 被引量：1

13

作者 周艳 胡建华 +1 位作者 高诚 周洁 《中国比较医学杂志》 CAS 2008年第11期39-43,共5页

目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。... 目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠肝炎病毒 重组N蛋白 间接ELISA

在线阅读 下载PDF 职称材料

犬细小病毒核酸诊断方法的建立和应用 被引量：4

14

作者 邵伟娟 谢建云 +1 位作者 胡建华 高诚 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第1期9-11,共3页

目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法(PCR方法)并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物,以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板,犬细小病毒扩增出221bp的特异带,将PCR产物连接到pMD18_T Vecter... 目的建立犬细小病毒的核酸诊断方法(PCR方法)并应用于临床诊断。方法根据犬细小病毒VP2基因序列设计引物,以犬细小病毒标准株、犬传染性肝炎病毒和正常增殖细胞DNA为模板,犬细小病毒扩增出221bp的特异带,将PCR产物连接到pMD18_T Vecter,转化大肠杆菌JM109菌株。重组质粒经测序并经blast比较,与GenBank中已登录的犬细小病毒VP2基因序列进行比较。同时将建立的PCR方法应用于30份犬粪便和病犬组织的检测,并测序。结果PCR产物测得的序列与GenBank的基因序列同源性为100%,粪便检测均无犬细小病毒的特异带,从病犬组织中有6份样品扩增出221bp的特异带,经测序比较,同源率为100%。结论建立了犬细小病毒的PCR检测方法,并能应用于临床诊断。 展开更多

关键词 犬细小病毒 聚合酶链反应 临床诊断

在线阅读 下载PDF 职称材料

仙台病毒F基因的克隆及原核表达

15

作者 王宗耀 王胜昌 +1 位作者 胡建华 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第6期430-435,共6页

目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入... 目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入pMD-18-T载体中,鉴定正确后克隆入pQE31原核表达载体中,将鉴定正确的pQE31-FP(S)转化大肠埃希菌M15,IPTG诱导表达,对大肠埃希菌裂解物进行SDS-PAGE和Western-blot验证。结果大肠埃希菌表达的FP(S)相对分子质量约26×103,与预期相符;能与SeV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的FP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测仙台病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 仙台病毒 F基因 克隆 诱导表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

猪副粘病毒间接ELISA方法的建立

16

作者 孙凤萍 胡建华 +5 位作者 高骏 吴祖立 李春华 邵伟娟 谢建云 高诚 《上海农业学报》 CSCD 2007年第4期34-37,共4页

以临床分离的猪副粘病毒作为抗原,通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,再经过差速离心纯化后作为ELISA包被抗原,建立了猪副粘病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断新型猪传染病——猪副粘... 以临床分离的猪副粘病毒作为抗原,通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,再经过差速离心纯化后作为ELISA包被抗原,建立了猪副粘病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断新型猪传染病——猪副粘病毒(PPMV)感染提供了便利的途径。 展开更多

关键词 猪副粘病毒 间接ELISA量

在线阅读 下载PDF 职称材料

PEPCK不同启动子调控报告基因表达效率的比较

17

作者 王学斌 冯洁 +2 位作者 杨玉琴 谢建云 陈国宏 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期225-228,共4页

目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中... 目的构建两种不同的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)基因启动子调控报告基因表达质粒,比较该启动子在各种细胞系中的表达效率。方法采用PCR克隆大鼠PEPCK启动子1323 bp和560 bp两条片段,将两个PEPCK启动子片段插入pGL4.26-Luc2报告质粒中,将重组质粒转染到肝脏细胞系和脂肪细胞系,以非脂肪或肝脏细胞系做对照,比较PEPCK驱动荧光素酶表达效率。结果通过酶切鉴定及基因测序,证明pGL4.26-PEPCK-Luc2荧光素酶表达质粒构建成功,且能够在体外表达荧光素酶。结论两种同片段的PEPCK启动子在各细胞系中的表达效率差异无显著性。 展开更多

关键词 重组质粒 表达效率 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶

在线阅读 下载PDF 职称材料

东方田鼠部分BAC文库的微卫星筛选 被引量：1

18

作者 汤敏 倪丽菊 +3 位作者 高骏 肖君华 胡建华 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第3期50-55,共6页

目的从东方田鼠的部分BAC文库中筛选微卫星。方法应用非放射性的菌落杂交方法和磁珠富集法从东方田鼠的BAC文库中筛选高质量的微卫星标记。结果以地高辛标记的寡聚核苷酸(CA)20为探针,通过菌落杂交法从136个东方田鼠BAC克隆中筛选出杂... 目的从东方田鼠的部分BAC文库中筛选微卫星。方法应用非放射性的菌落杂交方法和磁珠富集法从东方田鼠的BAC文库中筛选高质量的微卫星标记。结果以地高辛标记的寡聚核苷酸(CA)20为探针,通过菌落杂交法从136个东方田鼠BAC克隆中筛选出杂交信号最强的20个阳性克隆。再将这20个阳性克隆分别通过链霉亲和素磁珠法构建亚克隆文库,从中选取400个经PCR鉴定为阳性的亚克隆进一步测序分析,共得到220个微卫星序列,阳性率55%。选取重复次数高,侧翼序列完整的微卫星序列设计74对引物,共有35对引物能扩增出清晰的条带,其中16对引物具有多态性。结论成功且高效地从阳性BAC克隆中筛选出微卫星序列,这些微卫星和阳性BAC克隆可用于后续的定位研究。 展开更多

关键词 东方田鼠 BAC文库 微卫星 菌落杂交 链霉亲和素磁珠

在线阅读 下载PDF 职称材料

小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：3

19

作者 周洁 赵莉 +1 位作者 胡建华 高诚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期841-843,共3页

目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb... 目的:制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法:以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系。并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定。结果:共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为κ型。经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应。结论:成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠肝炎病毒 重组N蛋白 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

东方田鼠乳酸脱氢酶同工酶的研究 被引量：15

20

作者 谢建云 潘漪清 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第4期221-223,共3页

目的　研究乳酸脱氢同工酶在 3种东方田鼠不同器官的分布。方法　以大鼠和小鼠作对照 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对 3个不同地区的东方田鼠 (Microtusfortis)血清、红细胞、肝脏、肾脏、肺中乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶进行分析。结果　东方田... 目的　研究乳酸脱氢同工酶在 3种东方田鼠不同器官的分布。方法　以大鼠和小鼠作对照 ,用聚丙烯酰胺凝胶电泳对 3个不同地区的东方田鼠 (Microtusfortis)血清、红细胞、肝脏、肾脏、肺中乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶进行分析。结果　东方田鼠血浆中只有LDH5,血清中湖南洞庭湖地区、宁夏青铜峡地区的东方田鼠也只有LDH5,而东北地区的东方田鼠则含有LDH1 和LDH5,3个地区的东方田鼠肾脏和肺中都有 5种LDH同工酶 ,肝脏中除东北地区的东方田鼠含 5种LDH同工酶外 ,其余两种东方田鼠均以LDH5为主 (LDH5占 95 %以上 )。 展开更多

关键词 东方田鼠 LDH同工酶 乳酸脱氢酶同工酶 肾脏 血清 肝脏 血浆 乳酸脱氢酶(LDH) 酶谱 器官

在线阅读 下载PDF 职称材料