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影响基因工程猪生长激素复性效率的因素 被引量:1
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作者 于瑞嵩 李震 +2 位作者 刘惠莉 张平 张德福 《上海农业学报》 CSCD 2004年第1期26-29,共4页
对影响基因工程猪生长激素 (r pGH)体外复性效率的因素进行了研究 ,结果表明 :复性液组成、变性剂种类、复性方法的选择、变复性pH对r pGH体外复性效率有较大影响 ,β 巯基乙醇、谷光苷肽等添加剂对r pGH的体外复性影响不显著。提取包... 对影响基因工程猪生长激素 (r pGH)体外复性效率的因素进行了研究 ,结果表明 :复性液组成、变性剂种类、复性方法的选择、变复性pH对r pGH体外复性效率有较大影响 ,β 巯基乙醇、谷光苷肽等添加剂对r pGH的体外复性影响不显著。提取包含体用 6mol L盐酸胍溶解 ,空气氧化 80h后转入复性缓冲液中开始重组蛋白复性 ,采用透析复性法———复性缓冲液Ⅲ (0 .2 5 %NaHCO3,0 .2 %α 乳糖 ,0 .2 %甘露醇 ) ,pH9.0 ,透析 5~ 6次 ,可较好地恢复r pGH生物活性。复性后蛋白浓缩液进行去垂体大鼠试验 ,大鼠增重明显 ,表明得到了正确折叠的较高生物活性的r pGH。 展开更多
关键词 基因工程 生长激素 复性效率 影响因素
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口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达 被引量:7
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作者 尤永进 葛艳 +5 位作者 陈波 饶忠 徐泉兴 朱彩珠 张强 卢永干 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期168-171,共4页
设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连... 设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 真核表达载体 克隆 表达
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