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口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达
被引量：
7
1
作者
尤永进
葛艳
+5 位作者
陈波
饶忠
徐泉兴
朱彩珠
张强
卢永干
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期168-171,共4页
设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连...
设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。
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关键词
口蹄疫病毒
非结构蛋白
真核表达载体
克隆
表达
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职称材料
题名
口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达
被引量：
7
1
作者
尤永进
葛艳
陈波
饶忠
徐泉兴
朱彩珠
张强
卢永干
机构
上海市农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究分室
中国
农业
科学院兰州兽医
研究
所
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期168-171,共4页
文摘
设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。
关键词
口蹄疫病毒
非结构蛋白
真核表达载体
克隆
表达
Keywords
foot_and_mouth disease virus
non_structural protein
eukaryotic expression vector
cloning
expression
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达
尤永进
葛艳
陈波
饶忠
徐泉兴
朱彩珠
张强
卢永干
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
7
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