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多肽抗原检测淋球菌抗体ELISA法的建立及应用 被引量:7
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作者 金怡 俞炳耀 +2 位作者 甄子刚 盛婪 周文达 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2001年第6期515-516,529,共3页
目的建立多肽抗原检测淋球菌抗体的ELISA方法。 方法用固相合成肽方法合成 2个淋球菌多肽抗原 ,建立测定淋球菌抗体的酶免疫测定 ,并对 89份正常人血清和 47份淋病患者血清进行检测。 结果批内测定变异系数为 7 1% ;批间测定变异系数... 目的建立多肽抗原检测淋球菌抗体的ELISA方法。 方法用固相合成肽方法合成 2个淋球菌多肽抗原 ,建立测定淋球菌抗体的酶免疫测定 ,并对 89份正常人血清和 47份淋病患者血清进行检测。 结果批内测定变异系数为 7 1% ;批间测定变异系数为 10 7%。与金标记的试剂盒平行检测临床标本符合性良好。 结论该方法操作简单 ,试剂稳定 ,已制备成试剂盒在国内应用 。 展开更多
关键词 淋球菌 ELISA 多肽抗原
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人凝血因子ⅧcDNA在小鼠体内的转染与表达 被引量:3
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作者 康文英 王鸿利 +7 位作者 王红 王学锋 王从珠 傅启华 丁秋兰 武文漫 方怡 王振义 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期188-193,共6页
本研究观察逆转录病毒载体和聚酰胺 胺型 (PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因在小鼠体内的转染和表达 ,并与体外转染方法作比较。应用含B区缺失 ( 76 0aa- 16 39aa)人FⅧcDNA(FⅧBDcDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表... 本研究观察逆转录病毒载体和聚酰胺 胺型 (PAMAM)树枝状聚合物介导的人凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因在小鼠体内的转染和表达 ,并与体外转染方法作比较。应用含B区缺失 ( 76 0aa- 16 39aa)人FⅧcDNA(FⅧBDcDNA)的以逆转录病毒为框架的重组表达质粒载体 pLNC FⅧBD包装成为逆转录病毒LNC FⅧBD ,exvivo转染小鼠骨髓基质细胞 ,同时将 pLNC FⅧBD与PAMAM树枝状聚合物按照 1∶15混合以形成复合体PAMAM pLNC FⅧBD进行小鼠invivo转染。分别于注射后第 2 4 ,4 8小时 ,第 1,2 ,3,4周取血 ,分离血浆 ,采用一期法测定人FⅧ活性 (FⅧc) ,ELISA法测定人FⅧ抗原 (FⅧAg) ,并采用Bethesdainhibitorassay测定人FⅧ抗体 ;同时取脏器肝、脾、肺、肾提取RNA ,进行RT PCR ,观察各组织的转录 ,并用苏木素 伊红染色法观察各组织的形态学改变。结果表明 ,逆转录病毒转染人FⅧ基因的骨髓基质细胞输入体内后 ,可以在体内继续表达人FⅧ ,并且能有效地分泌至血液中。宿主小鼠体内可检测到的人FⅧ表达持续 3周以上 ,注射后第 2 4小时表达最高水平 ,人FⅧAg平均为 8.6ng/ml,此后人FⅧ抗体逐渐生成 ,人FⅧAg水平渐低 ,于注射后第 4周不再能测出人FⅧAg。注射复合体PAMAM pLNC FⅧBD在体内转染后 ,获得了短暂的人FⅧ生理水平的表达 ,在注射? 展开更多
关键词 逆转录病毒 聚酰胺-胺型树枝状聚合物 凝血因子Ⅷ 基因治疗
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精子载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达 被引量:2
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作者 尹俊 王鸿利 +8 位作者 王学锋 璩斌 储海燕 李稻 陈红兵 康文英 段宝华 戚正武 王振义 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第4期332-336,共5页
利用精子载体技术通过人工授精观察人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达。将含有人FⅧBD(B-domain deleted)cDNA的质粒pRC/RSV-hFⅧBD转染至小鼠精子,通过人工授精使母鼠受孕。新生小鼠出生后第4周,应用PCR筛查hFⅧBD cDNA阳性转基... 利用精子载体技术通过人工授精观察人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达。将含有人FⅧBD(B-domain deleted)cDNA的质粒pRC/RSV-hFⅧBD转染至小鼠精子,通过人工授精使母鼠受孕。新生小鼠出生后第4周,应用PCR筛查hFⅧBD cDNA阳性转基因幼鼠,取转有人FⅧBD cDNA幼鼠的血液检测血浆中的人FⅧ抗原和抗体,分别用Northern印迹和Western印迹检测脾、肝、肺和肾组织中人FⅧBD cDNA的转录和表达。结果发现,人工授精后20只受体母鼠7只受孕,共产下11只仔鼠,存活9只。PCR筛检出3只转有人FⅧBD cDNA的阳性鼠。3只阳性鼠血浆中的人FⅧ抗原量分别为8.65 ng/ml,7.84 ng/ml和8.44 ng/ml,人FⅧ的抗体均为阴性。Northern印迹和Western印迹检测显示3只F1代阳性幼鼠的脾、肝、肺和肾组织中均有人FⅧBD cDNA的转录和表达。结论提示,利用精子载体法可以制备转有人凝血因子Ⅷ基因的转基因小鼠,并表达人FⅧ蛋白,这为用精子载体技术生产转基因动物并将之作为生物反应器生产人凝血因子Ⅷ提供了实验依据。 展开更多
关键词 转基因动物 凝血因子Ⅷ 基因表达 精子载体技术 人工授精 血友病
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抗人肌红蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定 被引量:3
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作者 曾瑞云 朱鼎宏 +3 位作者 王红 郑佐娅 周芸 陶义训 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1996年第1期23-25,共3页
用纯化的人肌红蛋白(Mb)抗原免疫Balb/c小鼠通过细胞杂交技术。获得10株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.其中3株分泌IgG_1亚类抗体,2株为IgG_(2a),5株为IgG_(2b).间接ELISA法证明单抗腹... 用纯化的人肌红蛋白(Mb)抗原免疫Balb/c小鼠通过细胞杂交技术。获得10株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.其中3株分泌IgG_1亚类抗体,2株为IgG_(2a),5株为IgG_(2b).间接ELISA法证明单抗腹水与Mb起特异性反应,与人血红蛋白(Hb).人白蛋白(Alb)无交叉反应.免疫印迹检测结果表明,6株单抗腹水能特异性识别分子量17KD的Mb,抗Mb单克隆抗体的制备,对于急性心肌梗塞早期诊断很有应用价值. 展开更多
关键词 肌红蛋白 单克隆抗体 心肌梗塞 免疫诊断
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