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通过DNA改组技术获得高活性β-葡萄糖苷酸酶 被引量:5
1
作者 熊爱生 姚泉洪 +3 位作者 彭日荷 陈建民 李贤 范惠琴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期162-167,共6页
β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构... β 葡萄糖苷酸酶是在植物转基因中广泛应用的报告基因 .以质粒pBI12 1中的GUS基因为基础 ,利用DNA改组方法 ,经DNaseⅠ降解 ,PrimerlessPCR ,PrimerPCR对GUS基因进行了突变和改组 ,然后将改组的GUS基因连接到原核表达载体pG2 5 1中 ,构建了库容为 10 8的突变体库 .经过活性的筛选 ,得到活性提高的克隆 ,再以此为基础 ,经过新的改组、筛选得到活性大幅度提高的克隆GUS2 4 .基因测序显示 ,GUS2 4与GUS基因之间的同源性为 99 7% ,共有 6个核苷酸位点发生了改变 ,分别是 :379位的A突变为G ,396位的T突变为C ,711位的G突变为A ,95 8位T突变为C ,990位的T突变为C ,1649位的A突变为G .核苷酸序列推导的氨基酸序列显示 ,3个氨基酸发生了突变 ,12 7位的Ser突变为Gly ,32 0位的Trp突变为Arg ,5 5 0位的Asn突变为Ser.X gluc染色检测和荧光测活结果显示GUS2 4基因表达的 β 葡萄糖苷酸酶基较GUS基因表达产物活性提高 展开更多
关键词 β-葡萄糖苷酸酶 植物 转基因 报告基因 DNA改组技术 酶活性 体外分子进化
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霍山石斛细胞再生物的诱导和培养 被引量:6
2
作者 王亦菲 陆瑞菊 +2 位作者 孙月芳 周润梅 黄剑华 《上海农业学报》 CSCD 2004年第4期8-10,共3页
以野生霍山石斛 (DendrobiumhuoshanenseC .Z .TangetS .J .Cheng)茎尖及带芽点的节段为外植体 ,研究了基本培养基、各种激素对细胞团的诱导及分化作用 ,确定了以MS为基本培养基与 6 BA、NAA配合使用进行诱导 ;以大量元素减半 ,并降低... 以野生霍山石斛 (DendrobiumhuoshanenseC .Z .TangetS .J .Cheng)茎尖及带芽点的节段为外植体 ,研究了基本培养基、各种激素对细胞团的诱导及分化作用 ,确定了以MS为基本培养基与 6 BA、NAA配合使用进行诱导 ;以大量元素减半 ,并降低蔗糖浓度至 2 0 %的MS培养基进行分化 ,获得了大量再生芽簇。 展开更多
关键词 霍山石斛 细胞再生物 诱导 增殖 分化
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发根农杆菌Ri质粒转化康乃馨初步研究 被引量:2
3
作者 范惠琴 姚泉洪 +2 位作者 彭日荷 黄晓敏 李贤 《上海农业学报》 CSCD 2001年第1期35-38,共4页
利用具有Ri质粒的发根农杆菌 (Agrobacteriumrhizogenes)Pri15834对康乃馨组培苗的带叶茎节进行转化试验。转化后的外植体在K0 附加 50 0mg/L羧苄青霉素培养基上培养 2~ 3周后 ,受感染的伤口部位长出无向地性的毛状根 ,频率为 37.0 7%... 利用具有Ri质粒的发根农杆菌 (Agrobacteriumrhizogenes)Pri15834对康乃馨组培苗的带叶茎节进行转化试验。转化后的外植体在K0 附加 50 0mg/L羧苄青霉素培养基上培养 2~ 3周后 ,受感染的伤口部位长出无向地性的毛状根 ,频率为 37.0 7%。将毛状根切碎分别在K0 、K1、K2 培养基上继续培养 3周 ,毛状根在K0 上表现为无限生长 ,在K1上主要表现为长愈伤组织 ,频率为 51.4 2 % ,而在K2 上则主要表现为长绿苗 ,频率为 2 5%。 展开更多
关键词 康乃馨 发根农杆菌 RI质粒 毛状根 转化
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高通量筛选蛋白质突变体库方法的研究进展 被引量:1
4
作者 黄国庆 姚泉洪 《上海农业学报》 CSCD 2004年第2期20-23,共4页
定向进化已经被广泛用于修饰和加强蛋白质性能的研究。蛋白质突变体库筛选方法的改变和完善进一步加强了定向进化技术在理解和设计新蛋白质实验中的运用。近年来报道了许多新的高通量筛选方法 ,这些方法已经越来越多地用于蛋白质工程的... 定向进化已经被广泛用于修饰和加强蛋白质性能的研究。蛋白质突变体库筛选方法的改变和完善进一步加强了定向进化技术在理解和设计新蛋白质实验中的运用。近年来报道了许多新的高通量筛选方法 ,这些方法已经越来越多地用于蛋白质工程的研究 ,并且解决了此领域中一些具有争论性的前沿问题。 展开更多
关键词 蛋白质 突变体库 定向进化 高通量筛选 流式细胞术
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利用油菜单倍体茎尖筛选抗菌核病变异体 被引量:7
5
作者 王亦菲 黄剑华 +5 位作者 陆瑞菊 孙月芳 周润梅 周志疆 谢祝捷 刘成洪 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期355-359,共5页
用平阳霉素 (Pingyangmycin)对甘蓝型油菜品系 9885和 9841的单倍体茎尖进行诱变处理 ,以草酸作为选择压力 ,获得一批耐草酸性明显比原始品种提高的变异体。经大田抗菌核病性鉴定 ,筛选出
关键词 油菜 单倍体茎尖 筛选 抗菌核病变异体 平阳霉素 单倍体组织 草酸 抗病性
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大麦幼穗和油菜花蕾提取液对大麦花药培养反应的影响 被引量:4
6
作者 孙月芳 陆瑞菊 +2 位作者 王亦菲 周润梅 黄剑华 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2003年第2期19-22,共4页
以4个大麦品系为供试材料,比较了诱导培养基中添加不同发育时期和不同添加量的大麦幼穗提取液以及添加油菜花蕾提取液对大麦花药培养反应的影响,摸索促进诱导分化率提高的最佳方案。结果表明,诱导培养基中添加大麦幼穗提取液对花药反应... 以4个大麦品系为供试材料,比较了诱导培养基中添加不同发育时期和不同添加量的大麦幼穗提取液以及添加油菜花蕾提取液对大麦花药培养反应的影响,摸索促进诱导分化率提高的最佳方案。结果表明,诱导培养基中添加大麦幼穗提取液对花药反应率及绿苗分化率有明显的促进效果,单核期大麦幼穗提取液的效果优于二核期幼穗提取液的效果;添加油菜花蕾提取液对花培反应的影响优于单核期大麦幼穗提取液的影响。供试材料"SD"在添加单核期幼穗提取液的诱导培养基上的花药反应率和绿苗分化率分别是对照的1.6和1.7倍;材料"93T"的花药反应率和绿苗分化率分别是对照的1.7和3.0倍;诱导培养基中添加60g/L的油菜花蕾提取液的促进作用又优于添加60g/L的大麦幼穗提取液。 展开更多
关键词 大麦 幼穗 油菜花蕾 花药培养 花药反应率 绿苗分化率 培养基 提取液
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大麦离体培养花药对低温预处理及NaCl胁迫的反应 被引量:1
7
作者 孙月芳 陆瑞菊 +2 位作者 王亦菲 周润梅 黄剑华 《上海农业学报》 CSCD 2004年第4期5-7,共3页
以 3份大麦基因型作供试材料 ,探讨了离体麦穗低温预处理对花药离体培养愈伤组织诱导、绿苗分化及NaCl胁迫对花药培养愈伤组织分化形成绿苗的可能原因。依据研究结果 ,推测 :不同供体基因型的花药对低温预处理首先是一个冷胁迫反应 ,其... 以 3份大麦基因型作供试材料 ,探讨了离体麦穗低温预处理对花药离体培养愈伤组织诱导、绿苗分化及NaCl胁迫对花药培养愈伤组织分化形成绿苗的可能原因。依据研究结果 ,推测 :不同供体基因型的花药对低温预处理首先是一个冷胁迫反应 ,其次才是培养反应。认为制定适宜的低温预处理时间 。 展开更多
关键词 大麦 离体培养 花药 低温处理 盐胁迫 绿苗率
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